・药品检验・反相高效液相色谱法测定骨科洗剂１号方中经基红花黄色素Ａ的含量彭伟文‘＊，高玉桥‘，梅全喜’，詹丽玲２，曾丽云２，陈娜２（１．广东省中山市中医院药剂科，中山市５２８４００；２．广州中医药大学新药开发中心，广州市５１０４０５）中图分类号摘要８９２７．２文献标识码Ａ文章编号１００１－０４０８（２００６） ２４－１８９８－０２目的：建立以反相高效液相色语法测定骨科洗剂１号方中在基红花黄色素Ａ含量的方法。方法：色谱柱为ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＬｕｎａ Ｃｉｓ，流动相为甲醇一乙睛－０．７％磷酸水溶液（２６：２：７２），流速为１． ０ｍｌ／ｍｉｎ，检测波长为４０３ｎｍ，柱温为３０ｒ －。结果：舟基红花黄色素Ａ进样量在０．１ ０４４ｐｇ－１．２ ５２８［ｇ范围内与峰面积积分值线性关系良好（（ｒ ＝ ０．９ ９９８），平均回收率为９９．０８％（ＲＳＤ＝０．５２％）。结论：本方法操作简单、准确、专属性强、灵敏度高、重现性好，可用于本品的质量控制。关键词反相高效液相色谱法；骨科洗剂１号；弃基红花黄色素Ａ；含量Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｙｄｒｏｘｙ Ｓａｆｆｌｏｒ Ｙｅｌｌｏｗ Ａ ｉｎ Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ Ｌｏｔｉｏｎ Ｉｂｙ ＲＰ一ＨＰＬＣＰＥＮＧ Ｗｅｉｗｅｎ，ＧＡＯ Ｙｕｊｉａｏ，ＭＥＩ Ｑｕａｎｘｉ（Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ Ｍｕｎｉｃｉｐａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＴＣＭ， Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ ５２８４００， Ｃｈｉｎａ）ＺＨＡＮ Ｌｉｌｉｎｇ，ＺＥＮＧ Ｌｉｙｕｎ，ＣＨＥＮ Ｎａ（Ｎｅｗ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｅｎｔｅｒ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ＴＣＭ，Ｇｕ－ａｎｇｚｈｏｕ ５１０４０５， Ｃｈｉｎａ）ＡＢＳＴＲＡＣＴ ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ： Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ＲＰ一ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｙｄｒｏｘｙ ｓａｆｆｌｏｒ ｙｅｌｌｏｗ Ａ ｉｎ Ｏｒｔｈｏｐａｅ－ｄｉｃｓ ｌｏｔｉｏｎ １． ＭＥＴＨＯＤＳ： Ｔｈｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｏｎ Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃｉｓ ｗｉｔｈ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｃｏｍｐｏｓｅｄ ｏｆ ｍｅｔｈａｎｏｌ一ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ一ｗａｔｅｒ （２６：２：７２） ．Ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｗａｓ １．Ｏｍ１／ｍｉｎ； ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｖｅ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ４０３ｎｍ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｅｒａ－ｔｕｒｅ ｗａｓ ３０＇Ｃ． ＲＥＳＵＬＴＳ： Ａｔ ａ ｓａｍｐｌｅ ｓｉｚｅ ｏｆ ０．１ ０４４ｐｇ一１．２５２即ｇ（ｒ＝０．９ ９９８），ｈｙｄｒｏｘｙ ｓａｆｆｌｏｒ ｙｅｌｌｏｗ Ａ ｗａｓ ｎｏｔｅｄ ｔｏ ｂｅ ｏｆｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｐｅａｋ ａｒｅａ ｓｃｏｒｅ．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ９８．０８％ （ＲＳＤ＝０．５２％）．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ：Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓｓｉｍｐｌｅ， ａｃｃｕｒａｔｅ，ｓｐｅｃｉｆｉｃ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ，ａｎｄ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ ｌｏｔｉｏｎ １．ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ ＲＰ一ＨＰＬＣ；Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ ｌｏｔｉｏｎ １；Ｈｙｄｒｏｘｙ ｓａｆｆｌｏｒ ｙｅｌｌｏｗ Ａ； Ｃｏｎｔｅｎｔ 骨科洗剂１号由大黄、桅子、薄荷、红花、宽根藤等多味中药组方而成，具有活血祛淤、消炎止痛、舒筋活络之功效，用于扭挫伤、骨折初期的关节活动不利。经基红花黄色素Ａ为红花中活血散淤止痛的主要有效成分［Ｄｉ。笔者采用反相高效液相色谱法对该方中的经基红花黄色素Ａ进行含量测定，以控制该制剂质量。一Ａ １仪器与试药１．１仪器义一０ ５ １０ １５ ２０ｍｉｎ ０ ５ １０ １５ ２０ｍｉｎ ０ ５ １０ １５ ２０ｍｉｎＢ Ｃ Ｓｕｍｍｉｔ高效液相色谱仪（美国Ｄｉｎｅｘ公司）；ＳＢ一５２００超声波清洗器（宁波新芝科器研究所）。１．２试药经基红花黄色素Ａ对照品（中国药品生物制品检定所，批 图１高效液相色谱 Ａ．经基红花黄色素Ａ对照品； Ｂ．供试品；ｃ．缺红花阴性对照品Ａ． ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ｏｆ ｈｙｄｒｏｘｙ ｓａｆｆｌｏｒ ｙｅｌｌｏｗ Ａ；Ｂ．ｓａｍｐｌｅ；Ｃ．ｎｅｇ－Ｆｉ ｇ １ ＨＰＬＣａｔ ｉｖｅ ｓａｍｐｌｅ（ｌａｃｋ ｏｆ ｓａｆｆｌｏｗｅｒ）号：１１１６３７一２００５０２）；骨科洗剂１号（中山市中医院药剂科，批号：０５０８２３，０５０９１５，０５１１０６）；乙睛、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。容量瓶中，加２５％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成浓度为０．１ｍｇ／ｍｌ的对照品溶液。２．３供试品溶液的制备２方法与结果２．１色谱条件 ｎｏｍｅ色谱柱：Ｐｈｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ，ａ（２５０ｍｍ Ｘ ４．６ｍｍ， ５ｐｍ）；流动相：甲醇一乙睛－０．７％磷酸水溶液（２６ ．２：７２）；流速：１． ０ｍｌ／ｍｉｎ；检测波长：４０３ｎｍ；柱温：３０１Ｃ。色谱详见图ｔｏ２．２对照品溶液的制备取经基红花黄色素Ａ对照品５． ０ｍｇ，准确称定，置于５０ｍ１＊副主任药师。研究方向：临床药学和新药开发。电话：０７ ６０一８８１５１０６ 取骨科洗剂１号方药粉１鲍，准确称定，置具塞锥形瓶中，加人２５％甲醇１００ｍ１，称定重量，超声处理４０ｍｉｎ，放冷，以２５％甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。２．４阴性对照品溶液的制备取按处方比例及制备工艺制备的不含红花的阴性样品，按 ＂２．３＂项下方法制备成阴性对照品溶液。２．５线性关系考察 取轻基红花黄色素Ａ对照品溶液（０．１ ０４４ｍｇ／ ｍｌ），分别按“２．１”项下色谱条件进样１，２，４，６，８，１０，１２１ｃ１测定。记录峰中国药房２００６年第１７卷第２４期・１８９８・Ｃｈｉｎａ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２００６ Ｖｏｌ． １７ Ｎｏ． ２４反相高效液相色谱法测定蒲地蓝消炎片中黄芬昔的含量席文胜‘，关小彬“，张艳玲（广东省中医院珠海医院药剂科，珠海市５１９０１５）中图分类号Ｒ９２７．２文献标识码Ａ文章编号１００１－０４０８（２００６）２４－１８９９－０２摘要目的：建立以反相高效液相色谱法测定蒲地蓝消炎片中黄答普含量的方法。方法：色谱柱为Ａｇｉｌｅｎｔ Ｃ，８，流动相为甲醇－黄答等进样量在０．０．１％磷酸（４７：５３），检测波长为２８０ｎｍ，柱４为２５＇Ｃ，流速为１． ０ｍｌ／ｍｉｎ。结果：０ ５７６１ｔ－ｇ －－０．８６４ｐｇ范围内与峰面积积分值线性关系良好（ｒ＝０．４４％）。结论：本方法简便、准确、可靠、专属性９９９９），平均加样回收率为９９．１４％ （ＲＳＤ＝２．强、重现性好，可用于本品的质量控制。关键词反相高效液相色谱法；蒲地蓝消炎片；黄答普；含量Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂａｉｃａｌｉｎ ｉｎ Ｐｕｄｉｌａｎｘｉａｏｙａｎ Ｔａｂｌｅｔｓ ｂｙ ＲＰ一ＨＰＬＣＸＩ Ｗｅｎｓｈｅｎｇ，ＧＵＡＮ Ｘｉａｏｂｉｎ，ＺＨＡＮＧ Ｙａｎｌｉｎｇ（Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｚｈｕｈａｉ Ｈｏｓｐｉｔａｌ， Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＴＣＭ，Ｚｈｕｈａｉ ５１９０１５， Ｃｈｉｎａ）ＡＢＳＴＲＡＣＴ ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ：Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ＲＰ一ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｉｃａｌｉｎ ｉｎ Ｐｕｄｉｌａｎｘｉａｏｙａｎ Ｔａｂｌｅｔｓ．ＭＥＴＨＯＤＳ： Ｔｈｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｏｎ Ａｇｉｌｅｎｔ ＯＤＳ Ｃ，ａ ｗｉｔｈ ｍｅｔｈａｏｌ一０．１％ Ｈ３Ｐ０４（４７：５３）ａｓ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ．Ｔｈｅ ｄｅｔｅ－ｃｔｉｖｅ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ｓｅｔ ａｔ ２８０ｎｍ； ｔｈｅ ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ２５｀Ｃ，ａｎｄ ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｗａｓ １．０ｍ１／ｍｉｎ．ＲＥＳＵＬＴＳ： Ｂａｉｃａｌｉｎｓｈｏｗｅｄ ａ ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒｉｔｙ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ０．０ ５７６ｐｇ一０．８６４ｐｇ（ｒ＝０．９ ９９９）． Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ９９．１４％ （ＲＳＤ＝２．４４％）．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ： Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｉｍｐｌｅ， ａｃｃｕｒａｔｅ， ｒｅｌｉａｂｌｅ， ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ， ａｎｄ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｐｕｄｉ－ｌａｎｘｉａｏｙａｎ ｔａｂｌｅｔｓ．ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ ＲＰ一ＨＰＬＣ；Ｐｕｄｉｌａｎｘｉａｏｙａｎ Ｔａｂｌｅｔｓ；Ｂａｉｃａｌｉｎ；Ｃｏｎｔｅｎｔ面积，并以峰面积（Ｙ）对经基红花黄色素Ａ进样量（Ｘ）进行线表１ 加样回收率试验结果性回归，得回归方程Ｙ ＝４ ００８． ３Ｘ－６７．１２（１ ＝ ０．９ ９９８）。结Ｔａｂ ｌＲｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｔｅｓｔｓ果表明，经基红花黄色素Ａ进样量在０． １ ０４４ｔｒｇ一１．２ ５２８Ｋｇ样品含量加人量测得量回收率ｚＲＳ范围内与峰面积积分值线性关系良好。戈％）Ｄ２．６精密度试验ｎＵｎ８８０．１０４４ｎＵ，．且ｇ，直月，ｎ，Ｑ０月 ； … 崎Ｏｏ８８０．１ ０４４ｎ ０ Ｕ ＪｌｌＣ，００Ｑ ４取“２． ２＂项下对照品溶液，按“２．１”项下色谱条件重复进样，ＣＣ 【２ＣＵｎ８８０．１０４４Ｏ，户．１八，２八」ｇＯＪＲ衬ｂ６次，每次１即１。记录峰面积值，得到经基红花黄色素Ａ峰面积Ｏ０８８０．１０４４１９１１ｎ，Ｇ伪７哎９９．０８ ０．５２…Ｊ的相对标准差（ＲＳＤ）为０．５４％，表明精密度良好。Ｏ０８８０．１ ０４４０．１ ９１９ｎ，０少工ｆ，｝１８８ｎＯ２．７稳定性试验ｎ曰００．１ ０４４（）．１ ９１２，００ｎ１、Ｊ取“２． ３”项下供试品溶液，分别于０，１，２，４，８，１２ｈ时进样表２样品含量测定结果１次。记录峰面积值，其ＲＳＤ＝０．９３％，表明供试品溶液在１２ｈＴａｂ ２ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｓａｍｐｌｅ ａｓｓａｙｉｎｇ内稳定。批号 含量（ｍ８乍）ａ＇ （ｍｇ乍）ＲＳＤ（％ ）０５０８２３ ０．０８７７２．８重现性试验 ０５０９１５ ０．０８８３ ０．０８７４ １．２４取同一批次骨科洗剂Ｉ号， 共５份，按“２．３＂项下方法制成０５１１０６ ０．０８６２供试品溶液并按“２．１”项下色谱条件测定。记录峰面积值，计算其中经基红花黄色素Ａ的含量。结果，样品中经基红花黄色素媒超声提取１２１，制备供试品溶液。由于该方为多味药材制成的细Ａ的平均含量为０．０ ８８０ｍｇ／ｇ （ＲＳＤ＝１．０５％）。粉，试验中发现该制剂水提取液杂质较多，难以过滤，因此按照２００５年版《中国药典》方法以２５％甲醇为溶媒超声提取，经比２．９加样回收率试验较优于水提取，故确定提取方法为２５％甲醇超声提取４０ｍｉｎａ取已知含量的骨科洗剂１号方药粉ｌ ｏｇ，准确称定，共６本文所采用的色谱条件是参照２００５年版《中国药典》中红 份，分别加人对照品溶液（０． １ ０４４ｍｇ／ｍｌ） ｌｍｌ，按“２．３＂项下方法制成供试品溶液，测定含量并计算回收率，结果详见表ｌａ花的含量测定方法，经基红花黄色素Ａ在４０３ｎｍ波长处检测，有最大吸收。经各项方法学考察，表明本方法简便易行，结果准２．１０样品含ｆ测定取不同批号骨科洗剂１号方药粉各１ 鲍，准确称定，分别确，阴性对照无干扰，专属性强，灵敏度高，重现性好，可有效控按，＂２．３＂项下方法制成供试品溶液，依法测定。记录峰面积，按制该制剂的质量。照外标法计算其中经基红花黄色素Ａ的含量，结果详见表２０参考文献３讨论［１］国家药典委员会编．中华人民共和国药典（一部）［Ｓ］ ．经基红花黄色素Ａ为水溶性成分，文献报道多以水为溶 ２００５年版．北京： 化学Ｔ－业出版社，２００５：１０３，１０４．［２１祝明，郭增喜．红花药材中红花黄色素的含量测定【Ｊ１．＊主管药师。研究方向：制剂。电话：０７５６一３３２５０６３中药材， ２０００，２３（８）：４５８．＃通讯作者：副主任药师。研究方向：制剂。电话：０７５６一３３２５０６３（ 收稿日期：２００６－０８－１０修回日期：２００６－０９－１０）中国药房２００６年第１７卷第２４期Ｃｈｉｎａ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２００６ Ｖｏｌ． １７ Ｎｏ． ２４・１８９９