组织病理切片以及HE染色

组织病理切片以及 HE 染色

（一 ）实 验原 理 :苏 木 素 -伊 红 染 色 （hematoxylin-eosin staining,HE 染色 ）能较好地显示组织结构与细胞形态 ,可

用于 观察、 描述正常与病变组织的形态学 ,而且 HE 切片可较长时 间保存 ,被称为常规染色方法。

（二 ）实验步骤 :

一、制作切片

1、取材、固定 :取小鼠肾脏组织适当大小 ,并且放入盛有固定 液

的小瓶中保存。

2、组织的脱水、透明、浸蜡与包埋 组织固定后还需经过脱水、透

明、浸蜡等过程才能制成 蜡块 ,进行石蜡切片。 脱水就是指用某些溶媒置换组织内水分 的过程。 组织脱水后 ,必须经过一种既能与酒精相混合又能溶 解石蜡的溶剂 ,通过这种溶剂的媒介作用 ,使石蜡浸入组织 块。在此过程中 ,因组织块中的水分被溶剂所取代 ,组织块变 得透亮 ,因此称之为透明。 组织染色后也要进行透明。 最常用 的透明剂为二甲苯 ,处理时间为 30min 左右。

组织经透明后在溶化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。用其 她浸透剂 （如火棉胶、碳蜡与明胶等 ）渗入组织内部的过程称 为浸透或透入。 为使石蜡充分渗入组织块中 ,常需经过 3 小时 的浸渍 ,期间需更换 3 次石蜡。一般用于浸蜡的石蜡熔点为

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52-56 C。

组织块经过浸蜡或浸透 ,用包埋剂 （石蜡、火棉胶、碳蜡 与树脂等 ）包起的过程称包埋 ,包埋后便制成含组织的块。这 种包埋块可使组织达到一定的硬度与韧度

,有利于切成薄片。

石蜡包埋就是病理日常工作中最常用的包埋方法。用于包埋 的石蜡熔点一般为

60 C左右。但在有些情况下，如某些酶染

色时 ,则需采用低温石蜡包埋 ,以保存组织内酶的活性。

3、切片、制片

石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机与平推式切片 机,以前者为多用。切片厚度一般为

3-5 ym。切片时先将组织

片平摊于一块玻璃上 ,迅速滴加 30％的酒精水溶液使组织片 完全展开，再移入40 C恒温热水器中。也可直接将组织切片 移入40

C的恒温热水器中，待组织片完全展开后将其贴附于 载玻片上，

经56-60 C烤片30-60min后即可进行染色。

二、 HE 染色

1、 二甲苯脱蜡2X10 min;

2、 无水乙醇洗去二甲苯 2X5min;

3、 95％、 80％乙醇各 l0 min, 自来水洗 l min（ 不要让急水

直 接冲至载玻片上的组织 ）,蒸馏水洗 1min;

4、 苏木素染色 4 min,自来水洗2 min;

5、 1 %盐酸酒精分化20 s（镜下控制），自来水洗2 min; 6、 1 %稀氨水返蓝30s（镜下控制）,自来水洗2分钟，蒸馏水洗

组织病理切片以及 HE 染色

1min;

7、 伊红染色 90s;

& 80%乙醇脱水10s,95%酒精10s,无水乙醇5min; 9、 无水乙醇 10min; 10、 二甲苯 2X10 min;

11 、中性树胶或加拿大树胶封片。

（三）实验结果 :细胞核呈蓝色 ;细胞浆、肌肉、结缔组

织、 红细胞与嗜伊红颗粒呈不同程度的红色。钙盐与各种微生物 也可染成蓝色或紫蓝色。

（四）实验分析 :HE 染色时病理学中常用的一种诊断方法 通

常将病理切片染色后再在显微镜下观察组织的病理学变 化,从而做出病理学诊断。