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亲属肾移植后群体反应性抗体的调查

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中闺组织工程研究与临床康复彩74誉第5 2010—01—29出版 Joumal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research January 29,2010 Vo1.14,No.5 亲属肾移植后群体反应性抗体的调查术★ 贾保祥,徐秀红,田野 Panel reactive antibody following living renal transplantation Jia Bao-xiang,Xu Xiu—hong,Tian Ye Abstract BACKGR0UND:It remains poorly understood regarding the incidence of panel reactive antibody(PRA)production and its Department of influence to renal function and long—term survivaI in China. Urology,Beijing Friendship Hospital OBJECTIVE:To investigate the incidence of PRA after living renal transplant,so as to provide reference for predicting long。term Capital Medical renal surviva1. University,Beijing METHODS:A total of 54 patients who received living renal transplantation in Beijing Friendship Hospital from March 2005 and 100050.China October 2007。were selected.PRA.serum creatinine and urea nitrogen Ieve1 were detected 1_2 years after transplantation.PRA Jia Bao-xiang★. assay was conducted using One Lambda ELISA HLA—I+II antigen tray.Serum creatinine and urea nitrogen data were offered Master,Chief by clinical laboratory. 。 technician. RESULTS AND CONCLUSION:A total of 1 2.96%(7/54)patients showed PRA positive after transplantation,with HLA—Il Department of antibody positive in 6 patients.and HLA-I+II antibody positive in 1 patient.In these 7 patients.6 underwent primary Urology,Beijing Friendship Hospital transplantation.and PRA negative before transplantation;1 patient underwent transplantation for the second time,and HLA-II Capital Medical antibody positive before transplantation Creatine and urea nitrogen Ieve1 were abnormaIin 1 patient with HLA-I+lI antibody University,BeSng positive and 2 patients with HLA—II antibody highly positive.Creatinine and urea nitrogen levels were normal in 4 patients with 100050.China Iow IeveI HLA-II antibody.Results show that HLA—I+11 antibody positive and high leveI HLA-lI antibody affect renaI function baoxiangjia@sina C0m in living renaI recipients.but Iow leveI HLA-II antibody has no effect on renaI function. Supported by:the Jia BX,Xu XH,Tian Y.Panel reactive antibody following living renal transplantation.Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Scientific Research Linchuang Kangfu.201O;14(5):799-802. [http://www crter.ca http://en.zglckf.com】 Foundation of Beijing Friendship Hospital 摘要 Received:2009‘07 25 背景:亲属-肾移植后产生群体反应性抗体的频率如何,对术后移植肾功能和长期存活是否有影响,目前国内尚无相关报道。 。p : 。。。。08。25 目的:调查亲属肾移植后群体反应性抗体产q 的频率,为预测亲属肾移植长期存活提供参考资料。 方法:纳入2005—03/2007 10收治的亲属肾移植患者54例,分别于移植后一两年内再次检测群体反应性抗体及血肌酐、 尿素氮浓度。群体反应性抗体检测采用美国One lanmbda公司提供的酶联免疫吸附法筛选HLA-I类、II类混合抗原板。 血肌酐和尿素氮检测数据由检验科提供。 结果及结论:54例亲属肾移植患者中有7例移植后产生了抗体,占12.96%。其rr『6例产牛了抗HLA-II类抗体,仅1例产 生了抗HLA.I,II类抗体。在此7例患者中6例为初次肾移植, 肾移植前群体反应性抗体均阴性;1例为再次肾移植, 移植前抗HLA.II抗体阳件。1例具有抗HLA-I+II类抗体和2例高强度抗HLA-lI类抗体的患者血肌酐和尿素氮浓度均超 过正常水平,而另外4例出现低水平抗HLA-II类抗体的患者血肌酐和尿素氮浓度则在正常水平。结果提示,具有抗HLA— I+II类抗体和高效价抗HLA.II类抗体影响亲属肾移植患者的肾功能,而低效价的抗HLA-II类抗体并不影响亲属移植。肾功 能。 关键词:亲属肾移植;群体反应件抗体;器官移植;排斥反应:预测 doi:10.3969 ̄.issn.1673-8225.2010.05.010 贾保祥,徐秀红,144野.亲属肾移植后群体反应性抗体的调查【J】_中围组织工 研究与临床康复,2010,14(5):799-802 [http:llwww.cder.org http://cn.zglckf.com】 成是否减少仍是一项可探讨的课题,本文将就 蔫凳黢螽耋 0引言 此问题进行初步探讨。 泌10尿005科0’北京市 贾保祥★,男, 群体反应性抗体(PRA)的检测是预测肾移 1对象和方法 1954年生,北京 市人,汉族,1995 植过程中发生超急性排斥反应和移植后急性排 年首都医科大学 毕业,硕士,主任 斥反应的良好指标。超急性排斥反应绝大多数 设计:横断面调查。 技师,主要从事器 官移植配型和肾 为肾移植受者体内预存抗供者特异性抗体,而 时间及地点:于2007—01/2008—03在北京 移植术后排斥的 研究。 在移植后发生的急性排斥反应也大多与抗体有 首都医科大学附属北京友谊医院泌尿科肾移植 baoxianqJia@ sina.com— 关,因此群体反应性抗体在器官移植中,特别 研究室完成。 t{,图分类号:R617 是在肾移植中得到广泛的重视。在亲属肾移植 对象:2005—03/2007—10收治亲属肾移植 文献标识码:A 文章编号:1673-8225 中由于有良好的供受者人类白细胞抗原(HLA) 患者54例,男38例,女1 6例;移植受者年龄9~51 (201O)O5-00799—04 配型和亲缘关系,因而发生超急排斥反应和急 岁,移植供者年龄20~61岁。纳入病例对试验 收稿日期:2009・07—25 性排斥反应的概率降低。但肾移植后PRA的生 方案均知情同意,且得到医院伦理道德委员会 修回日期:2009-08-25 (20090429014/G A) lSSN 1673-8225 cN 21—1539/R C0DEN:ZLKHAH 799 批准。 方法: PRA检测:采用美国One lambda公司提供的酶联免 疫吸附法筛选HLA-I类、II类混合抗原板。操作步骤为: ①用提供的去离子水0.1或0-2 mL溶解对照血清。②每 板取8 uL匕述溶解的对照血清,用抗体稀释液按1:1 0 比例稀释。混匀后加入干板第1行C.H4:L,每孔1o IJL。 ③用提供的抗体稀释液按1:2稀释每 一份待测血清,然 后,加稀释血清于3~12行。④室温下孵育1 h。⑤用力 将干板中的血清甩出,并在垫有纸巾的实验台上甩击干 板两三次。⑥用蒸馏水稀释所提供的wash buffer 1: 1O。然后将稀释的wash bu仟er7J睡0干板上。淹没全部反 应孔即可。轻轻晃动干板后倾出洗液。用力甩击干板两 三次,重复洗板1次。⑦用antibody diluent稀释所提供 的Enzyme-Conjugated Antibody(抗人IgG)l:1 00。然 后每 ̄LDI]10 uL。轻轻晃动干板,室温孵育40 min。⑧ 如步骤5,6,甩击干板,洗板两三次。将残存液体尽量 甩出。⑨将所提供的Enzyme Substrate A、B对半混合。 然后每TLDH10 uL。⑩避光孵育20~25 min(室温)。①待 阳性对照变成深蓝色后,每 ̄LDn5 wL Stop Reagent。0 根据阴性和阳性对照颜色深浅,决定检测血清结果,阳 性为蓝色,无色为阴性。结果采用One lambda公司提 供的电脑软件分析PRA ̄;H性血清中的HLA抗体特异性。 血肌酐和尿素氮检测:肾移植患者血肌酐检测值由本 院检验科提供,血肌酐正常值为53~115 Iamol/L,尿素 氮正常值为1.43~7.14 mmoI/L。 主要观察指标:亲属肾移植后PRAI;H性患者抗体强 度及血肌酐、尿素氮浓度。 设计、实施、评估者:设计、实施、评估均为本文 作者,所有作者均经过专业培训。 2结果 2.1 亲属肾移植后PRA抗体产生的频率亲属肾移植 后的54例患者中有7例患者产生了抗HLA抗体,占 12.96%。肾移植后产生抗HLA抗体的患者全部为男性, 其中父一子3例;母一子2例;姐一弟1例;弟一兄1例。 2.2亲属肾移植后PRA抗体产生的类型 54例亲属肾 移植患者中有7{ ̄JJ患者移植后产生了抗体,其中6例产生 了抗HLA-II类抗体,仅1例产生了抗HLA-I、II类抗体。 在此7例患者中6例为初次肾移植,且肾移植前PRA均阴 性;1例为再次肾移植,移植前抗HLA-II抗体阳性。6 例肾移植前抗HLA阴性,移植后产生了抗HLA的患者, 均在肾移植后一两年后产生。由于产生的抗体特别是抗 HLA.II抗体并不是立即对移植 肾造成重大伤害,而是 一 种渐进式的发展,其原因可视为免疫抑制剂的应用和供 受者HLA抗原的配合率等起到一定的作用。 8O0 贸保群.等 亲辑肾移植岳辩体反虚性抗体的调奁 2.3亲属肾移植后PRA阳性患者抗体强度及血肌酐、 尿素氮浓度的比较见表1。 从表1中可见,同时出现抗HLA-I+II类抗体和高 强度抗HLA.II类抗体的患者血肌酊和尿素氮浓度均超 过正常水平,而出现低水平HLA.II类抗体的患者血肌酐 和尿素氮浓度则在正常水半。同时临床上根据临床症 状、相关检验、B超及病理学检查均证明血肌酐和尿素 氮浓度均超过正常水甲的3例亲属肾移植患者已发生排 斥反应。病理检查发现3例发牛排斥反应的患者均表现 为肾小管上皮细胞颗粒及空泡变性,灶状萎缩,肾问质 弥漫性水肿,弥漫性淋巴和 核细胞浸润,符合移植肾 急性排斥反应。 3讨论 众所周知,由于目前移植。肾的来源困难,而亲属。肾 移植的 泛开展为此填补了部分移植受者等待移植的 时间。因而亲属活体肾移植手术近年来呈现逐渐增多的 趋势。 在亲属肾移植中由于有良好的供受者HLA配型和 亲缘关系, 而普遍认为亲属移植后肾功能及肾的长期 存活较无关肾移植效果好。但亲属移植后产生群体反应 性抗体的频率如何,对术后移植肾功能和长期存活是否 有影响,日前国内尚无相关报道。了解亲属肾移植后患 者产生抗HLA抗体的频率及对移植后肾功能的影响,对 预测亲属移植。肾排斥具有重要临床意义。血肌酐和尿素 氮水平的动态变化与肾功能有关,因此本文将血肌酐和 尿素氮水平作为反映移植肾功能的重要指标。 妇女妊娠、输血、接收器官移植、长期透析是产生 PRA抗体的重要因素 J,器官移植受者在受到供者HLA 免疫致敏后,外周血中容易产生群体反应性抗体 ,是 器官移植后影响。肾功能的主要因素之一,对移植器官的 存活率也有显著影响 珥J。亲属肾移植虽然配型较好且有 RO.Box 1200,Shenyang 110004 cn.zglckf,com 贾傈祥 等 荣辑肾移植磊赫体受 妈-抗{奉的谪 亲缘关系,fR也会, 生抗HLA抗体。在本文中,54例亲 属肾移植患者中有7例患者产生了抗HLA抗体,占 12.96%(7/54)。其中6例产生了抗HLA-II类抗体,1例 产牛了抗HLA.I,II类抗体。此前在研究非亲属肾移植 后患者中发现,1781'70患者中移植后产生抗HLA抗体有 58例,占32.58%(58/178);34例患者发生移植肾排斥, 占抗HLA抗体阳性的患者58.62%(34/58) 】。由此可见, 亲属肾移植患者由于供受者HLAI ̄,合率的提高和亲缘 关系,肾移植后产生的抗HLA抗体远远低于非亲属。肾移 植患者,而发生移植肾排斥反应的发生率也远低于非亲 属肾移植患者。 肾移植患者抗HLA抗体的存在是影响移植后肾功 能和移植肾长期存活的重要因素之 睁16]。Meng ̄ 7J 对73例移植前PRAI;E!性和81例PRA阴性的肾移植患者 术后2年 肾存活率及肾功能情况做了比较,发现移植前 PRAFH性患者的肾存活率及肾功能明显低于PRA阴性 患者,且术前PRA I类、II类同时阳性的患者的肾存 活率更糟。Nicknam等_]驯的研究也显示,移植前PRA I 类阳性患者的肌酐高于正常水半。 目前供者特异性抗体己成为肾移植免疫致敏中研 究的热点之一,大量研究证实动态监测患者抗HLA抗 体,尤其是供者特异性抗体,会对移植肾的长期存活造 成极大的危害。Lachmann等 圳跟踪了移植后1 014例患 者,移植后5年的时候检测供者特异性抗体(DSA),其中 有31%的患者为DSA阳性,其5.5年时的存活率为 49%(vs.83%),41 ̄DSA的患者的存活率70%(vs.83%), 结论是移植后HLA抗体的产生对肾功能有极其危害性 影响,DSA对于肾移植物的存活率有影响,因此有必 要术后常规跟踪监测HLA抗体以提高肾存活率。Gupta 等 UJ追踪了121例 肾移植患者,其中38例为供者特异性 抗体阳性,38例中有16例DSAI ̄H性,22例非DSA,结 果发现DSA对短期肾存活和功能影响不大,但会增加移 植肾长期存活失败的危险性。国内有报道提出针对供肾 者特异性HLA抗体可能是引起移植 肾免疫反应的原冈 之一一,HLA.I类抗体与免疫反应关系较为密切 。国内 还有一‘篇研究发现,肾移植前血清DSAI;H性的受者,急 性排斥反应发生率(63.2%)远高于DSA阴性的受者 (14_7%)(P<0.01);移植后DSAI ̄H性的受者排斥反应的 发牛率也升高;DSA随着PRA水平的升高阳性率也增加 fP<0.01) 。 对于HLA.I类抗体和II类抗体对移植后肾功能 和长期存活的影响,不同的研究有不同的结论。Billen 等 圳1997/2001跟踪了165例肾移植患者,有32 ̄(19%) 为DSAI ̄H性,其中16例I类阳性,15例II类阳性,1例 I,II类同时阳性。移植后77%患者都未发生急性排斥 反应。跟踪8年的肾移植存活率为56%。然而,I类DSA 阳性患者的长期存活率较差:5年存活率41%f . 1SSN 1673.8225 cN 21.1539/R CoDEN:ZLKHAH 《 w ∞珊伽 70%),10年存活率为27%(vs.56%)。II类DSA ̄H性对 长期存活率无明显影响,II类DSA抗体在影响 肾移植存 活率中的作用仍需要进‘步的研究。Campos等 刮则在 研究中报道,HLA II类抗体是移植后 肾功能衰退的主 要原因,并提出移植后长期监测HLA II类抗体以保证 肾的长期存活。Langan- ̄ 也提出肾移植后HLA-II类 抗体与。肾移植器官的存活有关,有HLA II类抗体及 CD30的。肾移植患者器官移植失败的危险性最高。而国 内的一篇研究采用免疫荧光液相芯片(Luminex)技术检 测8例肾移植患者移植前HLA基因分型、移植前和移植 后的特异性HLA抗体改变,结果发现肾移植前受者 HLA.II类DSA抗体的存在会导致移植肾急性排斥,并 提出患者在随访期间应鉴定其DSA与NDSA类型,尽早 采用有效的治疗方法,减少移植肾功能减退及排斥反 应的发牛和发展 引。在本文中可见,具有抗HLA—I、 II类抗体和具有抗HLA.II类抗体强度高的亲属肾移植 患者血肌酐和尿素氮水平比抗HLA.II类抗体强度较弱 的患者高。由此可见,低水平的抗HLA-II类抗体并不影 响亲属移植肾功能。而且 般认为供者特异性I类抗体 不利于移植器官的长期存活 ,而低浓度的抗HLA-II类 抗体不会产牛危害性影响 圳。 动态监测肾移植患者体内抗体的存在是当前预防 移植肾排斥重要的手段。Li等 研究了87例活体肾移植 患者,移植前及移植后6个月均检 ̄JPRA抗体及肾功能, 并监测患者的排斥情况及DSA4 ̄H其他非特异抗体的出 现。在移植前及移植后PRA检测中,47例(54%)表现为 PRA阴性,15例(17%)表现为移植前、移植后阳性;12 例(14%)表现为移植前阳性、移植后阴性;13例(15%) 表现为移植前阴性,移植后阳性,在.LFL13例患者中,有 5例(38%)检测 ̄JDSA,8例(62%)检测到非供者特异性 抗体。供者特异性抗体阳性的患者有80%出现了排斥症 状。移植后出现抗体的患者,其5年肾存活率为69%, 而术前术后抗体均为阴性的患者,5年肾存活率为96%, 移植前阳性移植后阴性的患者,5年肾存活率88%,移 植前移植后均阳性的,5年。肾存活率为93%。因此认为 肾移植患者若在移植后产生了新的抗体,尤其是供着特 异性抗体(尽管移植前PRA] ̄性),其发生排斥的概率较 高。 总之,通过本文证实,亲属。肾移植患者术后也会产 牛抗HLA抗体,在大多数情况下,抗HLA-II类抗体的出 现并不影响移植肾的功能。而且在PRAI ̄R性/血肌酐高于 正常值患者中同样有一定的肾功能可维持其生理代谢, 但表明抗HLA抗体的出现,对移植肾的功能可能会有渐 进性的损坏作用,特别是肾移植后产生高效价的抗HLA. II类抗体或HLA.I+II类抗体。动态监测术后HLA抗体 的产生,有利于及早发现并采取及时开展临床治疗。临 床上去除抗体致敏患者的抗HLA抗体的方法很多,这些 801 霉Ⅳw CRTER伽 方法包括静脉注射免疫球蛋白、药物治疗(吗替麦考酚 酯、西罗莫司、阿仑单抗、利妥昔单抗)、血浆置换、蛋 白质A免疫吸附等 J。然而,各种去除抗体的方法均 有其局限性,往往并不能根除抗体,而良好的供者一受 者HLA配型,密切监测移植前、后患者的抗HLA抗体是 移植后良好肾功能和移植。肾长期存活的重要保证。 4参考文献 Wang B,Feng XS,Xue WJ,et a1.Disi Junyi Daxue Xuebao. 2001;22(181:1695-1696. 王彬,冯新顺,薛武军,等.肾移植受者HLA体液致敏 素-J-第四军医 大学学报,2001,22(18):1695-1696. Li Liu ZG.Chen JR.et al Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu vu Linchuang Kangfu.2008;12(18):3561-3565 李留洋,刘占国,陈剑荣,等.肾移植受者人类白细胞抗原体液免疫致 敏状态的监测及临床意义[J].中国组织T程研究 j临床康 复,2008,12【18):3561—3565 Yi HP Yu LX.Guangdong Yixue.2008;29(10):1727-1728. 易海鹏,于 新肾移植群体反应性抗体检测及其临床意义[J],’ 东医学,2008,29(10):1727-1728. 【4】 Barrel G,Wahrmann M.Exner M,et al Determinanfs of the complement.fixing ability of recipient DresensitizatiOn against HLA antigens.Transplantation.2007:83(6):727・733. 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