抗坏血酸(维生素C)的测定

维生素C（vitaminC）又称为抗坏血酸，一般水果、蔬菜中维生素C的含量均较高，不同的水果、蔬菜品种，以及同一品种在不同栽培条件、不同成熟度等情况下，其维生素C的含量都有所不同。测定维生素C含量，可以作为果蔬品质指标之一。

一、原理

维生素C具有很强的还原性，染料2，6-二氯酚靛酚（2，6-dichlorophenolindophenol）具有较强的氧化性，且在酸性溶液中呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。因此当用蓝色的碱性2，6-二氯酚靛酚溶液滴定含有抗坏血酸的草酸溶液时，其中的抗坏血酸可以将2，6-二氯酚靛酚还原成无色的还原型。但当溶液中的抗坏血酸完全被氧化之后，则再滴2，6-二氯酚靛酚就会使溶液呈红色。借此可以指示滴定终点，根据滴定用去的标准2，6-二氯酚靛酚溶液的量，可以计算出被测样品中抗坏血酸的含量

二、材料、设备及试剂 （一）材料： 水果或蔬菜 （二）设备：

1. 蒸发皿；2. 研钵一套；3. 移液管；4. 漏斗；5. 滤纸；6. 容量瓶；7. 微量滴定管。 （三）试剂： 1. 2％草酸。

2. 2，6-二氯酚靛酚（NaOC6H4NC6H2OCL,M=290.09)将50mg2，6-二氯酚靛酚燃料溶于200ml含有52mgNaHCO3的热水中，冷却后，稀释至250ml,装入棕色瓶内，放在冰箱里保存（因该染料性质不稳定，配制后超过一周必须重新配制）。

3.0.1mg/ml标准抗坏血酸溶液 将50mg纯抗坏血酸溶于少量2%草酸溶液中，然后用2%草酸溶液定容至500ml(使用前临时配置）。

三、实验步骤

（一）称取水果和蔬菜样品10g，放在研钵中加入2％草酸溶液约5ml研碎。通过漏斗将研碎的样品倒入一只100ml的容量瓶中，研钵及杵用2％草酸冲洗，并将洗液一并倒入该容量瓶中，最后用2％草酸定容到刻度，过滤，滤液备用。 （二）空白滴定

取2%草酸溶液10ml至蒸发皿中，以2，6二氯酚靛酚溶液滴定呈粉红色，并在30s内不褪色为终点，耗用的染色体积（ml）作为空白。

（三）染料的标定：取10ml标准抗坏血酸溶液至蒸发皿中，以2，6-二氯酚靛酚溶液滴定呈粉红色，并在30S内不退色为终点。计算1ml染料相当于抗坏血酸的mg数（重复3次，取

Ⅰ.滴定法

平均值）。

（四）取滤液10ml于蒸发皿中，用已标定过的2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至粉红色并且在30S内不褪色为止，记下染料的用量（重复3次，取平均值）。 四、计算

样品的维生素C含量（mg/100g）=

式中：V1—滴定样品所用染料ml数；V0—滴定空白所用染料ml数；A——滴定度，1ml染料溶液相当的抗坏血酸的mg数；W—样品的g数；VT—样品溶液定容后的总体积ml数；VS—滴定时吸取样品溶液的ml数。

(V1V0)AVT100

WVS 比色法

常规测定抗坏血酸的方法采用2，6—二氯酚靛酚滴定法，但因某些叶片中花青素量较

高，当用酸提取时呈红色，因而无法滴定。本实验采用二甲苯萃取比色法，则不受花青素的干扰。

原理

向一定量提取液中加入过量的2，6—二氯酚靛酚染料溶液与维生素C作用后，多余染料用二甲苯萃取比色。待测液中抗坏血酸的含量与二甲苯萃取的颜色呈线性负相关，即待测液中抗坏血酸含量越多，未被还原的染料就越少，二甲苯萃取的颜色也就越浅，由于水溶性的花青素不溶于二甲苯，因而不影响测定结果。

二、材料、仪器设备及试剂

（一）材料 新鲜包菜叶片、白萝卜等。

（二）仪器设备 1.722型分光光度计 2.容量瓶 3钵体 4不锈钢 5具塞大试管 （三）试剂 1.1%草酸。 2.2%草酸 3. 30%硫酸锌 4.15%亚铁

5.染料溶液 称取100mg2,6二氯酚靛酚和82mg碳酸氢钠溶于约60ml热水中，过滤定容至100ml容量瓶中，倒入棕色试剂瓶存放于冰箱内。使用时稀释4倍，此溶液每ml约相当于0.1mg的维生素。

6.抗坏血酸标准溶液（0.05mg/ml） 精确称取100mg分析纯100ml抗坏血酸，溶于1%草酸，定容至100ml,再从中吸取5ml,用1%草酸再稀释至100ml(标准溶液在使用前临时配置)。

7.二甲苯 分析纯（本法使用多的二甲苯可用20%NAOH中和后，蒸馏回收）。 三、实验步骤

1. 标准曲线 取具塞大试管6个，分别吸取抗坏血酸标准溶液0ml、1ml、2ml、2.5ml、3ml、4ml，用1%的草酸补充至4ml。各管中抗坏血酸含量相应为0mg、0.05mg、0.10mg、0.125mg、0.15mg、0.20mg。各管中加入染料溶液2ml,随即加入二甲苯5ml，迅速摇动约5min，静止后二甲苯与水层分离，将上层二甲苯萃取液轻轻倒入1cm比色杯中，在500nm波长下求测吸光度值，以二甲苯作空白调零，求测标准系列抗坏血酸mg数与相应的吸光度值的回应方程。

2 样品提取 取新鲜蔬洗干净，擦干，在玻璃上用不锈钢刀切碎混匀。称取2g样品放至研钵中，加入3ml2%草酸研磨至匀浆，然后将匀浆倒置至100ml容量瓶中，残渣用1%的草酸冲洗，洗液一并倒至容量瓶中，加入1ml30%硫酸锌，摇动容量瓶，再加入1ml15%亚铁，以除去脂溶性色素，再用1%草酸定容至刻度，摇匀后过滤到干净小烧杯中。

3测定 取上述提取液4ml（若抗坏血酸含量高，可适当减少取量，不足4ml的可用1%草酸补足至4ml)至具塞大试管中，依次加入染料2ml，二甲苯5ml,按照标准曲线的方法测定吸光度

四 结果计算

根据测定液的吸光度值，按回归方程计算出抗坏血酸的mg数，然后按下式计算样品中的抗坏血酸的含量，以每克鲜样含抗坏血酸mg数（mg/100g)表示。

XVT100WVS每克鲜样的抗坏血酸含量（mg/100g)=

式中：X-4ml提取液中含抗坏血酸的mg数；VT-提取液总体积（ml）;W-样品鲜质量（g）;VS -测定用样品体积（ml）

思考题

为了保证抗坏血酸含量测定准确应注意些什么？