中国眼耳鼻喉科杂志２０１３年１１月第１３卷第６期 ３６５ 基础研究 基质金属蛋白酶及其组织抑制剂在结膜 松弛症成纤维细胞中的表达△ 韩竹梅张兴儒柯梅青倪振华 符之碹李青松项敏泓 【摘要】 目的探讨基质金属蛋白酶１、３（ＭＭＰ．１、ＭＭＰ．３）及其组织抑制因子１、３（ＴＩＭＰ一１、ＴＩＭＰ．３）在结 体外原 膜松弛症（ＣＣｈ）成纤维细胞培养上清液中的表达，揭示四者表达水平变化与ＣＣｈ的内在联系。方法代培养ＣＣｈ成纤维细胞，取第３—６代细胞，以２．５×１０ 个／ｍＬ浓度接种于２４孔板中培养，２４ ｈ后提取细胞上 清液，采用ＥＬＩＳＡ检测ＭＭＰ一１、ＭＭＰ一３、ＴＩＭＰ－１、ＴＩＭＰ－３的表达水平。不同组间比较采用单因素方差分析。结 果ＭＭＰ一１的表达：ＣＣｈ组成纤维细胞的蛋白浓度明显高于正常对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。 ＭＭＰ－３的表达：ＣＣｈ组成纤维细胞的蛋白浓度明显高于正常对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。ＴＩＭＰ．１的 表达：ＣＣｈ组成纤维细胞的蛋白浓度与正常对照组比较，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。ＴＩＭＰ一３的表达：ＣＣｈ 组成纤维细胞的蛋白浓度明显低于正常对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论成纤维细胞ＭＭＰ．１／ ＴＩＭＰ一１及ＭＭＰ一３／ＴＩＭＰ一３的表达失衡可能参与了ＣＣｈ的发生、发展。（中国眼耳鼻喉科杂志，２０１３，１３：３６５— ３６７） 【关键词】结膜松弛症；成纤维细胞；基质金属蛋白酶 Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ（ＭＭＩＰｓ）ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ（ＴＩＭＥｓ）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｉｆｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｏｆ Ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｏｃｈａｌａｓｉｓ ＨＡＮ Ｚｈｕ—ｍｅｉ。ＺＨＡＧＮ Ｘ ｇ—ｒｕ，ＫＥ Ｍｅｉ—ｑｉｎｇ，ＮＩ Ｚｈｅｎ—ｈｕａ ，ＦＵ ｚｈｉ—ＸＩｌＡＴＬｎ，ＬＩ Ｑｉｇ—ｎｓｏｎｇ，ＸＩＡＮＧ Ｍｉｎ—ｈｏｎｇ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，Ｐｕｔｕｏ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｆｉｌｆｉａｔｅｄ ｔｏ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｉａ ｎｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０（ ６２． Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＺＨＡＮＧ Ｘｉｎｇ．１３１，Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｘｉｎｇｒｕ９２８＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＭＰ一１，ＭＭＰ一３，ＴＩＭＰ一１ ａｎｄ ＴＩＭＰ一３ ｉｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ ｏｆ ｉｆｂｒｏｂｌｓｔｓ ｏｆ Ｃｏｎｉｕｎｃｔａｉｖｏｃｈａｌａｓｉｓ．Ｔｏ ｒｅｖｅａｌ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｌｉｎｋ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｆｏｕｒ ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ ｗｉｔｈ ＣＣｈ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｒｅｅ ｔｏ ｓｉｘ ｐａｓｓａｇｅ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｔａｋｅｎ ｆｒｏｍ ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ＣＣｈ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ． Ｔｈｅｙ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｗｉｔｈ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ２．５×１０ ／ｍＬ ｉｎ ２４ ｈｏｌｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｐｌａｔｅ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｃｅｌｌ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ａｆｔｅｒ ２４ ｈ．ＥＬＩＳＡ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＭＰ一１．ＭＭＰ一３．ＴＩＭＰ一１ ａｎｄ ＴＩＭＰ一３．Ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｃｏｍｐａｒｅ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｍｏｎｇ ｇｒｏｕｐｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＭＰ一１：ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＣＣｈ ｆｉｂｒｏｂｌｓｔａｓ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｈｉ出ｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＭＰ－３：ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＣＣｈ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ （Ｐ＜０．０１）．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＩＭＰ．１：ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＞０．０５）ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｅｔｗｅｅｎ ＣＣｈ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＩＭＰ－３：ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＣｈ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｉｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＭＰ．１／ＴＩＭＰ—ｌ ｎｄ ＭＭＰ一３／１１ＭＰ．３ ｉａｍｂａｌａｎｃｅｓ ｍａｙ ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ＣＣｈ．（Ｃｈｉｎ Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ ａｎｄ Ｏｔｏｒｈｉｎｏｌａｒｙｎｇｏ１．２０１３，１３：３６５—３６７） 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 Ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｏｃｈａｌａｓｉｓ；Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ；Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔｌａｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ 结膜松弛症（ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｏｃｈａｌａｓｉｓ，ＣＣｈ）是年龄相 ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ，ＴＩＭＰｓ）表达失衡有关 。ＭＭＰｓ可降解细 胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｉｒｘ，ＥＣＭ），ＴＩＭＰｓ是特异性 关性老年人常见眼病¨Ｊ，ＣＣｈ的发病机制与球结膜成 纤维细胞功能发生改变 引，球结膜组织弹力纤维减 ＭＭＰｓ抑制剂，二者共同维持ＥＣＭ的合成及降解平 衡。２０１２年１～１２月通过检测ＣＣｈ球结膜成纤维细 少，胶原纤维融解 ４。，球结膜厚度变薄 ，及球结膜 组织中基质金属蛋白酶（ｍａｔｉｒｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ， 胞中ＭＭＰｓ及ＴＩＭＰｓ的表达，旨在进一步探讨结膜松 ＭＭＰｓ）的表达过强 ，球结膜成纤维细胞ＭＭＰｓ与基 质金属蛋白酶抑制剂（ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｍｅｔａｌｌｏ－ 弛症的发病机制。 基金项目：上海市卫生局科研基金资助项目（２０１２４４１５） 作者单位：上海中医药大学附属普陀医院眼科 中心实验室上海２０００６２ 通讯作者：张兴儒（Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｘｉｎｇｒｕ９２８＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ） ３６６ １材料与方法 １．１材料ＣＯ 培养箱（ＳＡＮＹＯ公司，日本），超净工 作台（苏净集团安泰公司），倒置显微镜（ＷＩＬＯＶＥＲＴ 公司，德国），低温高速离心机（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司，德 国），酶标检测仪（ＢＩＯ．ＲＡＤ公司，美国），ＤＭＥＭ培养 基、青霉素．链霉素溶液、０．２５％胰蛋白酶溶液（上海博 谷生物科技有限公司），成纤维细胞生长添加物（ＦＧＳ） （北京裕恒丰生物科技有限公司）。ＭＭＰ一１、ＭＭＰ一３、 ＴＩＭＰ １、ＴＩＭＰ．３ ＥＬＩＳＡ试剂盒（上海明睿生物有限公 司）。收集上海中医药大学附属普陀医院眼科手术室 ２０１２年１～１２月病例资料。ＣＣｈ组：随机选择ＣＣｈ手 术切除的松弛结膜１３例（１３眼），按照Ｚｈａｎｇ 的分级 标准，Ⅱ级２眼，Ⅲ级８眼，Ⅳ级３眼，年龄５４～８２岁， 平均（６８．０８±８．４２）岁。正常对照组：为年龄配对的 单纯白内障超声乳化手术的病例１６例（１６眼），年龄 ５６～８５岁，平均（７０．１４±８．４３）岁。均获得上海中医 药大学附属普陀医院伦理委员会批准及患者知情 同意。 １．２方法 １．２．１ 细胞培养 。。 将切取的球结膜组织放人准备 好的无菌装有９ ｇ／Ｌ生理盐水的一次性药碗内漂洗３ 次，除去血污；用眼科显微剪刀将其剪成０．５～１ ｍｍ 大小组织块，平铺于六孔板内，翻转底朝上放置３７℃、 体积分数５％ＣＯ 培养箱中培养，观察６孔板内组织块 近干；翻转６孔板底朝下，缓慢加入３ ｍＬ含１０％体积 胎牛血清和青霉素一链霉素、０．１％ＦＧＳ的ＤＭＥＭ培养 液，且勿使组织浮起，继续培养；每３天换液１次，在倒 置相差显微镜下观察接种组织块贴壁及培养液情况。 经过倒置显微镜对细胞形态观察及免疫荧光和流式细 胞术对成纤维细胞特异性蛋白的检测，鉴定为成纤维 细胞。 １．２．２ ＥＬＩＳＡ检测细胞上清液中ＭＭＰ一１、ＭＭＰ．３、 ＴＩＭＰ—ｌ、ＴＩＭＰ一３的质量浓度 选取３～６代呈对数生 长期细胞，将生长至９０％的细胞消化后，用含１０％体 积胎牛血清的ＤＭＥＭ培养液制成细胞悬液，以２．５× １０ 个／ｍＬ浓度接种于２４孔板中，每孔为ｌ ｍＬ。培养 ２４ ｈ后，弃去原培养液，加无血清ＤＭＥＭ培养液，每孔 １ ｍＬ，每组设３个复孑Ｌ，然后置于３７ ｃＣ，体积分数为 ５％ＣＯ 培养箱中，培养４８ ｈ后，收集各孔培养上清 液，高速离心机（相对离心力为１５２×ｇ）离心２０ ｍｉｎ， 取上清液，置于无菌ＥＰ管中，分装后一２０℃冷冻保存， 用ＥＬＩＳＡ检测其中ＭＭＰ．１、ＭＭＰ．３、ＴＩＭＰ．１、ＴＩＭＰ一３浓 度，按试剂盒说明书操作。用酶标仪在４５０ ｎｍ波长处 测量各孑Ｌ的吸光度（Ａ 。）ＯＤ值，利用标准品ＯＤ值及 其相对应的浓度，以ＯＤ值为横坐标，浓度为纵坐标， 作一标准曲线并用公式表现出来，将样本的ＯＤ值代 入计算即可得出样本浓度。 １．３统计学方法统计学处理采用ＳＰＳＳ１６．０统计学 软件进行统计，各组检测指标数据资料经ｗ检测呈正 态分布，经Ｌｅｖｅｎｅ检验方差，检测平均浓度值用以均 数．４－标准差表示，采用单因素方差分析，以Ｐ＜０．０５ 作为差异有统计学意义。 ２ 结果 采用ＥＬＩＳＡ检测，得到各个标本中ＭＭＰｓ、ＴＩＭＰｓ 浓度表达。ＭＭＰ一１的表达：ＣＣｈ成纤维细胞的浓度明 显高于正常对照组，差异有统计学意义（Ｆ＝０．４０，Ｐ＜ ０．０５）。ＭＭＰ一３的表达：ＣＣｈ成纤维细胞的浓度明显 高于正常对照组，差异有统计学意义（Ｆ＝０．７９，Ｐ＜ ０．０１）。ＴＩＭＰ－１的表达：ＣＣｈ成纤维细胞的浓度与 常对照组比较，差异无统计学意义（Ｆ＝１．０５，Ｐ＞ ０．０５）。ＴＩＭＰ一３的表达：ＣＣｈ成纤维细胞的浓度明显 低于正常对照组，差异有统计学意义（Ｆ＝０．７４，Ｐ＜ ０．０５）。见表１。 表１ 两组成纤维细胞中ＭＭＰ－１、ＭＭＰ－３、ＴＩＭＰ－１、 ＴＩＭＰ－３浓度比较（ｘ±Ｓ，ｎｇ／ｍＬ） 注： 示与ＣＣｈ组比较，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５） ３讨论 随着人口老年化加快，ＣＣｈ的患病人数将不断增 多。Ｚｈａｎｇ等¨ 报道，６０岁及以上人群中ＣＣｈ患病 率为４４．０８％。近年研究发现ＭＭＰｓ及ＴＩＭＰｓ参与Ｊ， 球结膜ＥＣＭ稳态的调节，其功能失调可能参与了ＣＣｈ 的病理过程－， 。 ＭＭＰｓ是水解ＥＣＭ的蛋白裂解酶，包括基质中以 及整合于质膜中的各种胶原酶和弹性蛋白酶等，是以 ＥＣＭ成分为水解底物的蛋白酶家系，主要在ＥＣＭ的 降解和重建中起作用。在正常的生理状态下，ＥＣＭ处 于不断产生和降解的动态平衡中；病理状态下，ＥＣＭ 的产生和（或）降解失平衡使其过多堆积，从而导致 组织病理学方面的改变，产生相应的疾病。 ＭＭＰｓ主要分为５类，其中，胶原酶（ＭＭＰ．１、８、１３） 中国眼耳鼻喉科杂志２０１３年１１月第１３卷第６期 ３６７ 主要降解Ｉ、Ⅱ、Ⅲ型胶原；基质降解酶（ＭＭＰ．３、７、１０、 １１、１２）广泛降解ＥＣＭ。ＴＩＭＰｓ是机体自发产生的特异 性抑制ＭＭＰｓ功能的一组蛋白质，目前研究发现 ＴＩＭＰｓ的成员有４个：ＴＩＭＰ一１、ＴＩＭＰ－２、ＴＩＭＰ．３、 表达明显低于正常对照组，释放到细胞外的较少，大部 分储存在细胞内，证实了细胞内外ＭＭＰ．３／ＴＩＭＰ．３失 去平衡。这些研究结果提示在ＣＣｈ中ＭＭＰ．１的表达 水平明显升高，而ＴＩＭＰ－１并没有随之相应的升高，同 时，ＭＭＰ－３的表达水平明显升高，而ＴＩＭＰ．３的表达却 降低，上述球结膜成纤维细胞ＭＭＰｓ及ＴＩＭＰｓ的病理 表达可能参与了ＣＣｈ的发生。对于ＭＭＰｓ、ＴＩＭＰｓ的 ＴＩＭＰ－４。它们可下调ＭＭＰｓ的活性，对于维持ＥＣＭ的 稳态有重要作用。ＴＩＭＰ一１是体内ＭＭＰ．１的天然特异 性组织抑制剂，可抑制ＭＭＰ．１酶原活化及其活性。 ＴＩＭＰ一３是一种结合细胞外基质的非可溶性蛋白，调节 ＭＭＰ一３蛋白水解活性，协调ＥＣＭ的降解与重建。在 生理条件下，ＭＭＰｓ和ＴＩＭＰｓ之间保持动态平衡，以确 表达改变的机制及途径还需进一步深入的研究。 参考文献 ［１］Ｚｈａｎｇ Ｘ，ｌｉ Ｑ，Ｚｏｕ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ａｅｓｓｉｎｇ ｔｈｅ ｓｅｖｅｒｉｔｙ ｏｔ ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖ— ｏｃｈａｌａｓｉｓ ｉｎ ａ ｓｅｎｉｌｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ：ａ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ－ｂａｓｅｄ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ 保正常生理功能的进行；但在某些病理条件下，这种生 理平衡状态被打破，从而对组织表现出极大的破坏力 而致病。ＭＭＰｓ和ＴＩＭＰｓ表达水平失衡与眼科疾病的 发生、发展密切相关。 李青松等 研究显示ＣＣｈ球结膜组织中ＭＭＰ．１、 ＭＭＰ－３表达较高，ＭＭＰｓ与ＴＩＭＰｓ平衡失调。Ｍｅｌｌｅｒ 等 ｌ 对ＣＣｈ与正常结膜的成纤维细胞研究发现，ＣＣｈ 组结膜成纤维细胞ＭＭＰ一１和ＭＭＰ．３过度表达。Ｌｉ ｓｔｕｄｙ ｉｎ Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．ＢＭＣ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ，２０１１，１１： １９８－２０３． ［２］张兴儒，俞彰，刘哗翔，等．结膜松弛症超微结构电镜研究［Ｊ］．中 国眼耳鼻喉科杂志，２００３，３（４）：２２３－２２４． ［３］李轶捷，张兴儒，项敏泓，等．结膜松弛症球结膜及筋膜组织的超 微结构观察［Ｊ］．中华实验眼科杂志，２０１２，３０（７）：６３８－６４０． ［４］ 张兴儒，蔡瑞霞，王宝华，等．结膜松弛症的病理组织学观察 ［Ｊ］．中华眼科杂志，２００４，４０（１）：３７－３９． ［５］ Ｚｈａｎｇ ＸＲ，Ｚｈａｎｇ ＺＹ，Ｈｏｆｆｍａｎ ＭＲ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｇｅ ａｎｄ ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖ０ｃｈａｌａｓｉｓ ｏｎ ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａｌ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ Ｅｙｅ Ｒｅｓ， ２０１３，３８（３）：３３１－３３４． 等 对正常结膜和ＣＣｈ来源的结膜成纤维细胞进行 培养研究发现，ＣＣｈ患者成纤维细胞ＭＭＰ．１和ＭＭＰ．３ 蛋白表达在ＣＣｈ中明显增加，分别为正常组的３．５～ ７．６倍及２．３～１３倍。在ＣＣｈ中，ＭＭＰ．３的酶蛋白溶 解活性和ＭＭＰ．１的胶原酶溶解活性增强。这些研究 结果提示ＭＭＰｓ与ＴＩＭＰｓ的失衡导致了球结膜基质和 ［６］Ｚｈａｎｇ ＸＲ，Ｚｈａｎｇ ＺＹ，Ｈｏｆｆｍａｎ ＭＲ．Ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａｌ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｏｐｔｉｃａｌ ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ［Ｊ］．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，２０１３，１２０ （６）：１３０５． ［７］李青松，张兴儒，项敏泓，等．基质金属蛋白酶在结膜松弛症球结 Ｔｅｎｏｎ囊的过度降解，而发生ＣＣｈ。 本研究中采用ＥＬＩＳＡ检测细胞培养上清液中 ＭＭＰｓ的表达情况，采用ＣＣｈ成纤维细胞的培养方 法 ，选取３～６代呈对数期生长的成纤维细胞，排除 膜组织中的表达［Ｊ］．中华眼科杂志，２０１０，４６（９）：８３８．８４０． ［８］Ｌｉ ＤＱ，Ｍｅｌｌｅｒ Ｄ，Ｌｉｕ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｉｏｎ ｏｆＭＭＰ一１ ａｎｄ ＭＭＰ－３ ｂｙ ｃｕｈｕｒｅｄ ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｏｅｈａｌａｓｉｓ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ［Ｊ］．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ，２０００，４１（２）：４０４－４１０． 了原代培养中可能存在的上皮细胞。简单纯化了体外 实验的研究环境，排除了细胞混杂因素的干扰，直接检 测ＣＣｈ成纤维细胞培养上清液中ＭＭＰ一１、ＭＭＰ一３、 ＴＩＭＰ一１、ＴＩＭＰ一３的表达。 ［９］Ｚｈａｎｇ ＸＲ，Ｚｏｕ ＨＤ，Ｌｉ ＱＳ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｗｏ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｎｄ ｇｒａｄｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍｓ ｆｏｒ ｃ０Ｉ】ｊ＿ｕｎｃｔｉｖｏｃｈａｌａｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ Ｍｅｄ Ｊ（Ｅｎｇ１）， ２０１３，１２６（１６）：３１１８－３１２３． ［１Ｏ］韩竹梅，张兴儒，张隆，等．结膜松弛症成纤维细胞的培养和鉴定 ［Ｊ］．眼科，２０１３，２２（２）：１０５—１０９． ［１ １］ Ｍｅｌｌｅｒ Ｄ，Ｌｉ ＤＱ，Ｔｓｅｎｇ ＳＣ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ，ｓｔｒｏｍｅｌｙｓｉｎ， ａｎｄ ｇｅｌａｔｉｎａｓｅ Ｂ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｏｎｊｕｎｅｔｉｖａｌ ａｎｄ ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｏｃｈａｌａｓｉｓ ｉｆｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｂｙ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１ ｂｅｔａ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ—ａｌｐｈａ『Ｊ１． 本研究中ＣＣｈ组成纤维细胞ＭＭＰ－１、ＭＭＰ－３呈 高表达，表明大部分释放出胞外，胞内贮存的较少，证 实了ＣＣｈ是多种因素导致ＥＣＭ的改变，使细胞内大 部分ＭＭＰ．１、ＭＭＰ．３释放到细胞外维持ＥＣＭ的稳定。 ＴＩＭＰ．１的表达与正常对照组比较没有统计学意义，证 实了细胞内外ＭＭＰ一１／ＴＩＭＰ一１失去平衡。ＴＩＭＰ－３的 Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ，２０００，４１（１０）：２９２２－２９２９． （收稿日期２０１３－０８－０２） （本文编辑诸静英） 试题１．答案：Ｃ．Ｆｕｃｈｓ综合征是非肉芽肿性葡萄膜炎，它 引起的虹膜结节主要是Ｋｏｅｐｐｅ结节，特征性表现为小的绒毛 状半透明结节，往往呈多发性，沿瞳孔领一周分布，偶尔出现 葡萄膜炎的一个重要体征。 试题２．答案：Ｃ．先天性视盘小凹７０％发生在视盘颞侧，约 ２０％发生于中心，其他位置的小凹不超过１０％。 Ｂｕｓａｃｃａ结节。而Ｂｕｓａｃｃａ结节是虹膜实质的结节，是肉芽肿型
