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微生物及其用途[发明专利]

来源：好走旅游网

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 CN 10712 A(43)申请公布日 2017.09.15

(21)申请号 201710261585.6(22)申请日 2017.04.20

(66)本国优先权数据

201610817947.0 2016.09.13 CN(71)申请人湖北广济药业股份有限公司

地址 4300 湖北省武穴市江堤路1号(72)发明人刘天罡　沈佳　石彬　叶紫玲　

马田　刘然　(74)专利代理机构北京清亦华知识产权代理事

务所(普通合伙) 11201

代理人赵天月(51)Int.Cl.

C12N 1/19(2006.01)C12P 5/02(2006.01)

()发明名称

微生物及其用途

(57)摘要

本发明提出了一种微生物及其用途和获得番茄红素的方法，该微生物过表达包括选自tHMG1，BtCarG，PaCrtB，McCrtI，INO2，yap1，spt15-5，taf25-3，GapN，PYC2，SMAE1，MDH2，POS5，pntAB，ADH2，ACS6，ALD6，EUTE，ERG12，IDI1，ERG10，MVD1，ERG13，ERG8基因的至少之一；以及沉默包括选自GAL1，GAL7，GAL10，GAL80，ROX1，VBA5，DOS2，Ypl062W，Yjl0W，Yer130C，Yer134C，Ynr063W，Exg1，Yor292C，Sfk1，Mef1基因的至少之一。利用根据本发明实施例的微生物，生产番茄红素的产量高，生产周期短，生产效率高。CN 10712 A权利要求书1页说明书36页序列表45页附图5页

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权　利　要　求　书

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1.一种微生物，其特征在于，过表达包括选自tHMG1，BtCarG，PaCrtB，McCrtI，INO2，yap1，spt15-5，taf25-3，GapN，PYC2，SMAE1，MDH2，POS5，pntAB，ADH2，ACS6，ALD6，EUTE，ERG12，IDI1，ERG10，MVD1，ERG13，ERG8基因的至少之一；以及

沉默包括选自GAL1，GAL7，GAL10，GAL80，ROX1，VBA5，DOS2，Ypl062W，Y jl0W，Yer130C，Yer134C，Ynr063W，Exg1，Yor292C，Sfk1，Mef1基因的至少之一。

2.根据权利要求1所述的微生物，其特征在于，所述微生物是酵母菌。3.根据权利要求1所述的微生物，其特征在于，进一步包括可操作ERG9基因。4.一种获得番茄红素的方法，其特征在于，包括：

将权利要求1～3任一项所述的微生物进行发酵处理；以及将发酵处理产物进行萃取处理，以便获得所述番茄红素。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述发酵处理是通过如下方式实现的：将所述微生物进行基础发酵处理和两级分批补料发酵处理，所述基础发酵处理是在基本发酵培养基中进行的，所述两级分批补料发酵处理是通过在所述基本发酵培养基基础上依次补加第一补料培养基和第二补料培养基实现的，

其中，所述基本发酵培养基为含有2％蛋白胨，1％酵母提取物，0.8％KH2PO4和2％葡萄糖的YPD含盐培养基；

所述第一补料培养基为含有500g/L葡萄糖，5g/L MgSO4，3.5g/L K2SO4，0.28g/L Na2SO4和10g/L酵母提取物的YPD含盐培养基；

所述第二补料培养基为乙醇或甘油。6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述萃取处理包括：

将所述发酵处理产物进行匀浆破碎或酶解破碎处理以及有机萃取处理。7.权利要求1～3任一项所述微生物在制备番茄红素中的用途。

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说　明　书微生物及其用途

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技术领域

[0001]本发明涉及生物工程领域，具体的，本发明涉及微生物及其用途，更具体的，本发明涉及微生物、获得番茄红素的方法和微生物在制备番茄红素中的用途。背景技术

[0002]番茄红素的开发生产主要有天然产物提取、化学合成、微生物发酵等方法。天然产物提取主要是通过成熟果实的萃取纯化获得番茄红素，然而这种生产方式受气候、品种、地理位置、成熟度等诸多不可控因素影响，具有明显的季节性，含量不稳定性，并且大面积种植、养殖的成本较高，含量通常也比较低。另外，高纯度的番茄红素在萃取纯化技术上非常困难，这些共同造成了番茄红素的成品十分昂贵。化学合成法具有原料易得价廉、反应条件温和、反应速率快、产物容易与反应体系分离的优点，但由于双键立体选择性难以控制及不同程度的化学试剂残留，其产品的质量、安全性及使用范围都受到了。微生物发酵法主要是利用微生物的生物代谢，将葡萄糖、淀粉、黄豆饼粉等廉价原料转化为番茄红素，这种方法不受季节、地域、气候等因素的影响，原料易获取、生产周期短、工艺操作简单、成本低廉、产物质量可控、产物易纯化、安全性高，并且环境污染较少，不仅解决了因种植植物等而占用大量耕地的问题，也解决了化学合成不环保的弊端。最重要的是，发酵法生产的番茄红素属于天然型产品，其活性与天然植物提取的活性成分一致，被认为是番茄红素生产最有前景的方法。

发明内容

[0003]本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。[0004]目前研究较多的番茄红素产生菌的主要是三孢布拉氏霉菌。但是三孢布拉氏霉菌在传代过程中容易发生退化现象，使得番茄红素产量减少，另伴有黄曲霉毒素等有毒成分的合成，另一方面，这两种微生物的生长周期相较于酵母和大肠杆菌较长，大大降低了其生产效率，从而造成了生产番茄红素的难度加大。[0005]为此，本发明的一个目的在于提出了一种微生物，该微生物生产番茄红素的产量高，生产周期短，生产效率高。[0006]在本发明的第一方面，本发明提出了一种微生物。根据本发明的实施例，所述微生物过表达包括选自tHMG1，BtCarG，PaCrtB，McCrtI，INO2，yap1，spt15-5，taf25-3，GapN，PYC2，SMAE1，MDH2，POS5，pntAB，ADH2，ACS6，ALD6，EUTE，ERG12，IDI1，ERG10，MVD1，ERG13，ERG8基因的至少之一；以及沉默包括选自GAL1，GAL7，GAL10，GAL80，ROX1，VBA5，DOS2，Ypl062W，Yjl0W，Yer130C，Yer134C，Ynr063W，Exg1，Yor292C，Sfk1，Mef1基因的至少之一。利用根据本发明实施例的微生物，生产番茄红素的产量高，生产周期短，生产效率高。[0007]根据本发明的实施例，上述微生物还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：

[0008]根据本发明的实施例，所述微生物是酵母菌。酵母菌的生长周期短，利用本发明实

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施例的微生物生产番茄红素的效率进一步提高。[0009]根据本发明的实施例，所述微生物进一步包括可操作ERG9基因。根据本发明的实施例，所述可操作ERG9基因包括但不限于替换ERG9基因的启动子，进而使得ERG9基因的表达可以根据需要进行，使微生物生产番茄红素的效率进一步提高。[0010]在本发明的第二方面，本发明提出了一种获得番茄红素的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将前面所述的微生物进行发酵处理；以及将发酵处理产物进行萃取处理，以便获得所述番茄红素。利用根据本发明实施例的获得番茄红素的方法，能够高产量、高效率获得番茄红素，且番茄红素的纯度高。[0011]根据本发明的实施例，上述获得番茄红素的方法还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：

[0012]根据本发明的实施例，利用根据本发明实施例的获得番茄红素的方法，获得的番茄红素产量更高、效率更高，纯度也更高。[0013]根据本发明的实施例，所述发酵处理是通过如下方式实现的：将所述微生物进行基础发酵处理和两级分批补料发酵处理，所述基础发酵处理是在基本发酵培养基中进行的，所述两级分批补料发酵处理是通过在所述基本发酵培养基基础上依次补加第一补料培养基和第二补料培养基实现的，其中，所述基本发酵培养基为含有2％蛋白胨，1％酵母提取物，0.8％KH2PO4和2％葡萄糖的YPD含盐培养基；所述第一补料培养基为含有500g/L葡萄糖，5g/L MgSO4，3.5g/L K2SO4，0.28g/L Na2SO4和10g/L酵母提取物的YPD含盐培养基；所述第二补料培养基为乙醇或甘油。发明人通过实验发现，采用上述发酵处理方式，微生物的扩增速率高、番茄红素的产率也进一步提高。[0014]根据本发明的实施例，所述萃取处理包括：将所述发酵处理产物进行超声破碎处理及有机萃取处理。发明人对发酵产物进行萃取处理过程中发现，将发酵处理后产物进行超声破碎处理，相比于采用盐酸蒸煮的方法，番茄红素的降解大幅降低，萃取处理后获得的番茄红素的产量进一步提高。[0015]在本发明的第三方面，本发明提出了前面所述微生物在制备番茄红素中的用途。如前所述，利用本发明实施例的微生物，生产番茄红素的产量高，生产周期短，生产效率高。附图说明

[0016]图1是根据本发明实施例1的敲除盒片段1的结构示意图；[0017]图2是根据本发明实施例1的敲除盒片段2的结构示意图；[0018]图3是根据本发明实施例1的敲除盒片段3的结构示意图；

[0019]图4是在敲除GAL1/7/10和GAL1/7/10/80的菌株中的不同启动子的强度；[0020]图5是第二代工程菌株摇瓶发酵结果；

[0021]图6是根据本发明实施例4的敲除盒片段4的结构示意图；以及[0022]图7是根据本发明实施例的发酵培养基的筛选结果图。

具体实施方式

[0023]下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的。

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微生物

[0025]在本发明的第一方面，本发明提出了一种微生物。根据本发明的实施例，该微生物过表达包括选自tHMG1，BtCarG，PaCrtB，McCrtI，INO2，yap1，spt15-5，taf25-3，GapN，PYC2，SMAE1，MDH2，POS5，pntAB，ADH2，ACS6，ALD6，EUTE，ERG12，IDI1，ERG10，MVD1，ERG13，ERG8基因的至少之一；以及沉默包括选自GAL1，GAL7，GAL10，GAL80，ROX1，VBA5，DOS2，Ypl062W，Yjl0W，Yer130C，Yer134C，Ynr063W，Exg1，Yor292C，Sfk1，Mef1基因的至少之一。利用根据本发明实施例的微生物，生产番茄红素的产量高，生产周期短，生产效率高。[0026]本申请所述的微生物用于生产番茄红素，相比于现有技术，其产量得到了显著提高，能够至少达到2g/L。

[0027]根据本发明的具体实施例，所述微生物还可以进一步包括可操作ERG9基因。本申请所述的可操作ERG9基因是指替换ERG原始的启动子，从而实现通过葡萄糖ERG9的表达，从而增加番茄红素的产量。[0028]需要说明的是，发明人通过实验，发现：表达BtCarG，PaCrtB，McCrtI基因能够达到在酵母体内高效合成番茄红素的目的；沉默GAL1，7，10或GAL1，7，10，80能够达到利用半乳糖诱导或利用葡萄糖浓度调节生产番茄红素的目的；表达INO2，yap1，spt15-5，taf25-3基因是抗逆基因，可以增加番茄红素的产量；表达GapN，PYC2，SMAE1，MDH2，POS5，pntAB中的一个或多个基因能够平衡酵母体内的还原力，可以增加番茄红素的产量；表达ADH2，ACS2，ALD6，EUTE中的一个或多个基因能够增加合成番茄红素的前体物质的供应，增加番茄红素的产量；表达ERG12，IDI1，ERG10，MVD1，ERG13，ERG8中的一个或多个基因，能够平衡有关番茄红素合成中的MVA途径，增加番茄红素的产量；沉默ROX1，VBA5，DOS2，Ypl062W，Yjl0W，Yer130C，Yer134C，Ynr063W，Exg1，Yor292C，Sfk1，Mef1基因的至少之一，能够从整体上调节酵母系统，从而增加番茄红素的产量。利用根据本发明实施例的微生物，番茄红素的产量得到显著提高。

[0029]获得番茄红素的方法[0030]在本发明的第二方面，本发明提出了一种获得番茄红素的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：将前面所述的微生物进行发酵处理；以及将发酵处理产物进行萃取处理，以便获得所述番茄红素。利用根据本发明实施例的获得番茄红素的方法，能够高产量、高效率获得番茄红素，且番茄红素的纯度高。[0031]根据本发明的具体实施例，所述发酵处理是通过基础发酵处理和两级分批补料发酵处理进行的，具体如下所述：

[0032]将保种管从-80度冰箱中取出放置冰上解冻，然后划YPD平板，于30度培养箱中培养，然后挑取单克隆至含5mL基本发酵培养基(为包含2％蛋白胨，1％酵母提取物，0.8％KH2PO4和2％葡萄糖的YPD含盐培养基)(YPD是常用于培养酵母的一种培养基)的PA瓶中，30度摇床中培养，转速为220rmp。待种子液变浑浊后(一般为指数期，OD＝5-8，14-18小时)转接至50mL新鲜的基本发酵培养基中(250mL三角瓶)，转接量为1％左右。放于30度摇床中培养，转速为220rmp。待种子液长至对数期时(一般14-18小时)转接至200mL新鲜的基本发酵培养基中(500mL三角瓶)，转接量为1％左右。放于30度摇床中培养，转速为220rmp。长至对数期的种子液作为上罐种子液。初始接种OD调至0.5，所需种子液体积根据公式进行计算(如发酵液体积为2500mL，种子液OD值为n，则接种种子液体积为25000﹡0.5/n mL)。开始发

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酵后，控制pH值为5.5，通气量为1.5vvm，初始搅拌速率设置为300rpm，溶氧维持在30％以上(300-600rpm)。

[0033]当培养时葡萄糖浓度降至2g/L左右时开始补料葡萄糖(以补加第一补料培养基的形式提供，第一补料培养基为含有500g/L葡萄糖，5g/L MgSO4，3.5g/L K2SO4，0.28g/L Na2SO4和10g/L酵母提取物的YPD含盐培养基)，初始补料速率为10mL/L发酵液/h，以维持发酵液中葡萄糖的残留浓度在1g/L左右，每两个小时取样测量一次OD600值和检测一次葡萄糖含量，当葡萄糖浓度低于1g/L时增加补料速率。当OD值增加缓慢时(开始进入稳定期)停止补料葡萄糖，此时开始监测乙醇残留量，当乙醇浓度降至5g/L时开始补料乙醇或者是甘油(第二补料培养基，包含乙醇或甘油)，初始补料速率为10mL/L发酵液/h。随后每4h取样检测一次乙醇或甘油含量，当乙醇或甘油浓度低于5g/L时调整补料速率。颜色有变化后开始提取产物检测产物变化，当番茄红素浓度不再增加时结束发酵。[0034]其中，发明人发现，在基本发酵培养基中培养菌体，相比于现有技术的培养基，菌体的生长速度和生长状态均显著优于现有技术，补加的第一补料培养基，有效保证了菌体的快速和健康的生长，补加的第二补料培养基，有效提高了番茄红素的产量。根据本发明的再一具体实施例，所述萃取处理包括：将所述发酵处理后产物进行超声破碎处理以及有机萃取处理。发明人对发酵处理后的萃取过程进行了优化筛选，发明人发现，采用超声处理的方式相比于采用盐酸蒸煮的方式，番茄红素的降解速率大幅降低，番茄红素的产量稳定。另外，需要说明的是，本申请所述的“有机萃取处理”是指采取有机溶剂对超声破碎处理产物进行萃取，有机萃取的方式不受特别，如根据本发明的具体实施例，可以采用丙酮溶剂从超声破碎处理产物中萃取番茄红素。[0035]用途

[0036]在本发明的第三方面，本发明提出了前面所述的微生物在制备番茄红素中的用途。发明人经过实验证实，本申请所述的微生物在生产番茄红素方面具有显著的优势，番茄红素的产量高、番茄红素的降解速率低，生产周期短。[0037]下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。[0038]实施例1 第一代工程菌株J1011-3的构建[0039]在本实施例中，发明人详细介绍了J1011-3菌株的构建过程。[0040]首先构建ΔLEU2：pGAL1-BtCarG(Blakeslea trispora)敲除盒，即敲除盒片段1，设计上、下游引物PCR扩增各片段，使其相互之间有60-80bp的重叠片段，再通过同源重组的方式将所有片段重组在一起，通过酶切线性化得到ΔLEU2：：pGAL1-BtCarG(Blakeslea trispora)敲除盒，如敲除盒片段1如图1所示，敲除盒片段1具有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。利用酵母自身的同源重组机制将该片段通过醋酸锂法酵母转化分别整合到酵母30000B基因组上，整合位点为LEU2，由于原酵母中的LEU2没有活性，而整合后的同源左臂含有LEU2完整基因，固转化后采用SD-Leu固体板(合成酵母氮源YNB 6.7g/L，葡萄糖20g/L，缺亮氨酸的混合氨基酸粉末1.3g/L，2％琼脂粉)进行筛选，得到的转化子通过分纯培养后提取酵母基因组进行PCR验证，成功验证的菌株命名为J1011-1。

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[0042]再构建ΔURA3：pGAL1-PaCrtB(Pantoea agglomerans)；pGAL10-McCrtI(Mucorcircinelloides)敲除盒，即敲除盒片段2，敲除盒片段2具有如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。设计上、下游引物PCR扩增各片段，使其相互之间有60-80bp的重叠片段，再通过同源重组的方式将所有片段重组在一起，通过酶切线性化得到ΔURA3：：pGAL1-PaCrtB(Pantoea agglomerans)；pGAL10-McCrtI(Mucorcircinelloides)敲除盒，敲除盒片段2如图2所示。利用酵母自身的同源重组机制将该片段通过醋酸锂法酵母转化分别整合到酵母J1011-2基因组上，整合位点为URA3，转化后采用SD-HIS固体板(合成酵母氮源YNB 6.7g/L，葡萄糖20g/L，缺组氨酸的混合氨基酸粉末1.3g/L，2％琼脂粉)进行筛选，得到的转化子通过分纯培养后提取酵母基因组进行PCR验证，成功验证的菌株命名为J1011-2。

[0043]

ACGCAGATAATTCCAGGTATTTTGAAGCAGAACTTTTATTTATCATCGAATTGACTATTGCATTATTTCTATTTTGCAAAGAGGAGAAAGAATTAGGAAAGTTCATACTTCAAAAAGTTTTCCAACTTTCTCACACGAAAGGCCTCACGAAAAG

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GACTGTTCGTAGAATGCTAACATACAAAATTTTGTTAATTTCGTTATGTGCGGATCAGACGGAGTACTTGTCCAAATTAATAAACGATGAGCTGTTAAAAAAGGGGGATATTTTTACCCAAAAATTTTTTGCAACTAATCAAGGTAAGGAATTTTTGAAGAGACTATTTTCATTGACCGAATCAGAGTTTTATAGAGGATTTTTACTAGGAAATGAGAATTTTTGGAAATTTTTAAGAAAAGTTACAGCAATGAAAGAGCAGAGCGAGAGCATTTTTGAATATTTAAATGAATCGATCAAGACAGACAGCAATATTTTGACAAATGAGAACTTCATGTGGGTCCTAGGACTATTAGATGAAATTTCATCAATGGGTGCCGTTGGAAATCACTGGGAAATAGAATACAAGAAATTGACAGAAAGTGGTCATAAAATTGATAAGGAGAATCCATACAAGAAATCGATCGAATTATCATTGAAATCCATTCAACTAACATCACACTTGCTGGAAGATAATAACGATCTGCGTAAAAACGAGATATTCGCTATTATTCAAGCTTTGGCACATCAATGCATCAATCCGTGTAAGCAGATAAGTGAATTTGCAGTGGTAACGCTAGAGCAGACGCTCATCAATAAAATCGAAATTCCAACTAATGAGATGGAATCGGTAGAAGAATTAATTGAGGGCGGATTACTACCGTTGCTAAATTCGAGTGAAACACAGGAAGACCAGAAAATCCTCATTTCATCCATATTAACAATAATTTCAAATGTTTATTTGCATTATTTGAAACTAGGGAAGACAAGCAACGAAACGTTTTTGAAAATTTTGAGTATTTTCAATAAATTTGTAGAGGACTCAGATATTGAAAAAAAGCTACAGCAATTAATACTTGATAAGAAGAGTATTGAGAAGGGCAACGGTTCATCATCTCATGGATCTGCACATGAACAAACACCAGAGTCAAACGACGTTGAAATTGAGGCTACTGCGCCAATTGATGACAATACAGACGATGATAACAAACCGAAGTTATCTGATGTAGAAAAGGATTAAAGATGCTAAGAGATAGTGATGATATTTCATAAATAATGTAATTCTATATATGTTAATTACCTTTTTTGCGAGGCATATTTATGGTGAAGGATAAGTTTTGACCATCAAAGAAGGTTAATGTGGCTGTGGTTTCAGGGTCCATAAAGCTTTTCAATTCATCATTTTTTTTTTATTCTTTTTTTTGATTTCGGTTTCCTTGAAATTTTTTTGATTCGGTAATCTCCGAACAGAAGGAAGAACGAAGGAAGGAGCACAGACTTAGATTGGTATATATACGCATATGTAGTGTTGAAGAAACATGAAATTGCCCAGTATTCTTAACCCAACTGCACAGAACAAAAACCTGCAGGAAACGAAGGTACCCAATTCGCCCTATAGTGAGTCGTATTACGCGCGCTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCGACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGCCGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTTTAACAAAATATTAACGTTTACAATTTCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATAGATCCGTCGAGTTCAAGAGAAAAAAAAAGAAAAAGCAAAAAGAAAAAAGGAAAGCGCGCCTCGTTCAGAATGACACGTATAGAATGATGCATTACCTTGTCATCTTCAGTATCATACTGTTCGTATACATACTTACTGACATTCATAGGTATACATATATACACATGTATATATATCGTATGCTGCAGCTTTAAATAATCGGTGTCACTACATAAGAACACCTTTGGTGGAGGGAACATCGTTGGTACCATTGGGCGAGGTGGCTTCTCTTATGGCAACCGCAAGAGCCTTGAACGCACTCTCACTACGGTGATGATCATTCTTGCCTCGCAGACAATCAACGTGGAGGGTAATTCTGCTAGCCTCTGCAAAGCTTTCAAGAAAATGCGGGATCATCTCGCAAGAGAGATCTCCTACTTTCTCCCTTTGCAAACCAAGTTCGACAACTGCGTACGGCCTGTTCGAAAGATCTACCACCGCTCTGGAAAGTGCCTCATCCAAAGGCGCAAATCCTGATCCAAACCTTTTTACTCCACGCGCCAGTAGGGCCTCTTTAAAAGCTTGACCGAGAGCAATCCCGCAGTCTTCAGTGGTGTGATGGTCGTCTATGTGTAAGTCACCAATGCACTCAACGATTAGCGACCAGCCGGAATGCTTGGCCAGAGCATGTATCATATGGTCCAGAAACCCTATACCTGTGTGGACGTTAATCACTTGCGATTGTGTGGCCTGTTCTGCTACTGCTTCTGCCTCTTTTTCTGGGAAGATCGAGTGCTCTATCGCTAGGGGACCACCCTTTAAAGAGATCGCAATCTGAATCTTGGTTTCATTTGTAATACGCTTTACTAGGGCTTTCTGCTCTGTCATCTTTGCCT

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TCGTTTATCTTGCCTGCTCATTTTTTAGTATATTCTTCGAAGAAATCACATTACTTTATATAATGTATAATTCATTATGTGATAATGCCAATCGCTAAGAAAAAAAAAGAGTCATCCGCTAGGGGAAAAAAAAAAATGAAAATCATTACCGAGGCATAAAAAAATATAGAGTGTACTAGAGGAGGCCAAGAGTAATAGAAAAAGAAAATTGCGGGAAAGGACTGTGTTATGACTTCCCTGACTAATGCCGTGTTCAAACGATACCTGGCAGTGACTCCTAGCGCTCACCAAGCTCTTAAAACGGGAATTTATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACGCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGAGCAAATTAAAGCCTTCGAGCGTCCCAAAACCTTCTCAAGCAAGGTTTTCAGTATAATGTTACATGCGTACACGCGTTTGTACAGAAAAAAAAGAAAAATTTGAAATATAAATAACGTTCTTAATACTAACATAACTATAAAAAAATAAATAGGGACCTAGACTTCAGGTTGTCTAACTCCTTCCTTTTCGGTTAGAGCGGATGTGGGGGGAGGGCGTGAATGTAAGCGTGACATAACTAATTACATGATATCGACAAAGGAAAAGGGGCCTGTTCAAATAACATTAGAATTATGAACTCTAAAAACTTCTGGCAACAAATTGTTAATAAAAGAAGCTGGAGTTTGACCGTTTGATTGTGGAAAGAAATAGAAAAACATGAACATAACCCAGAATGCAGCTCTTAACCAAAACCAAACTGGAAATGTTGATTCAGCATCTGGTTCTTCCAATGGTGCTTGAGTGTTTTCCATTTCGATCTTTCTTGGCTTTGGTGTTTTACCGAAAGACTTAACAACTTGATCAGAAGTCAACTTTGAACCTGCCAAAACAATTGGAACACCTGTACCTGGATGAGTTGAAGCACCAACGAAAAACAAATTATCGTATCTACCTGTAGAATCCTTAGTTGATGGTCTGAACCACAAAACTTGCAAAACATCATGAGACAAACCCAAGATTGAACCTCTCCACAAATTAAACTTAGATTGCCAAACTGCTGGATCGTTAACTTGTTCATGTTCGATCAAATCAGCGAAGTTTGACATGCCCAATCTTCTTTCAATAACTGCCAAAACCATCTTTCTTGCCTTATCAACCATAGCTGGATAATTTTCTGTAGATGCGTCACCAGTTTTTGACTTCATATGACCGATTGGAACCAAAACAATAACAGAATCTTTACCATCTGGTGCAGCAGATGGATCGATTCTTGATGGAACGTTAACGTAGAAAGAAGCTTCTGATGGCAAACCGAAATCCTTAAAAATTTCATCGAATGATTCTTGGTATGCTTCAGCCAAGAAAATGTTATGAACATCCAATTGTGGAACCTTAGTAGACATTGACCAGTAGAAAGAGATAGATGAAGATGTCAATTTCTTAGAAGCCAATGTGTTTTGAGTCCATCTACATGGTGGTAACAAATTATGGTATGCGTAAACCAAATCAGCATTACAAACAACTGCATCAGCATCGATGATATGACCGTTTTCCAATGTAACACCAGTAACTTGCTTTGTTGCATCATCAGTATTAATCTTTGCAACTGGAGCGTTATATATGAATTCAGCATCGTACTTTTGCTTTGCGATAGCTTCCAACTTTTGAACAACCATATTAAAACCACCTCTTGGATACCAAATACCTTCAGCAAATTCAGTGTATTGCAACAAAGAGTAAACTGCTGGAGCATCGTATGGTGACATGCCCATGTACATTGTTTGGAAAGTAAAAGCCATTCTCATTTTCTTAGTCTTGAAGTACTTAGATGCTCTATCATAGATTTTACCGAACAAATGCAATCTAAAAATTTCTGGTGCGTATTTAATTCTGATCAAATCCCAGATAGATTCGAAATTTTTCTTCAAAGCGATCAATGTACCTGATTCGTAATGGATATGAGTTTCCTTCATGAAATCTAAAAATCTACCGAAACCCAATGGACCTTCAACTCTATCCAATTCAGCTTTCATTCTAGTCAAATCTGAAGACAATTGGATAGATTCACCATCATCGAAATGAACCTTGTAGTTGTTATCACATCTCAACAATTCCAAATGATCTTGGATTCTTTCATCCAAATCTGCGAAAGCATCTTCGAAGTACTTTGGCATCAAATACAAAGATGGACCTTGATCGAATCTATGACCTTGATGATGGATCAATGAACATCTACCACCACCAAAATCATTCTTTTCAACAACTGTAACTTTAAAACCTTCTCTAGCCAATCTTGCAGCTGTTGCAGTACCACCAACACCAGCACCGATGATAACGATATGTTTCTTAGACATTTATATTGAATTTTCAAAAATTCTTACTTTTTTTTTGGATGGACGCAAAGAAGTTTAATAATCATATTACATGGCAATACCACCATATACATATCCATATCTAATCTTACTTATATGTTGTGGAAATGTAAAGAGCCCCATTATCTTAGCCTAAAAAAACCTTCTCTTTGGAACTTTCAGTAATACGCTTAACTGCTCATTGCTATATTGAAGTACGGATTAGAAGCCGCCGAGCGGGCGACAGCCCTCCGACGGAAGACTCTCCTCCGTGCGTCCTGGTCTTCACCGGTCGCGTTCCTGAAACGCAGATGTGCCTCGCGCCGCACTGCTCCGAACAATAAAGATTCTACAATACTAGCTTTTATGGTTATGAAGAGGAAAAATTGGCAGTAACCTGGCCCCACAAACCTTCAAATCAACGAATCAAATTAACAACCATAGGATAATAATGCGATTAGTTTTTTAGCCTTATTTCTGGGGTAATTAATCAGCGAAGCGATGATTTTTGATCTATTAACAGATATATAAATGCAAAAGCTGCATAACCACTTT

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AACTAATACTTTCAACATTTTCGGTTTGTATTACTTCTTATTCAAATGTCATAAAAGTATCAACAAAAAATTGTTAATATACCTCTATACTTTAACGTCAAGGAGAAAAAACTATAATGTCACAACCACCATTATTGGACCACGCTACACAAACTATGGCAAACGGTTCTAAATCTTTCGCTACTGCTGCTAAATTATTCGACCCAGCAACAAGAAGATCTGTATTGATGTTGTACACCTGGTGTAGACATTGCGATGACGTTATAGATGACCAAACTCACGGTTTTGCTTCAGAAGCTGCAGCCGAAGAAGAAGCTACACAAAGATTGGCAAGATTAAGAACTTTGACATTAGCTGCATTCGAAGGTGCCGAAATGCAAGATCCAGCTTTTGCCGCTTTCCAAGAAGTTGCATTAACCCATGGTATTACTCCTAGAATGGCTTTGGATCACTTAGACGGTTTTGCAATGGATGTCGCCCAAACAAGATACGTAACCTTCGAAGACACTTTAAGATATTGTTACCATGTCGCCGGTGTTGTCGGTTTGATGATGGCTAGAGTAATGGGTGTTAGAGATGAAAGAGTTTTAGATAGAGCATGTGACTTGGGTTTAGCCTTCCAATTGACAAACATAGCTAGAGATATAATAGATGACGCAGCCATAGACAGATGCTATTTGCCAGCTGAATGGTTACAAGATGCAGGTTTGACTCCTGAAAATTACGCTGCAAGAGAAAACAGAGCCGCTTTAGCCAGAGTTGCTGAAAGATTGATAGATGCAGCCGAACCATATTACATCTCTTCACAAGCTGGTTTGCATGATTTGCCACCTAGATGCGCATGGGCCATTGCTACCGCAAGATCTGTTTACAGAGAAATCGGTATTAAAGTCAAGGCTGCAGGTGGTTCCGCATGGGATAGAAGACAACACACTTCTAAAGGTGAAAAGATCGCTATGTTGATGGCCGCTCCTGGTCAAGTTATTAGAGCAAAGACCACCAGAGTCACCCCAAGACCAGCCGGTTTATGGCAAAGACCTGTTTAAATTGAATTGAATTGAAATCGATAGATCAATTTTTTTCTTTTCTCTTTCCCCATCCTTTACGCTAAAATAATAGTTTATTTTATTTTTTGAATATTTTTTATTTATATACGTATATATAGACTATTATTTATCTTTTAATGATTATTAAGATTTTTATTAAAAAAAATTACGCTCCTCTTTTAATGCCTTTATGCAGTTTTTTTTCCCATTCGATATTTCTATGTTCGGGTTCAGCGTATTTTAAGTTTAATAACTCGAAAATTCTGCGTTCGTTGTAAATGCATGTATACTAAACTCACAAATTAGAGCTTCAATTTAATTATATCAGTTATTACCCGGGAATCTCGGTCGTAATGATTTCTATAATGACGAAAAAAAAAAAATTGGAAAGAAAAAGCTTCATGGCCTTTATAAAAAGGAACTATCCAATACCTCGCCAGAACCAAGTAACAGTATTTTACGGGGCACAAATCAAGAACAATAAGACAGGACTGTAAAGATGGACGCATTGAACTCCAAAGAACAACAAGAGTTCCAAAAAGTAGTGGAACAAAAGCAAATGAAGGATTTCATGCGTTTGTACTCTAATCTGGTAGAAAGATGTTTCACAGACTGTGTCAATGACTTCACAACATCAAAGCTAACCAATAAGGAACAAACATGCATCATGAAGTGCTCAGAAAAGTTCTTGAAGCATAGCGAACGTGTAGGGCAGCGTTTCCAAGAACAAAACGCTGCCTTGGGACAAGGCTTGGGCCGATAAGGTGTACTGGCGTATATATATCTAATTATGTATCTCTGGTGTAGCCCATTTTTAGCATGTAAATATAAAGAGAAACCATATCTAATCTAACCAAATCCAAACAAAATTCAATAGTTACTATCGCTTTTTTCTTTCTGTATCGCAAATAAGTGAAAATTAAAAAAGAAAGATTAAATTGGAAGTTGGATATGGGCTGGAACAGCAGCAGTAATCGGTATCGGGTTCGCCACTAATGACGTCCTACGATTGCACTCAACAGACCTTGACGCTCACGCCGTAGCGGGCGACAAGTCAAACGGAACAACCGTTGCCGTTCCCATCGGAGTCCGACCTAGGCCGAACTCCGTGAATTTCTGATAACAACGGTCGGTAAAGACTGGTTCCCCAGTATATTTCTTCTCTCAGGAGCAGGGGCCAATGCCAAAAGCGACATTAACCCGGAGGACAAGGCTCCACTGTGTTCCACCGAATTTCCCACCTGATAATATCTGATAACCCGCCCATAGGTGGGGATCCTTCTGTAAACAGGTTTCTTAATCGTAGGAATTACCACTGTTCCACTGCCAATCGCAGCTCCCAGAGTTTCGTTCCCAGCCGCGAGCACCACAGCGTACCATGTGCGCCACGAGGCCTCAAACGTAAAACAATCGAAACGAAAAGAAACAGACTATAGGGGAGTATAGAGACAGCCGGCCAATAAGAAGAGGAAAAAGAAATACTAGCGTTTATCAATGTGGGTCGTTAACATATCCTGTTGACAATGATTACAGGTTAAAAGGTAGCGTAAGTGAATATTAACTATGGATATTCTTATACTTAGATAAGAGACATATAAAACACACGATGATTGATTGATTTTTATGACCAATATATGTAATTCGTAATTCAGATAGTTTTTATACTTTTAATGTGTGCCGAACCATATTACTAGTATATGTAACTACCATGTTATGTTCAATTGGCAGATCTTTAACTCGGCTTTAGTTATCCAAGTTACTTGCAATATTTCCTTCTGCGAGAGTACATTTGCCCTTAAACG(SEQ ID NO：2)。

[0044]再构建Δgal1，Δgal7，Δgal10:pGAL10-tHMG1敲除盒，即敲除盒片段3，敲除盒片

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段3具有如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。设计上、下游引物PCR扩增各片段，使其相互之间有60-80bp的重叠片段，再通过同源重组的方式将所有片段重组在一起，通过酶切线性化得到Δgal1，Δgal7，Δgal10::pGAL10-tHMG1敲除片段，敲除盒片段3的结构如图3所示。利用酵母自身的同源重组机制将该片段通过醋酸锂法酵母转化分别整合到酵母J1011-2基因组上，整合位点为GAL1，GAL7和GAL10，转化后采用SD-Trp固体板(合成酵母氮源YNB 6.7g/L，葡萄糖20g/L，缺色氨酸的混合氨基酸粉末1.3g/L，2％琼脂粉)进行筛选，得到的转化子通过分纯培养后提取酵母基因组进行PCR验证，成功验证的菌株命名为J1011-3.

[0045]

TTCACCGATTCTGAGCGAATCACAGGTGAGAAATTTGGATTCGAAATAAACCTAAAAAAACTATCCAATAAGGCTTCCATAGGCTTCGTATTTCCCGACCATTCCAATTGGAAAAATTGAGCGCTGTCTTCCATGATCTTAGATAAAGCCTTAATACTTGGCTCATTTCCATTTGAGGTTAGCTCTAGCAACTGGTAAAGCATTTGAAGACCAGTTGGATCATCTCTATGCTGCCTATAGTAAGTGGAAAATAAAGTAGTAATAACGATACCTGTCACGTTCGAAACGAGATTATTGTTCGAATTATAAAGGCCATGTATAATGTTTGATTTGACGTATCCTAAGTCGTGGCTATTGCTCTTAATTAAATTGTTTCCCCCTAGCATTGAATTTTTCAACAGCATACCGGCGGTAGCTCTATTGTTCTGAAGATCCTGTAGGGAGTAGTGTTGCTTCAATACATCATCAGATTCGCCTTCAATTAAAATATAACACAAATAATTGAGAAATTCAGGTTGCAGCTGGAAGTTCTCCATAGCTTCCATTGCGTTATTACGAATCTCTGGATTTGGTGACATACAGTTCTGTAAAAGAGTTGCTAGTTGCAACACATAGTCTTCGGCGGGCTTCCATGTCGATGCCATCTTTATTCACTTAACTACTGCTAACAATTCTGGAAACCAAAGACTGCGGAATATTCTGATATGTATTACTACTATTCGCTGCTCTTCTGCATAATTAATACTGAAAAGTTTTTCATACTTTTAAACATAACCTTTTTTTAAGCAAAACTCTATGACCCGGATTAGAAAACTACGAAAAGAGGGTAATAACATAGGTGCAGGATTTCCATCGATAACGACGCCGACAATGAGCCTTGCTGCAACATCCAATTAGGACTAATAACTATCGTAGGAATTTCTACGTAATAAACTTCAACAGAGCCTAAAATTTGAAAATAAATAATCTAGAGGGGAAACTTAAAGAAATTCTATTCTTGTCAATAAAGTGGAAATCTGTCAGATGTCACAGTTTCTTTATTTGTGACACATATTTTCAACATAAATTCAGGCATTAGTGCTGTAAGCACAAAAAGTTGTGGCGATATGAATATTCCAGATTTTACTTACAAGCTGCATTGTAGTCTTACAATTCTTTTTTTCTTTTTTTTTTTTTATGGAAAGGACCACTCTTACATAACTAGAATAGCATTAAGAATCAGATTTACAGATAAAGATGACATTATTTTATATATATATTGTCACTCCGTTCAAGTCGACAACCAATAAAAAATTTAAAAAAAGCCAGGCAGTTAATAGAAAAAATATGATATGAATGAATATTCCACTTTCTTTTCACAGCTTGTCTGTAAGCGGATGCCGGGAGCAGACAAGCCCGTCAGGGCGCGTCAGCGGGTGTTGGCGGGTGTCGGGGCTGGCTTAACTATGCGGCATCAGAGCAGATTGTACTGAGAGTGCACCATAAACGACATTACTATATATATAATATAGGAAGCATTTAATAGACAGCATCGTAATATATGTGTACTTTGCAGTTATGACGCCAGATGGCAGTAGTGGAAGATATTCTTTATTGAAAAATAGCTTGTCACCTTACGTACAATCTTGATCCGGAGCTTTTCTTTTTTTGCCGATTAAGAATTAATTCGGTCGAAAAAAGAAAAGGAGAGGGCCAAGAGGGAGGGCATTGGTGACTATTGAGCACGTGAGTATACGTGATTAAGCACACAAAGGCAGCTTGGAGTATGTCTGTTATTAATTTCACAGGTAGTTCTGGTCCATTGGTGAAAGTTTGCGGCTTGCAGAGCACAGAGGCCGCAGAATGTGCTCTAGATTCCGATGCTGACTTGCTGGGTATTATATGTGTGCCCAATAGAAAGAGAACAATTGACCCGGTTATTGCAAGGAAAATTTCAAGTCTTGTAAAAGCATATAAAAATAGTTCAGGCACTCCGAAATACTTGGTTGGCGTGTTTCGTAATCAACCTAAGGAGGATGTTTTGGCTCTGGTCAATGATTACGGCATTGATATCGTCCAACTGCATGGAGATGAGTCGTGGCAAGAATACCAAGAGTTCCTCGGTTTGCCAGTTATTAAAAGACTCGTATTTCCAAAAGACTGCAACATACTACTCAGTGCAGCTTCACAGAAACCTCATTCGTTTATTCCCTTGTTTGATTCAGAAGCAGGTGGGACAGGTGAACTTTTGGATTGGAACTCGATTTCTGACTGGGTTGGAAGGCAAGAGAGCCCCGAAAGCTTACATTTTATGTTAGCTGGTGGACTGACGCCAGAAAATGTTGGTGATGCGCTTAGATTAAATGGCGTTATTGGTGTTGATGTAAGCGGAGGTGTGGAGACAAATG

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GTGTAAAAGACTCTAACAAAATAGCAAATTTCGTCAAAAATGCTAAGAAATAGGTTATTACTGAGTAGTATTTATTTAAGTATTGTTTGTGCACTTGCCTATGCGGTGTGAAATACCGCACAGATGCGTAAGGAGAAAATACCGCATCAGGAAATTGTAAACGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGTTGTTCCAGTTTGGAACAAGAGTCCACTATTAAAGAACGTGGACTCCAACGTCAAAGGGCGAAAAACCGTCTATCAGGGCGATGGCCCACTACGTGAACCATCACCCTAATCAAGTTTTTTGGGGTCGAGGTGCCGTAAAGCACTAAATCGGAACCCTAAAGGGAGCCCCCGATTTAGAGCTTGACGGGGAAAGCCGGCGAACGTGGCGAGAAAGGAAGGGAAGAAAGCGAAAGGAGCGGGCGCTAGGGCGCTGGCAAGTGTAGCGGTCACGCTGCGCGTAACCACCACACCCGCCGCGCTTAATGCGCCGCTACAGGGCGCGTCGCGCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGAGCGCGCGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGGTACTACACGGTCCAATGGATAAACATTTTTTATCAACACTATGATATATAAATATAATAGTTTTTCGTATATATATTCCTTTTTTTGGTCAATTTTTGAAATTTTCGTAGAAAAGGGAGAGACAAAACACATTATATCAATGAAAACGTACAAAAAGTAGATAAAGTCAGTGCTTAAACACGTCTTTTCCTTAAAAATACTTTATTATTTTTATTTTATTGAGAGGGTGGTTTAAAAATAGAAATAGAGAGAGAGGTACATACATAAACATACGCGCACAAAAGCAGAGATTAGGATTTAATGCAGGTGACGGACCCATCTTTCAAACGATTTATATCAGTGGCGTCCAAATTGTTAGGTTTTGTTGGTTCAGCAGGTTTCCTGTTGTGGGTCATATGACTTTGAACCAAATGGCCGGCTGCTAGGGCAGCACATAAGGATAATTCACCTGCCAAGACGGCACAGGCAACTATTCTTGCTAATTGACGTGCGTTGGTACCAGGAGCGGTAGCATGCGGGCCTCTTACACCTAATAAGTCCAACATGGCACCTTGTGGTTCTAGAACAGTACCACCACCGATGGTACCTACTTCGATGGATGGCATGGATACGGAAATTCTCAAATCACCGTCCACTTCTTTCATCAATGTTATACAGTTGGAACTTTCAACATTTTGTGCAGGATCTTGTCCTAATGCCAAGAAAACAGCTGTCACTAAATTAGCTGCATGTGCGTTAAATCCACCAACAGACCCAGCCATTGCAGATCCAACCAAATTCTTAGCAATGTTCAACTCAACCAATGCGGAAACATCACTTTTTAACACTTTTCTGACAACATCACCAGGAATAGTAGCTTCTGCGACGACACTCTTACCACGACCTTCGATCCAGTTGATGGCAGCTGGTTTTTTGTCGGTACAGTAGTTACCAGAAACGGAGACAACCTCCATATCTTCCCAGCCATACTCTTCTACCATTTGCTTTAATGAGTATTCGACACCTTTAGAAATCATATTCATACCCATTGCGTCACCAGTAGTTGTTCTAAATCTCATGAAGAGTAAATCTCCTGCTAGACAAGTTTGAATATGTTGCAGACGTGCAAATCTTGATGTAGAGTTAAAAGCTTTTTTAATTGCGTTTTGTCCCTCTTCTGAGTCTAACCATATCTTACAGGCACCAGATCTTTTCAAAGTTGGGAAACGGACTACTGGGCCTCTTGTCATACCATCCTTAGTTAAAACAGTTGTTGCACCACCGCCAGCATTGATTGCCTTACAGCCACGCATGGCAGAAGCTACCAAACAACCCTCTGTAGTTGCCATTGGTATATGATAAGATGTACCATCGATAACCAAGGGGCCTATAACACCAACGGGCAAAGGCATGTAACCTATAACATTTTCACAACAAGCGCCAAATACGCGGTCGTAGTCATAATTTTTATATGGTAAACGATCAGATGCTAATACAGGAGCTTCTGCCAAAATTGAAAGAGCCTTCCTACGTACCGCAACCGCTCTCGTAGTATCACCTAATTTTTTCTCCAAAGCGTACAAAGGTAACTTACCGTGAATAACCAAGGCAGCGACCTCTTTGTTCTTCAATTGTTTTGTATTTCCACTACTTAATAATGCTTCTAATTCTTCTAAAGGACGTATTTTCTTATCCAAGCTTTCAATATCGCGGGAATCATCTTCCTCACTAGATGATGAAGGTCCTGATGAGCTCGATTGCGCAGATGATAAACTTTTGACTTTCGATCCAGAAATGACTGTTTTATTGGTTAAAACCATTTATATTGAATTTTCAAAAATTCTTACTTTTTTTTTGGATGGACGCAAAGAAGTTTAATAATCATATTACATGGCAATACCACCATATACATATCCATATCTAATCTTACTTATATGTTGTGGAAATGTAAAGAGCCCCATTATCTTAGCCTAAAAAAACCTTCTCTTTGGAACTTTCAGTAATACGCTTAACTGCTCATTGCTATATTGAAGTACGGATTAGAAGCCGCCGAGCGGGCGACAGCCCTCCGACGGAAGACTCTCCTCCGTGCGTCCTGGTCTTCACCGGTCGCGTTCCTGAAACGCAGATGTGCCTCGCGCCGCACTGCTCCGAACAATAAAGATTCTACAATACTAGCTTTTATGGTTATGAAGAGGAAAAATTGGCAGTAACCTGG

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CCCCACAAACCTTCAAATCAACGAATCAAATTAACAACCATAGGATAATAATGCGATTAGTTTTTTAGCCTTATTTCTGGGGTAATTAATCAGCGAAGCGATGATTTTTGATCTATTAACAGATATATAAATGCAAAAGCTGCATAACCACTTTAACTAATACTTTCAACATTTTCGGTTTGTATTACTTCTTATTCAAATGTCATAAAAGTATCAACAAAAAATTGTTAATATACCTCTATACTTTAACGTCAAGGAGAAAAAACTATAGCGCAATGATTGAATAGTCAAAGATTTTTTTTTTTTAATTTTTTTTTTTTCATAGAACTTTTTATTTAAATAAATCACGTCTATATATGTATCAGTATAACGTAAAAAAAAAAACACCGTCAGTTAAACAAAACATAAATAAAAAAAAAAAGAAGTGTCAAATCAAGTGTCAAATGTATACTTCTTTTTTTTACTTTGTTCAGAACAACTTCTCATTTTTTTCTACTCATAACTTTAGCATCACAAAGTACACAATAATAACGAGTAGTAACACTTTTATAGTTCATACATGCTTCAACTACTTAATAAATGATTGTATGATAATGTTTTCAATGTAAGAGATTTCGATTATCCACAAACTTTGAAACACAGGGACACAATTCTTGATATGCTTTCAACCGCTGCGTTTTGGATACCTATTCTTGACATAATATGACTACCATTTTGTTATTGTACGTGGGGCAGTTGACGTCTTATCATATGTCAAAGTCATTTGCGAAGTTCTTGGCAAGTTGCCAACTGACGAGATGCAGTAAAAAGAGATTGCCGTCTTGAAACTTTTTGTCCTTTTTTTTTTCCGGGGACTCTACGAGAACCCTTTGTCCTACTGATTAATTTTGTACTGAATTTGGACAATTCAGATTTTAGTAGACAAGCGCGAGGAGGAAAAGAAATGACAGAAAAATTCCGATGGACAAGAAGATAGGAAAAAAAAAAAGCTTTCACCGATTTCCTAGACCGGAAAAAAGTCGTATGACATCAGAATGAAAAATTTTCAAGTTAGACAAGGACAAAATCAGGACAAATTGTAAAGATATGATAAATCATTTGATTCAGCGCCAATTTGCCCTTTTCCATTTTCCATTAAATCTCTGTTCTCTCTTACTTATATGATGATTAGGTATCATCTGTATAAAACTCCTTTCTTAATTTCACTCTAAAGCATACCCCATAGAGAAGATCTTTCGGTTCGAAGACATTCCTACGCATAATAAGAATAGGAGGGAATAATGCCAGACAATCTATCATTACATTTAAGCGGCTCTTCAAAAAGATTGAACTCTCGCCAACTTATGGAATCTTCCAATGAGACCTTTGCGCCAAATAATGTGGATTTGGAAAAAGAGTATAAGTCATCTCAGAGTAATATAACTACCGAAGTTTATGAGGCATCGAGCTTTGAAGAAAAAGTAAGCTCAGAAAAACCTCAATACAGCTCATTCTGGAAGAAAATCTATTATGAATATGTGGTCGTTGACAAATCAATCTTGGGTGTTTCTATTCTGGATTCATTTATGTACAACCAGGACTTGAAGCCCGTCGAAAAAGAAAGGCGGGTTTGGTCCTGGTACAATTATTGTTACTTCTGGCTTGCTGAATGTTTCAATATCAACACTTGGCAAATTGCAGCTACAGGTCTACAACTGGGTCTAAATTGGTGGCAGTGTTGGATAACAATTTGGATTGGGTACGGTTTCGTTGGTGCTTTTGTTGTTTTGGCCTCTAGAGTTGGATCTGCTTATCATTTGTCATTCCCTATATCATCTAGAGCATCATTCGGTATTTTCTTCTCTTTATGGCCTGTTATTAATAGAGTCGTCATGGCCATCGTTTGGTATAGTGTCCAAGCTTATATTGCGGCAACTCCCGTATCATTAA(SEQ ID NO：3)。[0046]更进一步，发明人通过实验验证，J1011-3具有高产番茄红素的性能，同时过表达BtCarG，PaCrtB，McCrtI基因所获得的酵母菌株，其番茄红素的产量优于其它基因组合。[0047]在以下实验中，发明人进一步对J1011-3菌株进行改造，具体如下所述：[0048]实施例2 启动子和终止子的选择[0049]为了能用半乳糖进行诱导，需要敲除代谢半乳糖的基因GAL1,GAL7,GAL10。因此特征启动子的背景菌株为敲除基因GAL1,7,10。半乳糖价格较高，并不适用于工业化生产，因此在敲除基因GAL1,7,10的基础上敲除GAL80，以期通过对葡萄糖量的控制达到对基因表达的。所得到的启动子信息用于构建控制类胡萝卜素合成相关基因的表达。[0050]如图4所示，在ΔGAL1/7/10/80菌株和ΔGAL1/7/10菌株中不论是诱导型启动子或是组成型启动子在稳定期强度基本一致。可见，敲除GAL80可以起到不加半乳糖即可诱导基因表达，诱导强度跟与半乳糖诱导强度相当。[0051]酵母属于真核生物，在其体内过表达基因需要选择合适的启动子和终止子，经过反复多次实验，发明人选择了PGAL1，PGAL7，PGAL10，PGAL1-10，PGAL10-1和PHXT1作为表达基因的启动

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子。其中，PGAL1具有如SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列，PGAL7具有如SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列，PGAL10具有如SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列，PGAL1-10具有如SEQ ID NO：7所示的核苷酸序列，PGAL10-1具有如SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列，PHXT1具有如SEQ ID NO：9所示的核苷酸序列。

[0052]

AGTACGGATTAGAAGCCGCCGAGCGGGCGACAGCCCTCCGACGGAAGACTCTCCTCCGTGCGTCCTGGTCTTCACCGGTCGCGTTCCTGAAACGCAGATGTGCCTCGCGCCGCACTGCTCCGAACAATAAAGATTCTACAATACTAGCTTTTATGGTTATGAAGAGGAAAAATTGGCAGTAACCTGGCCCCACAAACCTTCAAATCAACGAATCAAATTAACAACCATAGGATAATAATGCGATTAGTTTTTTAGCCTTATTTCTGGGGTAATTAATCAGCGAAGCGATGATTTTTGATCTATTAACAGATATATAAATGCAAAAGCTGCATAACCACTTTAACTAATACTTTCAACATTTTCGGTTTGTATTACTTCTTATTCAAATGTCATAAAAGTATCAACAAAAAATTGTTAATATACCTCTATACTTTAACGTCAAGGAGAAAAAACTATA(SEQ ID NO：4)。

[0053]

GACGGTAGCAACAAGAATATAGCACGAGCCGCGAAGTTCATTTCGTTACTTTTGATATCGCTCACAACTATTGCGAAGCGCTTCAGTGAAAAAATCATAAGGAAAAGTTGTAAATATTATTGGTAGTATTCGTTTGGTAAAGTAGAGGGGGTAATTTTTCCCCTTTATTTTGTTCATACATTCTTAAATTGCTTTGCCTCTCCTTTTGGAAAGCTATACTTCGGAGCACTGTTGAGCGAAGGCTCATTAGATATATTTTCTGTCATTTTCCTTAACCCAAAAATAAGGGAAAGGGTCCAAAAAGCGCTCGGACAACTGTTGACCGTGATCCGAAGGACTGGCTATACAGTGTTCACAAAATAGCCAAGCTGAAAATAATGTGTAGCTATGTTCAGTTAGTTTGGCTAGCAAAGATATAAAAGCAGGTCGGAAATATTTATGGGCATTATTATGCAGAGCATCAACATGATAAAAAAAAACAGTTGAATATTCCCTCAAAA(SEQ ID NO：5)。

[00]

TACTTCAATATAGCAATGAGCAGTTAAGCGTATTACTGAAAGTTCCAAAGAGAAGGTTTTTTTAGGCTAAGATAATGGGGCTCTTTACATTTCCACAACATATAAGTAAGATTAGATATGGATATGTATATGGTGGTATTGCCATGTAATATGATTATTAAACTTCTTTGCGTCCATCCAAAAAAAAAGTAAGAATTTTTGAAAATTCAATATAA(SEQ ID NO：6)。

[0055]

TATAGTTTTTTCTCCTTGACGTTAAAGTATAGAGGTATATTAACAATTTTTTGTTGATACTTTTATGACATTTGAATAAGAAGTAATACAAACCGAAAATGTTGAAAGTATTAGTTAAAGTGGTTATGCAGCTTTTGCATTTATATATCTGTTAATAGATCAAAAATCATCGCTTCGCTGATTAATTACCCCAGAAATAAGGCTAAAAAACTAATCGCATTATTATCCTATGGTTGTTAATTTGATTCGTTGATTTGAAGGTTTGTGGGGCCAGGTTACTGCCAATTTTTCCTCTTCATAACCATAAAAGCTAGTATTGTAGAATCTTTATTGTTCGGAGCAGTGCGGCGCGAGGCACATCTGCGTTTCAGGAACGCGACCGGTGAAGACCAGGACGCACGGAGGAGAGTCTTCCGTCGGAGGGCTGTCGCCCGCTCGGCGGCTTCTAATCCGTACTTCAATATAGCAATGAGCAGTTAAGCGTATTACTGAAAGTTCCAAAGAGAAGGTTTTTTTAGGCTAAGATAATGGGGCTCTTTACATTTCCACAACATATAAGTAAGATTAGATATGGATATGTATATGGTGGTATTGCCATGTAATATGATTATTAAACTTCTTTGCGTCCATCCAAAAAAAAAGTAAGAATTTTTGAAAATTCAATATAA(SEQ ID NO：7)。

[0056]

TTATATTGAATTTTCAAAAATTCTTACTTTTTTTTTGGATGGACGCAAAGAAGTTTAATAATCATATTACATGGCAATACCACCATATACATATCCATATCTAATCTTACTTATATGTTGTGGAAATGTAAAGAGCCCCATTATCTTAGCCTAAAAAAACCTTCTCTTTGGAACTTTCAGTAATACGCTTAACTGCTCATTGCTATATTGAAGTACGGATTAGAAGCCGCCGAGCGGGCGACAGCCCTCCGACGGAAGACTCTCCTCCGTGCGTCCTGGTCTTCACCGGTCGCGTTCCTGAAACGCAG

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ATGTGCCTCGCGCCGCACTGCTCCGAACAATAAAGATTCTACAATACTAGCTTTTATGGTTATGAAGAGGAAAAATTGGCAGTAACCTGGCCCCACAAACCTTCAAATCAACGAATCAAATTAACAACCATAGGATAATAATGCGATTAGTTTTTTAGCCTTATTTCTGGGGTAATTAATCAGCGAAGCGATGATTTTTGATCTATTAACAGATATATAAATGCAAAAGCTGCATAACCACTTTAACTAATACTTTCAACATTTTCGGTTTGTATTACTTCTTATTCAAATGTCATAAAAGTATCAACAAAAAATTGTTAATATACCTCTATACTTTAACGTCAAGGAGAAAAAACTATA(SEQ ID NO：8)。

[0057]

GATTTTACGTATATCAACTAGTTGACGATTATGATATCTTTATAGATTTTAAGGTGGGGAAAGAACATGAGACCCCAGATGGAATTGATTATGGGGACATTGTTGCCTTTATATATAATTTCAATATACTAATTCAAATGATTAAAAACGTGAGGGGGACACGCAACTTCGGGTGTTAAGAAATATTTTGCTACATTAGATAATGGTGGAGTTTCCTGGCTTGTCGGATAAAAGCCATCAAATGTCGCAGCAGCTCATGTTTACGTTTGCTGTCTTCTGCCCACGTCATATGAGTGGTATTCTTCTATCAGCACTTGATGAATATTCTTTTTCTCATATATCTGAAAGACAAAAGATCGGCACGGCAATGCCCTGCAGCATTTCTTCCTAGTTTTTCCGAATTTCCATTACGTATTGGATCTTGTGCGCATATTTGTCAGTCCTTCACGGAAAAAAAAAAAGAGCACTGGGTCACTTCGGAAAAACTTTTGACTCAATGCAACAGTGTCATAATCCTTTGCGCTGTCTCTTTGAAGAAAAATCAGGAGTGCAAGATATCGATTAATTCCTTGGAAGTTATGATGGTTAGTCTTAGTTTAACTCTCTTGAAGAAGGGTTTTTTCAGTTGGTCAACACTCTTTAGAGGTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGAGAATTCTTCATGTAATTTACCATGATTCTACGTTTTTGCAAGCAAAAATGAAGATAATCCGAGCGCATGCGCAAGTAGTCCCTGCCATGCCGCTTCGGAAAAACTTTCGAAACCAATACTCCTTACATCCGCCTTGAATTTAGGACCTACAATTGTTGTCTCTTCTGCTTGAACCAATAAGCCCTAGAAACCTTACACCCTAATTTGCACAAGAAAACTACGAAAAAATTTTTTCCTCTTTTTTCCGCAGCTCCAATCTCGCCCTGCTATTTTTTTGGTTCGGAGAAAAATAGTCGGTCGATATGAATTGAAGTTTCATTGTGGCCACTCGTTTAGGAATGGAATAACCTCCGCGAATGGAAAAAAAGAACTCGGAATATCAAAAATTCCGGCTCAAAGGAAAAATTTGCTTCAGGAGGGGGGAATTATATTCCAGATGAGACCTGCA(SEQ ID NO：9)。[0058]选择任意的终止子(比如TADH2，TGAL10，TCYC1，TGPM1和TPGK1等)作为表达基因的终止子，这些元件的组合搭配能够实现多个基因的过表达。[0059]实施例3 第二代工程菌株的构建[0060]在本实施例中，发明人以J1011-3菌株为基础，在J1011-3菌株上调整BtCarG(Blakeslea trispora)，PaCrtB(Pantoea Agglomerans)和McCrtI(Mucor circinelloides)这三个基因的拷贝数，获得第二代菌株。[0061]其中第二代工程菌株的具体特性如表1所示。按照设计选择合适的启动子和终止子，用上、下游引物PCR扩增各片段，使其相互之间有60-80bp的重叠片段，再通过同源重组的方式将所有片段重组在一起，通过酶切线性化得到各相应片段，利用酵母自身的同源重组机制将该片段通过醋酸锂法酵母转化分别整合到酵母J1011-3基因组上，转化后采用筛选抗性固体板进行筛选，得到的转化子通过分纯培养后提取酵母基因组进行PCR验证，成功验证的菌株详见表1。[0062]表1：第二代工程菌株

[0063]

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其中，McCrtI具有如SEQ ID NO：10所示的核苷酸序列，PaCrtB具有如SEQ ID NO：

11所示的核苷酸序列，BtCarG具有如SEQ ID NO：12所示的核苷酸序列。

[0066]

[0065]

ATGTCTAAGAAACATATCGTTATCATCGGTGCTGGTGTTGGTGGTACTGCAACAGCTGCAAGATTGGCTAGAGAAGGTTTTAAAGTTACAGTTGTTGAAAAGAATGATTTTGGTGGTGGTAGATGTTCATTGATCCATCATCAAGGTCATAGATTCGATCAAGGTCCATCTTTGTATTTGATGCCAAAGTACTTCGAAGATGCTTTCGCAGATTTGGATGAAAGAATCCAAGATCATTTGGAATTGTTGAGATGTGATAACAACTACAAGGTTCATTTCGATGATGGTGAATCTATCCAATTGTCTTCAGATTTGACTAGAATGAAAGCTGAATTGGATAGAGTTGAAGGTCCATTGGGTTTCGGTAGATTTTTAGATTTCATGAAGGAAACTCATATCCATTACGAATCAGGTACATTGATCGCTTTGAAGAAAAATTTCGAATCTATCTGGGATTTGATCAGAATTAAATACGCACCAGAAATTTTTAGATTGCATTTGTTCGGTAAAATCTATGATAGAGCATCTAAGTACTTCAAGACTAAGAAAATGAGAATGGCTTTTACTTTCCAAACAATGTACATGGGCATGTCACCATACGATGCTCCAGCAGTTTACTCTTTGTTGCAATACACTGAATTTGCTGAAGGTATTTGGTATCCAAGAGGTGGTTTTAATATGGTTGTTCAAAAGTTGGAAGCTATCGCAAAGCAAAAGTACGATGCTGAATTCATATATAACGCTCCAGTTGCAAAGATTAATACTGATGATGCAACAAAGCAAGTTACTGGTGTTACATTGGAAAACGGTCATATCATCGATGCTGATGCAGTTGTTTGTAATGCTGATTTGGTTTACGCATACCATAATTTGTTACCACCATGTAGATGGACTCAAAACACATTGGCTTCTAAGAAATTGACATCTTCATCTATCTCTTTCTACTGGTCAATGTCTACTAAGGTTCCACAATTGGATGTTCATAACATTTTCTTGGCTGAAGCATACCAAGAATCATTCGATGAAATTTTTAAGGATTTCGGTTTGCCATCAGAAGCTTCTTTCTACGTTAACGTTCCATCAAGAATCGATCCATCTGCTGCACCAGATGGTAAAGATTCTGTTATTGTTTTGGTTCCAATCGGTCATATGAAGTCAAAAACTGGTGACGCATCTACAGAAAATTATCCAGCTATGGTTGATAAGGCAAGAAAGATGGTTTTGGCAGTTATTGAAAGAAGATTGGGCATGTCAAACTTCGCTGATTTGATCGAACATGAACAAGTTAACGATCCAGCAGTTTGGCAATCTAAGTTTAATTTGTGGAGAGGTTCAATCTTGGGTTTGTCTCATGATGTTTTGCAAGTTTTGTGGTTCAGACCATCAACTAAGGATTCTACAGGTAGATACGATAATTTGTTTTTCGTTGGTGCTTCAACTCATCCAGGTACAGGTGTTCCAATTGTTTTGGCAGGTTCAAAGTTGACTTCTGATCAAGTTGTTAAGTCTTTCGGTAAAACACCAAAGCCAAGAAAGATCGAAATGGAAAACACTCAAGCACCATTGGAAGAACCAGATGCTGAATCAACATTTCCAGTTTGGTTTTGGTTAAGAGCTGCATTCTGGGTTATGTTCATGTTTTTCTATTTCTTTCCACAATCAAACGGTCAAACTCCAGCTTCTTTTATTAACAATTTGTTGCCAGAAGTTTTTAGAGTTCATAATTCTAATGTTATTTGA(SEQ ID NO：10)。

[0067]

ATGTCACAACCACCATTATTGGACCACGCTACACAAACTATGGCAAACGGTTCTAAATCTTTCGCTACTGCTGCTAAATTATTCGACCCAGCAACAAGAAGATCTGTATTGATGTTGTACACCTGGTGTAGACATTGCGATGACGTTATAGATGACCAAACTCACGGTTTTGCTTCAGAAGCTGCAGCCGAAGAAGAAGCTACACAAAGATTGGCAAGATTAAGAACTTTGACATTAGCTGCATTCGAAGGTGCCGAAATGCAAGATCCAGCTTTTGCCGCTTTCCAAGAAGTTGCATTAACCCATGGTATTACTCCTAGAATGGCTTTGGATCACTTAGACGGTTTTGCAATGGATGTCGCCCAAACAAGATACGTAACCTTCG

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AAGACACTTTAAGATATTGTTACCATGTCGCCGGTGTTGTCGGTTTGATGATGGCTAGAGTAATGGGTGTTAGAGATGAAAGAGTTTTAGATAGAGCATGTGACTTGGGTTTAGCCTTCCAATTGACAAACATAGCTAGAGATATAATAGATGACGCAGCCATAGACAGATGCTATTTGCCAGCTGAATGGTTACAAGATGCAGGTTTGACTCCTGAAAATTACGCTGCAAGAGAAAACAGAGCCGCTTTAGCCAGAGTTGCTGAAAGATTGATAGATGCAGCCGAACCATATTACATCTCTTCACAAGCTGGTTTGCATGATTTGCCACCTAGATGCGCATGGGCCATTGCTACCGCAAGATCTGTTTACAGAGAAATCGGTATTAAAGTCAAGGCTGCAGGTGGTTCCGCATGGGATAGAAGACAACACACTTCTAAAGGTGAAAAGATCGCTATGTTGATGGCCGCTCCTGGTCAAGTTATTAGAGCAAAGACCACCAGAGTCACCCCAAGACCAGCCGGTTTATGGCAAAGACCTGTTTAA(SEQ ID NO：11)。

[0068]

ATGTTGACATCTTCAAAATCTATTGAGTCTTTTCCAAAAAATGTTCAACCATATGGTAAGCACTACCAGAATGGTTTGGAGCCAGTCGGTAAGTCTCAAGAAGACATTTTATTGGAACCATTCCATTACTTATGTTCAAACCCAGGTAAAGATGTCAGAACTAAAATGATTGAAGCTTTCAACGCTTGGTTGAAGGTCCCTAAGGACGATTTAATTGTTATTACTAGAGTTATTGAAATGTTACATTCTGCTTCTTTGTTAATTGACGATGTTGAAGATGATTCTGTTTTGAGAAGGGGTGTCCCAGCTGCACATCACATTTATGGTACACCACAAACTATTAATTGTGCAAACTACGTTTACTTTTTGGCTTTGAAAGAAATTGCTAAGTTAAATAAACCAAATATGATTACTATTTACACTGATGAATTGATAAATTTGCATAGAGGTCAAGGTATGGAATTGTTCTGGAGGGATACATTGACATGTCCAACAGAAAAAGAATTTTTGGATATGGTTAATGATAAGACTGGAGGTTTGTTGAGATTAGCTGTTAAATTAATGCAAGAAGCATCTCAATCAGGTACTGATTATACTGGTTTAGTTTCAAAAATTGGTATACACTTTCAAGTTAGAGATGATTATATGAATTTGCAGTCTAAAAATTATGCTGATAATAAAGGTTTTTGTGAGGATTTAACAGAAGGTAAATTCTCTTTCCCAATTATACATTCTATTAGATCTGATCCATCTAATAGACAATTGTTGAACATTTTGAAACAAAGATCTTCTTCTATTGAATTGAAACAATTTGCTTTGCAATTATTGGAAAATACTAATACTTTCCAATATTGTAGAGATTTTTTGAGAGTTTTGGAAAAAGAAGCTAGAGAAGAAATTAAATTGTTGGGTGGTAACATTATGTTGGAAAAGATTATGGATGTTTTGTCTGTTAATGAATAA(SEQ ID NO：12)。[0069]更进一步，发明人通过实验验证，结果如图5所示，在摇瓶条件下，J1011-5，6，7和J1011-33～36具有比J1011-3更高产番茄红素的性能。[0070]实施例4 沉默基因的工程菌株的构建[0071]在本实施例中，发明人详细介绍了在上述工程菌的基础上敲除另外一些基因获得沉默基因工程菌株的实验过程。[0072]在酿酒酵母中，有很多潜在的基因在敲除后对细胞积累番茄红素化合物有明显的影响，因此构建一系列背景菌株用于增加番茄红素产量。构建方法为在需要灭活的基因中以潮霉素抗性基因为标记构建相应的敲除盒片段，敲除盒片段见图4。将该片段通过醋酸锂法酵母转化分别整合到上述工程菌中，最后用含有潮霉素抗性的平板进行筛选得到疑似带有抗性的菌株，用PCR进行验证，得到的工程菌株见表2。其中，敲除盒片段中的灭活基因序列可从NCBI上下载，从而可以设计得到图6的敲除框。[0073]表2：沉默工程菌株特性

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[0074]

[0075]

更进一步，发明人通过实验验证，J1011-9,10,11,13,15,19都具有比J1011-3更高

产番茄红素的性能。[0077]实施例5 过表达基因的工程菌株的构建[0078]在本实施例中，发明人详细介绍了在上述工程菌株上过表达相关的实验过程。[0079]选择合适的启动子和终止子构建表3中相关基因的表达框，在实施例4的基础上选择合适的基因作为插入位点，通过设计上、下游引物PCR扩增各片段，使其相互之间有60-80bp的重叠片段，再通过同源重组的方式将所有片段重组在一起，通过酶切线性化得到即可实现沉默基因又能过表达基因的基因片段。利用酵母自身的同源重组机制将该片段通过醋酸锂法酵母转化分别整合到上述工程菌株基因组上，转化后采用筛选平板进行筛选，得到的转化子通过分纯培养后提取酵母基因组进行PCR验证，成功验证的菌株详见表3。[0080]更进一步，发明人通过实验验证，J1011-4和J1011-20～32都具有高产番茄红素的性能。

[0081]表3：过表达基因的工程菌株

[0076]

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[0083]

其中，INO2基因具有如SEQ ID NO：13所示的核苷酸序列，gapN基因具有如SEQ ID

NO：14所示的核苷酸序列，PYC2基因具有如SEQ ID NO：15所示的核苷酸序列，SMAE1基因具有如SEQ ID NO：16所示的核苷酸序列，MDH2基因具有如SEQ ID NO：17所示的核苷酸序列，POS5基因具有如SEQ ID NO：18所示的核苷酸序列，pntA基因具有如SEQ ID NO：19所示的核苷酸序列，pntB基因具有如SEQ ID NO：20所示的核苷酸序列，ADH2基因具有如SEQ ID NO：21所示的核苷酸序列，ACS6基因具有如SEQ ID NO：22所示的核苷酸序列，ALD6基因具有如SEQ ID NO：23所示的核苷酸序列，EUTE基因具有如SEQ ID NO：24所示的核苷酸序列，ERG12基因具有如SEQ ID NO：25所示的核苷酸序列，IDI1基因具有如SEQ ID NO：26所示的核苷酸序列，ERG10基因具有如SEQ ID NO：27所示的核苷酸序列，MVD1基因具有如SEQ ID NO：28所示的核苷酸序列，ERG13基因具有如SEQ ID NO：29所示的核苷酸序列，tHMG1基因具有如SEQ ID NO：30所示的核苷酸序列，ERG8基因具有如SEQ ID NO：31所示的核苷酸序列，yap1基因具有如SEQ ID NO：32所示的核苷酸序列。spt15-5基因具有如SEQ ID NO：51所示的核苷酸序列。taf25-3基因具有如SEQ ID NO：52所示的核苷酸序列。ATGTCCCAAGCAACTGGGAACGAATTACTGGGTATCCTAGATCTGGATAACGATATAGACTTTGAAACTGCTTACCAAATGCTCAGCAGTAACTTCGACGACCAAATGTCTGCGCACATACATGAAAACACGTTTAGTGCAACTTCCCCTCCTCTGTTAACACACGAGCTCGGCATAATTCCTAACGTGGCAACCGTGCAACCCTCTCACGTAGAAACTATACCTGCCGATAACCAAACTCATCATGCTCCTTTGCATACTCATGCTCACTATCTAAATCACAACCCTCATCAACCAAGCATGGGTTTTGATCAAACGCTTGGTCTCAAGTTGTCTCCTTCCAGTTCGGGGTTGTTGAGCACGAATGAATCGAATGCCATTGAAC

[0084]

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AGTTTTTAGACAATCTAATATCACAGGATATGATGTCTTCCAACGCTTCCATGAACTCCGATTCACATCTACATATAAGATCACCAAAAAAGCAGCATAGGTATACCGAATTAAATCAAAGATATCCTGAAACACATCCACACAGTAACACAGGGGAGTTACCCACAAACACAGCAGATGTGCCAACTGAGTTCACCACGAGGGAAGGACCTCATCAGCCTATCGGCAATGACCACTACAACCCGCCACCGTTTTCAGTACCTGAGATACGAATCCCAGACTCTGATATTCCAGCCAATATCGAGGACGACCCTGTGAAGGTACGGAAATGGAAACACGTTCAAATGGAGAAGATACGAAGAATAAACACCAAAGAAGCCTTTGAAAGGCTCATTAAATCAGTAAGGACCCCACCAAAGGAAAACGGGAAAAGAATTCCCAAGCATATTCTTTTAACTTGTGTAATGAACGATATCAAGTCCATTAGAAGCGCAAATGAAGCACTACAGCACATACTGGATGATTCCTGA(SEQ ID NO：13)。

[0085]

ATGACTAAGCAATACAAGAACTACGTTAACGGTGAATGGAAGTTGTCTGAAAACGAAATTAAAATCTATGAACCTGCTTCAGGTGCAGAATTAGGTTCCGTTCCAGCTATGAGTACAGAAGAAGTAGATTACGTTTACGCTTCTGCTAAGAAAGCCCAACCTGCTTGGAGAGCATTGTCATATATCGAAAGAGCTGCATACTTACATAAGGTTGCTGATATATTGATGAGAGACAAGGAAAAGATTGGTGCAATCTTATCTAAAGAAGTAGCCAAGGGTTATAAATCCGCTGTTAGTGAAGTTGTCAGAACCGCTGAAATTATAAACTACGCCGCTGAAGAAGGTTTAAGAATGGAAGGTGAAGTTTTGGAAGGTGGTTCTTTCGAAGCAGCCTCTAAAAAGAAAATTGCAGTAGTTAGAAGAGAACCTGTCGGTTTAGTATTGGCCATTTCCCCTTTCAATTATCCAGTAAACTTAGCTGGTAGTAAGATCGCCCCAGCTTTGATTGCTGGTAATGTTATAGCCTTTAAACCACCTACACAAGGTTCTATTTCAGGTTTGTTATTGGCAGAAGCCTTCGCTGAAGCAGGTTTGCCTGCTGGTGTTTTTAACACAATTACCGGTAGAGGTTCCGAAATCGGTGACTACATTGTCGAACACCAAGCTGTAAACTTCATCAACTTCACTGGTTCTACAGGTATAGGTGAAAGAATCGGTAAAATGGCTGGTATGAGACCAATTATGTTAGAATTGGGTGGTAAAGATTCTGCAATAGTTTTAGAAGATGCCGACTTAGAATTGACCGCTAAGAATATCATTGCCGGTGCTTTTGGTTATTCCGGTCAAAGATGTACTGCAGTCAAAAGAGTTTTAGTCATGGAAAGTGTTGCCGATGAATTGGTCGAAAAGATAAGAGAAAAGGTTTTGGCATTGACTATCGGTAATCCTGAAGATGACGCCGACATCACTCCATTGATCGATACAAAGTCAGCTGACTACGTTGAAGGTTTGATTAATGATGCAAACGACAAGGGTGCAACCGCCTTGACTGAAATTAAAAGAGAGGGTAACTTAATCTGCCCAATCTTGTTCGATAAGGTTACTACAGACATGAGATTAGCTTGGGAAGAACCATTTGGTCCTGTCTTGCCAATAATCAGAGTTACATCTGTCGAAGAAGCTATCGAAATATCTAATAAGTCAGAATATGGTTTGCAAGCATCAATCTTTACAAACGATTTCCCTAGAGCCTTTGGTATTGCTGAACAATTGGAAGTAGGTACCGTTCATATCAACAACAAGACACAAAGAGGTACCGATAATTTTCCATTCTTGGGTGCTAAGAAATCTGGTGCAGGTATCCAAGGTGTCAAATACTCCATTGAAGCTATGACCACTGTAAAGAGTGTCGTATTTGATATTAAATAA(SEQ ID NO：14)。

[0086]

ATGTATCCAAGGGTCTATGAAGATTTCCAAAAGATCAGAGAAACATACGGTGATTTATCAGTTCTACCAACCAAAAATTTCCTAGCACCAGCAGAACCTGATGAAGAAATCGAAGTCACCATCGAACAAGGTAAGACTTTGATTATCAAATTGCAAGCTGTTGGTGACTTAAATAAGAAAACTGGGCAAAGAGAAGTGTATTTTGAATTGAACGGTGAATTAAGAAAGATCAGAGTTGCAGACAAGTCACAAAACATACAATCTGTTGCTAAACCAAAGGCTGATGTCCACGATACTCACCAAATCGGTGCACCAATGGCTGGTGTTATCATAGAAGTTAAAGTACATAAAGGGTCTTTGGTGAAAAAGGGCGAATCGATTGCTGTTTTGAGTGCCATGAAAATGGAAATGGTTGTCTCTTCACCAGCAGATGGTCAAGTTAAAGATGTTTTCATTAGGGATGGTGAAAGTGTTGACGCATCAGATTTGTTGGTTGTCCTAGAAGAAGAAACCCTACCCCCATCCCAAAAAAAGTAA(SEQ ID NO：15)。

[0087]

ATGTGGCCTATTCAGCAATCGCGTTTATATTCTTCTAACACTAGATCGCATAAAGCTACCACAACAAGAGAAAATAC

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TTTCCAAAAGCCATACAGCGACGAGGAGGTCACTAAAACACCCGTCGGTTCTCGCGCCAGAAAGATCTTCGAAGCTCCTCACCCACATGCCACTCGTTTGACTGTAGAAGGTGCCATAGAATGTCCCTTGGAGAGCTTTCAACTTTTAAACTCTCCTTTATTTAACAAGGGTTCTGCATTTACACAAGAAGAAAGGGAAGCGTTTAATTTAGAAGCATTGCTACCACCACAAGTGAACACTTTGGACGAACAACTGGAAAGAAGCTACAAGCAGTTATGCTATTTGAAGACGCCCTTGGCCAAAAACGACTTCATGACGTCTTTGAGAGTACAGAACAAAGTCCTATATTTTGCATTAATAAGGAAACATATCAAGGAATTAGTTCCTATCATTTACACCCCAACCGAAGGTGATGCTATTGCTGCCTATTCCCACAGGTTCAGAAAGCCAGAAGGTGTGTTTTTAGACATTACCGAACCTGATTCCATCGAACGTAGATTGGCTACATACGGTGGAGACAAAGATGTAGACTACATCGTTGTGTCGGATTCGGAAGGTATTCTGGGAATTGGTGACCAAGGTATCGGTGGTGTACGTATTGCTATCTCCAAATTGGCATTGATGACGCTGTGCGGTGGTATTCATCCCGGCCGTGTGCTACCTGTGTGTTTGGACGTCGGTACTAACAACAAGAAACTAGCCCGTGACGAATTGTACATGGGTAACAAGTTCTCCAGAATCAGGGGTAAGCAATATGACGACTTCTTGGAAAAATTCATCAAGGCCGTTAAGAAAGTGTATCCAAGCGCCGTTCTGCATTTCGAAGATTTCGGTGTTAAGAACGCTAGAAGATTGCTAGAAAAGTACAGGTACGAATTGCCATCATTCAACGATGACATTCAGGGCACCGGTGCCGTCGTGATGGCCTCGTTGATTGCTGCTTTGAAACATACCAACAGAGACTTGAAAGACACCAGAGTGCTTATTTACGGTGCCGGGTCTGCGGGCCTCGGTATCGCAGACCAAATTGTGAATCATATGGTCACGCACGGCGTTGACAAGGAAGAAGCGCGCAAGAAAATCTTCTTGATGGACAGACGTGGGTTAATTCTACAATCTTACGAGGCTAACTCCACTCCCGCCCAACACGTATACGCTAAGAGTGATGCGGAATGGGCTGGTATCAACACCCGCTCTTTACATGATGTGGTGGAGAACGTCAAACCAACGTGTTTGGTTGGCTGCTCCACACAAGCAGGCGCATTCACTCAAGATGTCGTAGAAGAAATGCACAAGCACAATCCTAGACCGATCATTTTCCCATTATCCAACCCTACTAGACTACACGAAGCCGTTCCTGCCGATTTAATGAAGTGGACCAACAACAACGCTCTTGTAGCTACCGGATCTCCTTTCCCACCTGTTGACGGTTACCGTATCTCGGAGAACAACAATTGTTACTCTTTCCCAGGTATCGGTTTAGGTGCCGTACTATCGCGTGCCACCACTATCACAGACAAGATGATCTCCGCTGCAGTGGACCAACTAGCCGAATTGTCGCCACTAAGAGAGGGCGACTCGAGACCTGGGTTGCTACCCGGCCTGGACACCATCACCAACACCTCTGCGCGTCTAGCTACCGCTGTGATCTTGCAAGCACTCGAGGAGGGAACCGCCCGTATCGAGCAAGAACAAGTACCGGGAGGAGCTCCCGGCGAAACTGTCAAGGTTCCTCGTGACTTTGACGAATGTTTACAGTGGGTCAAAGCCCAAATGTGGGAGCCTGTGTACAGACCTATGATCAAGGTCCAACATGACCCATCGGTGCACACCAACCAATTGTAG(SEQ ID NO：16)。

[0088]

ATGCCTCACTCAGTTACACCATCCATAGAACAAGATTCGTTAAAAATTGCCATTTTAGGTGCTGCCGGTGGTATCGGGCAGTCGTTATCGCTGCTTTTGAAAGCTCAGTTGCAATACCAGTTAAAGGAGAGCAACCGGAGCGTTACCCACATTCATCTGGCTCTTTACGATGTCAACCAAGAAGCCATCAACGGTGTTACCGCCGACTTGTCTCATATAGACACCCCCATTTCCGTGTCGAGCCACTCTCCTGCAGGTGGCATTGAGAACTGTTTGCATAACGCTTCTATTGTTGTCATTCCTGCAGGTGTTCCAAGAAAACCTGGCATGACTCGTGATGACTTATTTAACGTGAATGCTGGTATCATTAGCCAGCTCGGTGATTCTATTGCAGAATGTTGTGATCTTTCCAAGGTCTTCGTTCTTGTCATTTCCAACCCTGTTAATTCTTTAGTCCCAGTGATGGTTTCTAACATTCTTAAGAACCATCCTCAGTCTAGAAATTCCGGCATTGAAAGAAGGATCATGGGTGTCACCAAGCTCGACATTGTCAGAGCGTCCACTTTTCTACGTGAGATAAACATTGAGTCAGGGCTAACTCCTCGTGTTAACTCCATGCCTGACGTCCCTGTAATTGGCGGGCATTCTGGCGAGACTATTATTCCGTTGTTTTCACAGTCAAACTTCCTATCGAGATTAAATGAGGATCAATTGAAATATTTAATACATAGAGTCCAATACGGTGGTGATGAAGTGGTCAAGGCCAAGAACGGTAAAGGTAGTGCTACCTTATCGATGGCCCATGCCGGTTATAAGTGTGTTGTCCAATTTGTTTCTTTGTTATTGGGTAACATTGAGCAGATCCATGGAACCTACTATGTGCCATTAAAAGATGCGAACAACTTCCCCATTGCTCCTGGGGCAGATCAATTATTGCCTCTGGTGGACGGTGCAGACTACTTTGCCATACCATTAACTATTACTACAAAGGGTGTTTCCTA

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TGTGGATTATGACATCGTTAATAGGATGAACGACATGGAACGCAACCAAATGTTGCCAATTTGCGTCTCCCAGTTAAAGAAAAATATCGATAAGGGCTTGGAATTCGTTGCATCGAGATCTGCATCATCTTAA(SEQ ID NO：17)。

[00]

ATGTTTGTCAGGGTTAAATTGAATAAACCAGTAAAATGGTATAGGTTCTATAGTACGTTGGATTCACATTCCCTAAAGTTACAGAGCGGCTCGAAGTTTGTAAAAATAAAGCCAGTAAATAACTTGAGGAGTAGTTCATCAGCAGATTTCGTGTCCCCACCAAATTCCAAATTACAATCTTTAATCTGGCAGAACCCTTTACAAAATGTTTATATAACTAAAAAACCATGGACTCCATCCACAAGAGAAGCGATGGTTGAATTCATAACTCATTTACATGAGTCATACCCCGAGGTGAACGTCATTGTTCAACCCGATGTGGCAGAAGAAATTTCCCAGGATTTCAAATCTCCTTTGGAGAATGATCCCAACCGACCTCATATACTTTATACTGGTCCTGAACAAGATATCGTAAACAGAACAGACTTATTGGTGACATTGGGAGGTGATGGGACTATTTTACACGGCGTATCAATGTTCGGAAATACGCAAGTTCCTCCGGTTTTAGCATTTGCTCTGGGCACTCTGGGCTTTCTATTACCGTTTGATTTTAAGGAGCATAAAAAGGTCTTTCAGGAAGTAATCAGCTCTAGAGCCAAATGTTTGCATAGAACACGGCTAGAATGTCATTTGAAAAAAAAGGATAGCAACTCATCTATTGTGACCCATGCTATGAATGACATATTCTTACATAGGGGTAATTCCCCTCATCTCACTAACCTGGACATTTTCATTGATGGGGAATTTTTGACAAGAACGACAGCAGATGGTGTTGCATTGGCCACTCCAACGGGTTCCACAGCATATTCATTATCAGCAGGTGGATCTATTGTTTCCCCATTAGTCCCTGCTATTTTAATGACACCAATTTGTCCTCGCTCTTTGTCATTCCGACCACTGATTTTGCCTCATTCATCCCACATTAGGATAAAGATAGGTTCCAAATTGAACCAAAAACCAGTCAACAGTGTGGTAAAACTTTCTGTTGATGGTATTCCTCAACAGGATTTAGATGTTGGTGATGAAATTTATGTTATAAATGAGGTCGGCACTATATACATAGATGGTACTCAGCTTCCGACGACAAGAAAAACTGAAAATGACTTTAATAATTCAAAAAAGCCTAAAAGGTCAGGGATTTATTGTGTCGCCAAGACCGAGAATGACTGGATTAGAGGAATCAATGAACTTTTAGGATTCAATTCTAGCTTTAGGCTGACCAAGAGACAGACTGATAATGATTAA(SEQ ID NO：18)。

[0090]

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ATTATTGTTGTCGGAGCACTGTTGCAGATTGGCCAGGGCGGCTGGGTTAGCTTCCTTAGTTTTATCGCGGTGCTTATAGCCAGCATTAATATTTTCGGTGGCTTCACCGTGACTCAGCGCATGCTGAAAATGTTCCGCAAAAATTAA(SEQ ID NO：19)

[0091]

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[0092]

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说　明　书

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ATGTCTCAGACTCACAAGCATGCTATTCCTGCTAACATAGCTGACAGATGCTTAATAAATCCAGAACAGTATGAAACTAAATACAAGCAATCTATAAACGATCCTGACACTTTCTGGGGAGAGCAGGGTAAGATATTGGACTGGATTACACCATACCAAAAGGTCAAGAACACTTCATTTGCTCCTGGTAATGTTTCTATTAAATGGTACGAGGACGGTACATTAAACTTAGCAGCAAACTGCTTGGACAGGCACTTGCAAGAGAACGGAGACAGAACTGCAATAATTTGGGAGGGTGACGACGCATCTCAATCTAAGCACATATCATACAGAGAGTTACACAGAGACGTTTGCAGATTCGCTAACACATTGTTGGATTTGGGAATAAAGAAAGGTGACGTTGTTGCAATTTATATGCCTATGGTTCCTGAGGCTGCTGTCGCTATGTTGGCTTGCGCAAGGATAGGAGCTGTCCATTCTGTCATTTTTGGTGGTTTTTCACCTGAGGCAATAGCAGGTAGGATAATTGATTCATCTTCAAGGTTGGTCATAACTGCAGATGAGGGAGTCAGGGCAGGAAGATCTATTCCATTGAAGAAGAACGTTGACGATGCATTGAAGAACCCAAACGTTACTTCTGTCGAGCACGTCATTGTCTTAAAAAGAACTGGAAACGACATAGACTGGCAAGAGGGTAGGGACTTATGGTGGAGGGACTTGATTGAGAAGGCTTCACCTGAACACCAGCCAGAGGCAATGAATGCAGAAGACCCATTGTTTATTTTATATACATCTGGATCTACAGGAAAGCCAAAGGGAGTCTTGCATACTACAGGTGGTTACTTGGTCTATGCAGCAACAACTTTTAAGTATGTCTTCGACTACCACCCTGGTGACATTTACTGGTGCACAGCTGACGTTGGATGGGTCACAGGTCACTCTTACTTGTTGTACGGACCTTTGGCATGCGGTGCTACTACATTGATGTTCGAGGGAGTCCCTAACTGGCCTACACCTGCTAGGATGTGCCAGGTTGTCGACAAGCACCAGGTCAACATACTGTACACAGCACCAACAGCTATTAGGGCATTGATGGCAGAGGGTGACAAGGCAATTGAGGGAACAGACAGGTCTTCTTTGAGAATATTGGGATCTGTCGGTGAGCCAATAAACCCAGAGGCATGGGAGTGGTACTGGAAGAAGATAGGAAAGGAGAAATGTCCAGTCGTCGACACATGGTGGCAGACAGAGACAGGTGGATTTATGATAACTCCTTTGCCAGGAGCTATAGAGTTGAAGGCTGGTTCAGCAACAAGGCCATTCTTCGGAGTCCAGCCTGCATTGGTCGACAACGAGGGTCATCCACAGGAAGGTGCTACAGAGGGTAACTTAGTCATTACTGACTCTTGGCCTGGTCAGGCTAGGACATTGTTCGGTGACCATGAGAGGTTCGAGCAGACTTACTTTTCTACATTTAAAAATATGTACTTTTCTGGAGACGGTGCTAGAAGGGATGAAGATGGTTACTATTGGATAACTGGTAGGGTCGATGATGTCTTAAACGTCTCAGGACACAGGTTGGGAACTGCTGAAATTGAATCAGCATTGGTCGCTCACCCTAAGATAGCTGAGGCAGCTGTCGTCGGAATTCCTCACGCAATTAAGGGACAGGCAATTTACGCATACGTCACTTTGAACCACGGTGAAGAGCCATCACCAGAGTTGTACGCAGAGGTTAGGAACTGGGTCAGGAAGGAGATTGGACCTTTGGCAACTCCAGACGTCTTGCACTGGACAGACTCATTGCCTAAGACAAGGTCTGGAAAAATAATGAGGAGAATATTGAGGAAAATTGCTGCTGGAGATACTTCAAACTTGGGTGACACTTCTACATTGGCTGACCCAGGTGTTGTCGAGAAACCATTGGAGGAAAAACAGGCAATAGCTATGCCATCTTAA(SEQID NO：22)。

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ACGATGCTAACATTAAGAAGACTTTACCAAATCTAGTAAACGGTATTTTCAAGAACGCTGGTCAAATTTGTTCCTCTGGTTCTAGAATTTACGTTCAAGAAGGTATTTACGACGAACTATTGGCTGCTTTCAAGGCTTACTTGGAAACCGAAATCAAAGTTGGTAATCCATTTGACAAGGCTAACTTCCAAGGTGCTATCACTAACCGTCAACAATTCGACACAATTATGAACTACATCGATATCGGTAAGAAAGAAGGCGCCAAGATCTTAACTGGTGGCGAAAAAGTTGGTGACAAGGGTTACTTCATCAGACCAACCGTTTTCTACGATGTTAATGAAGACATGAGAATTGTTAAGGAAGAAATTTTTGGACCAGTTGTCACTGTCGCAAAGTTCAAGACTTTAGAAGAAGGTGTCGAAATGGCTAACAGCTCTGAATTCGGTCTAGGTTCTGGTATCGAAACAGAATCTTTGAGCACAGGTTTGAAGGTGGCCAAGATGTTGAAGGCCGGTACCGTCTGGATCAACACATACAACGATTTTGACTCCAGAGTTCCATTCGGTGGTGTTAAGCAATCTGGTTACGGTAGAGAAATGGGTGAAGAAGTCTACCATGCATACACTGAAGTAAAAGCTGTCAGAATTAAGTTGTAA(SEQID NO：23)。

[0095]

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GATGATTTCCCAGCCATTCCAATGATCCTAACCTATACTAGAATTCCAAGGTCTACAAAAGATCTTGTTGCTCGCGTTCGTGTGTTGGTCACCGAGAAATTTCCTGAAGTTATGAAGCCAATTCTAGATGCCATGGGTGAATGTGCCCTACAAGGCTTAGAGATCATGACAAAGTTAAGTAAATGTAAAGGCACCGATGACGAGGCCGTAGAAACTAATAATGAACTGTATGAACAACTATTGGAATTGATAAGAATAAATCATGGACTGCTTGTCTCAATCGGTGTTTCTCATCCTGGATTAGAACTTATTAAAAATCTGAGCGATGATTTGAGAATTGGCTCCACAAAACTTACCGGTGCTGGTGGCGGCGGTTGCTCTTTGACTTTGTTACGAAGAGACATTACTCAAGAGCAAATTGACAGTTTCAAAAAGAAATTGCAAGATGATTTTAGTTACGAGACATTTGAAACAGACTTGGGTGGGACTGGCTGCTGTTTGTTAAGCGCAAAAAATTTGAATAAAGATCCTAAAATCAAATCCCTAGTATTCCAATTATTTGAAAATAAAACTACCACAAAGCAACAAATTGACGATCTATTATTGCCAGGAAACACGAATTTACCATGGACTTCATAA(SEQ ID NO：25)。

[0097]

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[0098]

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ATGGTTTTAACCAATAAAACAGTCATTTCTGGATCGAAAGTCAAAAGTTTATCATCTGCGCAATCGAGCTCATCAGGACCTTCATCATCTAGTGAGGAAGATGATTCCCGCGATATTGAAAGCTTGGATAAGAAAATACGTCCTTTAGAAGAATTAGAAGCATTATTAAGTAGTGGAAATACAAAACAATTGAAGAACAAAGAGGTCGCTGCCTTGGTTATTCACGGTAAGTTACCTTTGTACGCTTTGGAGAAAAAATTAGGTGATACTACGAGAGCGGTTGCGGTACGTAGGAAGGCTCTTTCAATTTTGGCAGAAGCTCCTGTATTAGCATCTGATCGTTTACCATATAAAAATTATGACTACGACCGCGTATTTGGCGCTTGTTGTGAAAATGTTATAGGTTACATGCCTTTGCCCGTTGGTGTTATAGGCCCCTTGGTTATCGATGGTACATCTTATCATATACCAATGGCAACTACAGAGGGTTGTTTGGTAGCTTCTGCCATGCGTGGCTGTAAGGCAATCAATGCTGGCGGTGGTGCAACAACTGTTTTAACTAAGGATGGTATGACAAGAGGCCCAGTAGTCCGTTTCCCAACTTTGAAAAGATCTGGTGCCTGTAAGATATGGTTAGACTCAGAAGAGGGACAAAACGCAATTAAAAAAGCTTTTAACTCTACATCAAGATTTGCACGTCTGCAACATATTCAAACTTGTCTAGCAGGAGATTTACTCTTCATGAGATTTAGAACAACTACTGGTGACGCAATGGGTATGAATATGATTTCTAAAGGTGTCGAATACTCATTAAAGCAAATGGTAGAAGAGTATGGCTGGGAAGATATGGAGGTTGTCTCCGTTTCTGGTAACTACTGTACCGACAAAAAACCAGCTGCCATCAACTGGATCGAAGGTCGTGGTAAGAGTGTCGTCGCAGAAGCTACTATTCCTGGTGATGTTGTCAGAAAAGTGTTAAAAAGTGATGTTTCCGCATTGGTTGAGTTGAACATTGCTAAGAATTTGGTTGGATCTGCAATGGCTGGGTCTGTTGGTGGATTTAACGCACATGCAGCTAATTTAGTGACAGCTGTTTTCTTGGCATTAGGACAAGATCCTGCACAAAATGTTGAAAGTTCCAACTGTATAACATTGATGAAAGAAGTGGACGGTGATTTGAGAATTTCCGTATCCATGCCATCCATCGAAGTAGGTACCATCGGTGGTGGTACTGTTCTAGAACCACAAGGTGCCATGTTGGACTTATTAGGTGTAAGAGGCCCGCATGCTACCGCTCCTGGTACCAACGCACGTCAATTAGCAAGAATAGTTGCCTGTGCCGTCTTGGCAGGTGAATTATCCTTATGTGCTGCCCTAGCAGCCGGCCATTTGGTTCAAAGTCATATGACCCACAACAGGAAACCTGCTGAACCAACAAAACCTAACAATTTGGACGCCACTGATATAAATCGTTTGAAAGATGGGTCCGTCACCTGCATTAAATCCTAA(SEQ ID NO：30)

[0102]

ATGTCAGAGTTGAGAGCCTTCAGTGCCCCAGGGAAAGCGTTACTAGCTGGTGGATATTTAGTTTTAGATACAAAATATGAAGCATTTGTAGTCGGATTATCGGCAAGAATGCATGCTGTAGCCCATCCTTACGGTTCATTGCAAGGGTCTGATAAGTTTGAAGTGCGTGTGAAAAGTAAACAATTTAAAGATGGGGAGTGGCTGTACCATATAAGTCCTAAAAGTGGCTTCATTCCTGTTTCGATAGGCGGATCTAAGAACCCTTTCATTGAAAAAGTTATCGCTAACGTATTTAGCTACTTTAAACCTAACATGGACGACTACTGCAATAGAAACTTGTTCGTTATTGATATTTTCTCTGATGATGCCTACCATTCTCAGGAGGATAGCGTTACCGAACATCGTGGCAACAGAAGATTGAGTTTTCATTCGCACAGAATTGAAGAAGTTCCCAAAACAGGGCTGGGCTCCTCGGCAGGTTTAGTCACAGTTTTAACTACAGCTTTGGCCTCCTTTTTTGTATCGGACCTGGAAAATAATGTAGACAAATATAGAGAAGTTATTCATAATTTAGCACAAGTTGCTCATTGTCAAGCTCAGGGTAAAATTGGAAGCGGGTTTGATGTAGCGGCGGCAGCATATGGATCTATCAGATATAGAAGATTCCCACCCGCATTAATCTCTAATTTGCCAGATATTGGAAGTGCTACTTACGGCAGTAAACTGGCGCATTTGGTTGATGAAGAAGACTGGAATATTACGATTAAAAGTAACCATTTACCTTCGGGATTAACTTTATGGATGGGCGATATTAAGAATGGTTCAGAAACAGTAAAACTGGTCCAGAAGGTAAAAAATTGGTATGATTCGCATATGCCAGAAAGCTTGAAAATATATACAGAACTCGATCATGCAAATTCTAGATTTATGGATGGACTATCTAAACTAGATCGCTTACACGAGACTCATGACGATTACAGCGATCAGATATTTGAGTCTCTTGAGAGGAATGACTGTACCTGTCAAAAGTATCCTGAAATCACAGAAGTTAGAGATGCAGTTGCCACAATTAGACGTTCCTTTAGAAAAATAACTAAAGAATCTGGTGCCGATATCGAACCTCCCGTACAAACTAGCTTATTGGATGATTGCCAGACCTTAAAAGGAGTTCTTACTTGCTTAATACCTGGTGCTGGTGGTTATGACGCCATTGCAGTGATTACTAAGCAAGATGTTGATCTTAGGGCTCAAACCGCTAATGACAAAAGATTTTCTAAGGTTCAATGGCTGGATGTAACTCAGGCTGACT

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GGGGTGTTAGGAAAGAAAAAGATCCGGAAACTTATCTTGATAAATAG(SEQ ID NO：31)。

[0103]

ATGAGTGTGTCTACCGCCAAGAGGTCGCTGGATGTCGTTTCTCCGGGTTCATTAGCGGAGTTTGAGGGTTCAAAATCTCGTCACGATGAAATAGAAAATGAACATAGACGTACTGGTACACGTGATGGCGAGGATAGCGAGCAACCGAAGAAGAAGGGTAGCAAAACTAGCAAAAAGCAAGATTTGGATCCTGAAACTAAGCAGAAGAGGACTGCCCAAAATCGGGCCGCTCAAAGAGCTTTTAGGGAACGTAAGGAGAGGAAGATGAAGGAATTGGAGAAGAAGGTACAAAGTTTAGAGAGTATTCAGCAGCAAAATGAAGTGGAAGCTACTTTTTTGAGGGACCAGTTAATCACTCTGGTGAATGAGTTAAAAAAATATAGACCAGAGACAAGAAATGACTCAAAAGTGCTGGAATATTTAGCAAGGCGAGATCCTAATTTGCATTTTTCAAAAAATAACGTTAACCACAGCAATAGCGAGCCAATTGACACACCCAATGATGACATACAAGAAAATGTTAAACAAAAGATGAATTTCACGTTTCAATATCCGCTTGATAACGACAACGACAACGACAACAGTAAAAATGTGGGGAAACAATTACCTTCACCAAATGATCCAAGTCATTCGGCTCCTATGCCTATAAATCAGACACAAAAGAAATTAAGTGACGCTACAGATTCCTCCAGCGCTACTTTGGATTCCCTTTCAAATAGTAACGATGTTCTTAATAACACACCAAACTCCTCCACTTCGATGGATTGGTTAGATAATGTAATATATACTAACAGGTTTGTGTCAGGTGATGATGGCAGCAATAGTAAAACTAAGAATTTAGACAGTAATATGTTTTCTAATGACTTTAATTTTGAAAACCAATTTGATGAACAAGTTTCGGAGTTTTGTTCGAAAATGAACCAGGTATGTGGAACAAGGCAATGTCCCATTCCCAAGAAACCCATCTCGGCTCTTGATAAAGAAGTTTTCGCGTCATCTTCTATACTAAGTTCAAATTCTCCTGCTTTAACAAATACTTGGGAATCACATTCTAATATTACAGATAATACTCCTGCTAATGTCATTGCTACTGATGCTACTAAATATGAAAATTCCTTCTCCGGTTTTGGCCGACTTGGTTTCGATATGAGTGCCAATCATTACGTCGTGAATGATAATAGCACTGGTAGCACTGATAGCACTGGTAGCACTGGCAATAAGAACAAAAAGAACAATAATAATAGCGATGATGTACTCCCATTCATATCCGAGTCACCGTTTGATATGAACCAAGTTACTAATTTTTTTAGTCCGGGATCTACCGGCATCGGCAATAATGCTGCCTCTAACACCAATCCCAGCCTACTGCAAAGCAGCAAAGAGGATATACCTTTTATCAACGCAAATCTGGCTTTCCCAGACGACAATTCAACTAATATTCAATTACAACCTTTCTCTGAATCTCAATCTCAAAATAAGTTTGACTACGACATGTTTTTTAGAGATTCATCGAAGGAAGGTAACAATTTATTTGGAGAGTTTTTAGAGGATGACGATGATGACAAAAAAGCCGCTAATATGTCAGACGATGAGTCAAGTTTAATCAAGAACCAGTTAATTAACGAAGAACCAGAGCTTCCGAAACAATATCTACAATCGGTACCAGGAAATGAAAGCGAAATCTCACAAAAAAATGGCAGTAGTTTACAGAATGCTGACAAAATCAATAATGGCAATGATAACGATAATGATAATGATGTCGTTCCATCTAAGGAAGGCTCTTTACTAAGGTGTTCGGAAATTTGGGATAGAATAACAACACATCCGAAATACTCAGATATTGATGTCGATGGTTTATGTTCCGAGCTAATGGCAAAGGCAAAATGTTCAGAAAGAGGGGTTGTCATCAATGCAGAAGACGTTCAATTAGCTTTGAATAAGCATATGAACTAA(SEQ ID NO：32)。

[0104]

ATGGCCGATGAGGAACGTTTAAAGGAGTTTAAAGGGGCAAACAAGATAGTGTTTGATCCAAATACCAGACAAGTATGGGAAAACCAGAATCGAGATGGAACAAAACCAGCAACTACTTTCCAGAGTGAAGAGGTCATAAAAAGAGCTGCCCCAGAATCTGAAAAAGACACCTCCGCCACATCAAGTATTGTTCCAGAGCTATAGAACATTGTGGCAACTGTGACTTTGGGGAGCAGGTTAGATCTGAAAACAGTTGCGCTACATGCCCGTATGCAGAATATAACCCCTAGCGTTTTGCTGCTGTCATCATGCGTATAGAGAGCCAAAAACTACAGCTTTAATTTTTGCCTCAGGGAAAATGGTTGTTACCGGTGCAAAAAGTGAGGATGACTCAAAGCTGGCCAGAAGAATATATGCAGGAATTATCCAAAAAATCAGGTTTGCAGCTAAATTCACAGACTTCAAAATACAAAATATTGTCGGTTCGTGTGACGTTAATTTCCCTATACGTCTAGAAGGGTTAGCATTCAGTCATGGTACTTTCTCCTCCTATGAGCCAGAATTGTTTCCTGGTTTGATCTATAGAATGGTGAAGCCGAAAATTGTGTTGTTAATTTTTGTTTCAGGAAAGATTGTTCTTCTGGAGCAAAGCAAAGGGAGGAAATTTACCAAGCTTTTGAAGCTATATACCCAGTTCTAAGTGAATTTAGAAAAATGTGA(SEQ ID NO：51)

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ATGGATTTTGAGGAAGATTACGATGCGGAGTTTGATGATAATCAAGAAGGACAATTAGAAACACCTTTTCCATCGGTTGCGGGAGCCGATGATGGGGACAATGATAATGATGACTCTGTCGCAGAAAACATGAAGAAGAAGCAAAAGAGAGAGGCTGTAGTGGATGATGGGAGTGAAAATGCATTTGGTATACCCGAATTTACAAGAAAAGATAAGACTCTGGAGGAGATTTTAGAGATGATGGACAGTACTCCTCCTATCATTCCCGATGCAGTAATAGACTACTATTTAACCAAAAACGGGTTTAACGTAGCATATGTACAAGTGAAACGACTTTTAGCACTTGCTACTCAGAAATTTGTTAGTGATATAGCTAAGGATGCCTACGAATATTCCAGGATCAGGTCTTCCGTAGCGGTATCTAATGCTAACAACAGTCAGGCGAGAGCTAGGCAGCTATTGCAAGGACAGCGACAGACTGGCGTGCAGCAGATTTCACAACAACAACATCAACAGAATGAGAAGACTACAGCAAGCATAGTTGTTCTGACGGTGAACGATCCCAGTAGCGCTGTTGCTGAATACGGGCTCAATATAGGTCGCCCAGACTTTTATCGTTAG(SEQ ID NO：52)[0106]实施例8 新一代工程菌株的构建[0107]根据实施例1～7，将有效果的改造进行叠加组合，如将有效果的敲除基因Ypl062W,Yer130C,Yer134c,Exg1等两两组合进行敲除，结果显示双基因敲除会得到产量更高的菌株。

[0108]在此基础上，我们将有效果的改造进行叠加组合，形成新一代的工程菌株，菌株特性如下表4.

[0109]表4.新一代工程菌株的特征

[0110]

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注：“√”代表该基因被敲除，\"+\"代表该基因过表达一个拷贝，\"*\"代表该基因过表

达至少2个拷贝，“-”代表该基因不被操作(即不被敲除或不过表达)[0114]更进一步，发明人通过研究证明，新一代工程菌株J1011-37～84具有高产番茄红素的性能。

[0115]实施例9 新二代工程菌株的构建[0116]在上一代工程菌株的基础上，我们挑选了18个优势菌株，在此基础上构建了新二代的工程菌株探究gapN和EUTE基因对番茄红素产量的影响，菌株特性如下表5.[0117]表5.新二代工程菌株的特征

[0113][0118]

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[0120]

注：“√”代表该基因被过表达，“-”代表该基因不被过表达

[0121]更进一步，发明人通过研究证明，新一代工程菌株J1011-85～138具有高产番茄红素的性能。

[0122]实施例10 工程菌摇瓶培养发酵过程[0123]在本实施例中，发明人详细介绍了实施例1～9所获得的工程菌株的发酵培养过程。

[0124]摇瓶发酵采用两级种子培养，将平板上的重组菌株挑到含有5mL YPD培养基的PA瓶中，30度摇床摇起一级种子液，过夜培养(一般14-18h)后，菌体长到对数生长期(OD在5-8左右)，再以1％的接种量将菌株转移到含有50mL YPD培养基的250mL摇瓶中，摇瓶培养得到

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二级种子液。约14-18h后，测二级种子的OD600值，然后计算接种到含有200mL发酵培养基YPDG的500mL摇瓶中，使菌体终浓度OD600＝0.5，需要多少的二级种子液，然后取出算出的体积并离心，去掉上清，再用对应的发酵培养基将菌体悬浮并加入相应的500mL摇瓶中，置于30度摇床开始摇瓶发酵。每隔一段时间(约4h)取样测定细胞浓度，并在8h后将摇瓶上的报纸去掉，约48h后开始取样存于-80度冰箱留待测定番茄红素的产生情况。[0125]实施例11 产物萃取方式比较[0126]在本实施例中，发明人对发酵处理后所获得的产物进行萃取的方式进行了筛选，筛选过程如下所述。[0127]方法一：从冰箱中取出样品解冻，取500μL发酵液于15mL离心管(冰上预冷)中，5000g 4度离心2min来收集菌体，去上清后再用1mL纯水重悬洗涤菌体，再加入1mL 3N的HCl并沸水浴3min来破碎细胞，离心去掉HCl后用水洗涤一次。再向其中加入1mL的丙酮(HPLC级别)，0.2g玻璃珠，1％的抗氧化剂，震荡5min，然后5000g 4度离心2min，转移上清到50mL的离心管中；再次重复加入上述提取液，并震荡，然后收集萃取液，直至菌体无明显黄色；混匀收集到的丙酮萃取液，取出2mL，12000rpm离心10分钟，再取上清1.2mL至棕色的HPLC进样瓶中，进行HPLC分析。[0128]方法二：从冰箱中取出样品解冻，取500μL发酵液于15mL离心管(冰上预冷)中，5000g 4度离心2min来收集菌体，去上清后再用1mL纯水重悬并洗涤菌体。再向其中加入4mL的丙酮(HPLC级别)，0.2g玻璃珠，1％的抗氧化剂，震荡5min，然后冰浴超声5-10min，然后5000g 4度离心2min，转移上清到50mL的离心管中；再次重复加入上述提取液，并震荡，然后收集萃取液，直至菌体无明显黄色；混匀收集到的丙酮萃取液，取出2mL，12000rpm离心10分钟，再取上清1.2mL至棕色的HPLC进样瓶中，进行HPLC分析。[0129]检测方法：番茄红素的检测使用四元HPLC进行的，检测器是紫外检测器，番茄红素的吸收波长是474nm，色谱柱Agilent Zorbax C18(150mm*4.6mm*5μm)，流动相A(乙腈：水＝9：1)和流动相B(甲醇：异丙醇＝3：2)按如下条件分析：0-90％B(0-15min)，90％B(15-30min)，90％-0B(30-35min)，流速1mL/min。[0130]结果显示：方法一中产物经盐酸煮过后，番茄红素会降解，产量检测不稳定，且该方法得到的样品间隔一段时间再检测，甚至能从100mg/L降解到10mg/L，方法二得到的样品比较稳定，间隔一段时间再检测，只从100mg/L到90mg/L。说明方法二的提取方案比方法一更稳定更好。[0131]实施例12 工程菌发酵罐培养发酵方法比较[0132]在本实施例中，发明人对发酵培养基的条件进行了优化筛选，实验过程如下所述：[0133]本实施例中的菌种采用J1011-3，种子培养基采用YPD培养基，发酵培养基采用摇瓶优化过的4种培养基进一步探索发酵罐水平的最优培养基，各种培养基配方如下：[0134]①培养基1号：YPD培养基[0135]2.5L分批培养基：2％蛋白胨，1％酵母提取物和2％葡萄糖；[0136]1L葡萄糖补料培养基：500g/L葡萄糖；400g/L酵母浸粉[0137]500mL乙醇补料培养基:100％纯乙醇。[0138]②培养基2号:YPD含盐培养基[0139]2.5L分批培养基：2％蛋白胨，1％酵母提取物，0.8％KH2PO4和2％葡萄糖；

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1L葡萄糖补料培养基：500g/L葡萄糖，5g/L MgSO4，3.5g/L K2SO4，0.28g/L Na2SO4，

10g/L酵母提取物。

[0141]1L乙醇补料培养基:100％乙醇。[0142]③培养基3号：MMG培养基[0143]2.5L分批培养基：2％葡萄糖，15g/L(NH4)2SO4，8g/L KH2PO4，3g/L MgSO4，0.72g/L ZnSO4.7H2O，10mL/L金属溶液母液和12mL/L维生素溶液母液；[0144]1L葡萄糖补料培养基：500g/L葡萄糖，9g/L KH2PO4，2.5g/L MgSO4，3.5g/L K2SO4，0.28g/L Na2SO4，10mL/L金属溶液母液和12mL/L维生素溶液母液，10g/L酵母提取物。[0145]④培养基4号：MME培养基[0146]2.5L分批培养基：2％葡萄糖，15g/L(NH4)2SO4，8g/L KH2PO4，3g/L MgSO4，0.72g/L ZnSO4.7H2O，10mL/L金属溶液母液和12mL/L维生素溶液母液；[0147]1L葡萄糖补料培养基：500g/L葡萄糖，9g/L KH2PO4，2.5g/L MgSO4，3.5g/L K2SO4，0.28g/L Na2SO4，10mL/L金属溶液母液和12mL/L维生素溶液母液，10g/L酵母提取物。[0148]金属盐母液：15g/L EDTA，5.75g/L ZnSO4，0.32g/L MnCl2，0.50g/L CuSO4，0.47g CoCl2，0.48g Na2MoO4，2.9g/L CaCl2，2.8g/L FeSO4。121度灭菌20分钟。[0149]维生素母液：0.05g/L biotin，1.0g/L calcium pantothenate，1.0g/L nicotinic acid，25.0g/L myoinositol，1g/L thiamine hydrochloride，1g/L pyridoxol hydrochloride，0.2g/L p-aminobenzoic acid。过滤除菌。[0150]上罐培养采用fed-batch方式，首先是分批培养，待碳源葡萄糖基本消耗完后开始补料，补料采用两级补料方式，分别为葡萄糖补料阶段(用于合成菌株)和乙醇(甘油)补料阶段(用于产物合成)。具体方法如下：

[0151]将保种管从-80度冰箱中取出放置冰上解冻，然后划YPD平板，于30度培养箱中培养，然后挑取单克隆至含5mL YPD培养基的PA瓶中，30度摇床中培养，转速为220rmp。待种子液变浑浊后(一般为指数期，OD＝5-8，14-18小时)转接至50mL新鲜的YPD培养基中(250mL三角瓶)，转接量为1％左右。放于30度摇床中培养，转速为220rmp。待种子液长至对数期时(一般14-18小时)转接至200mL新鲜的YPD培养基中(500mL三角瓶)，转接量为1％左右。放于30度摇床中培养，转速为220rmp。长至对数期的种子液作为上罐种子液。初始接种OD调至0.5，所需种子液体积根据公式进行计算。(如发酵液体积为2500mL，种子液OD值为n，则接种种子液体积为25000﹡0.5/n mL)。开始发酵后，控制pH值为5.5，通气量为1.5vvm，初始搅拌速率设置为300rpm，溶氧维持在30％以上(300-600rpm)。

[0152]当分批培养时葡萄糖浓度降至2g/L左右时开始补料葡萄糖，初始补料速率为10mL/L发酵液/h，以维持发酵液中葡萄糖的残留浓度在1g/L左右，每两个小时取样测量一次OD600值和检测一次葡萄糖含量，当葡萄糖浓度低于1g/L时增加补料速率。其中，在发酵培养基1的葡萄糖补料阶段每2小时补料一次酵母提取物(400g/L，每次补加20mL)。当OD值增加缓慢时(开始进入稳定期)停止补料葡萄糖，此时开始监测乙醇残留量，当乙醇浓度降至5g/L时开始补料乙醇或者是甘油，初始补料速率为10mL/L发酵液/h。随后每4h取样检测一次乙醇或甘油含量，当乙醇或甘油浓度低于5g/L时调整补料速率。颜色有变化后开始提取产物检测产物变化，当番茄红素浓度不再增加时结束发酵。[0153]产物检测方式与实施例9中方法二相同。

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结果如图7所示，结果显示:尽管培养基3号(MMG培养基)的细胞量最大，但是培养

基2号(YPD加盐培养基)产量最高，番茄红素产量达到了1950mg/L，所以该培养基为最优培养基，发酵策略是优化的两步补料发酵，先补葡萄糖长菌体，在生长的稳定期补乙醇来提高产量。

[0155]实施例13 菌株的上罐发酵培养[0156]在本实施例中，发明人按照实施例12中得到的最佳发酵培养方式对构建的部分工程菌株进行了发酵，结果如表6所示。[0157]表6：

[0158]

[0159]

[0160]

可以看出，根据本发明实施例构建的工程菌株具有高产番茄红素的性能

[0161]在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不

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必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

[0162]尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

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SEQUENCE LISTING<110> 武汉臻智生物科技有限公司<120> 微生物及其用途<130> PIDC3171214<160> 52<170> PatentIn version 3.3<210> 1<211> 4917<212> DNA<213> Artificial<220><223> 敲除盒片段1的核苷酸序列<400> 1ataacgagaa cacacagggg cgctatcgca cagaatcaaa ttcgatgact ggaaattttt 60tgttaatttc agaggtcgcc tgacgcatat acctttttca actgaaaaat tgggagaaaa 120aggaaaggtg agagcgccgg aaccggcttt tcatatagaa tagagaagcg ttcatgacta 180aatgcttgca tcacaatact tgaagttgac aatattattt aaggacctat tgttttttcc 240aataggtggt tagcaatcgt cttactttct aacttttctt accttttaca tttcagcaat 300atatatatat atatttcaag gatataccat tctaatgtct gcccctaaga agatcgtcgt 360tttgccaggt gaccacgttg gtcaagaaat cacagccgaa gccattaagg ttcttaaagc 420tatttctgat gttcgttcca atgtcaagtt cgatttcgaa aatcatttaa ttggtggtgc 480tgctatcgat gctacaggtg ttccacttcc agatgaggcg ctggaagcct ccaagaaggc 0tgatgccgtt ttgttaggtg ctgtgggtgg tcctaaatgg ggtaccggta gtgttagacc 600tgaacaaggt ttactaaaaa tccgtaaaga acttcaattg tacgccaact taagaccatg 660taactttgca tccgactctc ttttagactt atctccaatc aagccacaat ttgctaaagg 720tactgacttc gttgttgtca gagaattagt gggaggtatt tactttggta agagaaagga 780agacgatggt gatggtgtcg cttgggatag tgaacaatac accgttccag aagtgcaaag 840aatcacaaga atggccgctt tcatggccct acaacatgag ccaccattgc ctatttggtc 900cttggataaa gctaatgttt tggcctcttc aagattatgg agaaaaactg tggaggaaac 960catcaagaac gaattcccta cattgaaggt tcaacatcaa ttgattgatt ctgccgccat 1020gatcctagtt aagaacccaa cccacctaaa tggtattata atcaccagca acatgtttgg 1080tgatatcatc tccgatgaag cctccgttat cccaggttcc ttgggtttgt tgccatctgc 1140gtccttggcc tctttgccag acaagaacac cgcatttggt ttgtacgaac catgccacgg 1200ttctgctcca gatttgccaa agaataaggt caaccctatc gccactatct tgtctgctgc 1260aatgatgttg aaattgtcat tgaacttgcc tgaagaaggt aaggccattg aagatgcagt 1320taaaaaggtt ttggatgcag gtatcagaac tggtgattta ggtggttcca acagtaccac 1380cgaagtcggt gatgctgtcg ccgaagaagt taagaaaatc cttgcttaaa tttaactcct 1440taagttactt taatgattta gtttttatta ttaataattc atgctcatga catctcatat 1500

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序　列　表

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cgctgctctt ctgcataatt aatactgaaa agtttttcat acttttaaac ataacctttt 780tttaagcaaa actctatgac ccggattaga aaactacgaa aagagggtaa taacataggt 840gcaggatttc catcgataac gacgccgaca atgagccttg ctgcaacatc caattaggac 900taataactat cgtaggaatt tctacgtaat aaacttcaac agagcctaaa atttgaaaat 960aaataatcta gaggggaaac ttaaagaaat tctattcttg tcaataaagt ggaaatctgt 1020cagatgtcac agtttcttta tttgtgacac atattttcaa cataaattca ggcattagtg 1080ctgtaagcac aaaaagttgt ggcgatatga atattccaga ttttacttac aagctgcatt 1140gtagtcttac aattcttttt ttcttttttt ttttttatgg aaaggaccac tcttacataa 1200ctagaatagc attaagaatc agatttacag ataaagatga cattatttta tatatatatt 1260gtcactccgt tcaagtcgac aaccaataaa aaatttaaaa aaagccaggc agttaataga 1320aaaaatatga tatgaatgaa tattccactt tcttttcaca gcttgtctgt aagcggatgc 1380cgggagcaga caagcccgtc agggcgcgtc agcgggtgtt ggcgggtgtc ggggctggct 1440taactatgcg gcatcagagc agattgtact gagagtgcac cataaacgac attactatat 1500atataatata ggaagcattt aatagacagc atcgtaatat atgtgtactt tgcagttatg 1560acgccagatg gcagtagtgg aagatattct ttattgaaaa atagcttgtc accttacgta 1620caatcttgat ccggagcttt tctttttttg ccgattaaga attaattcgg tcgaaaaaag 1680aaaaggagag ggccaagagg gagggcattg gtgactattg agcacgtgag tatacgtgat 1740taagcacaca aaggcagctt ggagtatgtc tgttattaat ttcacaggta gttctggtcc 1800attggtgaaa gtttgcggct tgcagagcac agaggccgca gaatgtgctc tagattccga 1860tgctgacttg ctgggtatta tatgtgtgcc caatagaaag agaacaattg acccggttat 1920tgcaaggaaa atttcaagtc ttgtaaaagc atataaaaat agttcaggca ctccgaaata 1980cttggttggc gtgtttcgta atcaacctaa ggaggatgtt ttggctctgg tcaatgatta 2040cggcattgat atcgtccaac tgcatggaga tgagtcgtgg caagaatacc aagagttcct 2100cggtttgcca gttattaaaa gactcgtatt tccaaaagac tgcaacatac tactcagtgc 2160agcttcacag aaacctcatt cgtttattcc cttgtttgat tcagaagcag gtgggacagg 2220tgaacttttg gattggaact cgatttctga ctgggttgga aggcaagaga gccccgaaag 2280cttacatttt atgttagctg gtggactgac gccagaaaat gttggtgatg cgcttagatt 2340aaatggcgtt attggtgttg atgtaagcgg aggtgtggag acaaatggtg taaaagactc 2400taacaaaata gcaaatttcg tcaaaaatgc taagaaatag gttattactg agtagtattt 2460atttaagtat tgtttgtgca cttgcctatg cggtgtgaaa taccgcacag atgcgtaagg 2520agaaaatacc gcatcaggaa attgtaaacg ttaatatttt gttaaaattc gcgttaaatt 2580tttgttaaat cagctcattt tttaaccaat aggccgaaat cggcaaaatc ccttataaat 20caaaagaata gaccgagata gggttgagtg ttgttccagt ttggaacaag agtccactat 2700taaagaacgt ggactccaac gtcaaagggc gaaaaaccgt ctatcagggc gatggcccac 2760tacgtgaacc atcaccctaa tcaagttttt tggggtcgag gtgccgtaaa gcactaaatc 2820ggaaccctaa agggagcccc cgatttagag cttgacgggg aaagccggcg aacgtggcga 2880gaaaggaagg gaagaaagcg aaaggagcgg gcgctagggc gctggcaagt gtagcggtca 2940cgctgcgcgt aaccaccaca cccgccgcgc ttaatgcgcc gctacagggc gcgtcgcgcc 3000attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgatc ggtgcgggcc tcttcgctat 3060

CN 10712 A

序　列　表

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tacgccagct ggcgaaaggg ggatgtgctg caaggcgatt aagttgggta acgccagggt 3120tttcccagtc acgacgttgt aaaacgacgg ccagtgagcg cgcgtaatac gactcactat 3180agggcgaatt gggtactaca cggtccaatg gataaacatt ttttatcaac actatgatat 3240ataaatataa tagtttttcg tatatatatt cctttttttg gtcaattttt gaaattttcg 3300tagaaaaggg agagacaaaa cacattatat caatgaaaac gtacaaaaag tagataaagt 3360cagtgcttaa acacgtcttt tccttaaaaa tactttatta tttttatttt attgagaggg 3420tggtttaaaa atagaaatag agagagaggt acatacataa acatacgcgc acaaaagcag 3480agattaggat ttaatgcagg tgacggaccc atctttcaaa cgatttatat cagtggcgtc 30caaattgtta ggttttgttg gttcagcagg tttcctgttg tgggtcatat gactttgaac 3600caaatggccg gctgctaggg cagcacataa ggataattca cctgccaaga cggcacaggc 3660aactattctt gctaattgac gtgcgttggt accaggagcg gtagcatgcg ggcctcttac 3720acctaataag tccaacatgg caccttgtgg ttctagaaca gtaccaccac cgatggtacc 3780tacttcgatg gatggcatgg atacggaaat tctcaaatca ccgtccactt ctttcatcaa 3840tgttatacag ttggaacttt caacattttg tgcaggatct tgtcctaatg ccaagaaaac 3900agctgtcact aaattagctg catgtgcgtt aaatccacca acagacccag ccattgcaga 3960tccaaccaaa ttcttagcaa tgttcaactc aaccaatgcg gaaacatcac tttttaacac 4020ttttctgaca acatcaccag gaatagtagc ttctgcgacg acactcttac cacgaccttc 4080gatccagttg atggcagctg gttttttgtc ggtacagtag ttaccagaaa cggagacaac 4140ctccatatct tcccagccat actcttctac catttgcttt aatgagtatt cgacaccttt 4200agaaatcata ttcataccca ttgcgtcacc agtagttgtt ctaaatctca tgaagagtaa 4260atctcctgct agacaagttt gaatatgttg cagacgtgca aatcttgatg tagagttaaa 4320agctttttta attgcgtttt gtccctcttc tgagtctaac catatcttac aggcaccaga 4380tcttttcaaa gttgggaaac ggactactgg gcctcttgtc ataccatcct tagttaaaac 4440agttgttgca ccaccgccag cattgattgc cttacagcca cgcatggcag aagctaccaa 4500acaaccctct gtagttgcca ttggtatatg ataagatgta ccatcgataa ccaaggggcc 4560tataacacca acgggcaaag gcatgtaacc tataacattt tcacaacaag cgccaaatac 4620gcggtcgtag tcataatttt tatatggtaa acgatcagat gctaatacag gagcttctgc 4680caaaattgaa agagccttcc tacgtaccgc aaccgctctc gtagtatcac ctaatttttt 4740ctccaaagcg tacaaaggta acttaccgtg aataaccaag gcagcgacct ctttgttctt 4800caattgtttt gtatttccac tacttaataa tgcttctaat tcttctaaag gacgtatttt 4860cttatccaag ctttcaatat cgcgggaatc atcttcctca ctagatgatg aaggtcctga 4920tgagctcgat tgcgcagatg ataaactttt gactttcgat ccagaaatga ctgttttatt 4980ggttaaaacc atttatattg aattttcaaa aattcttact ttttttttgg atggacgcaa 5040agaagtttaa taatcatatt acatggcaat accaccatat acatatccat atctaatctt 5100acttatatgt tgtggaaatg taaagagccc cattatctta gcctaaaaaa accttctctt 5160tggaactttc agtaatacgc ttaactgctc attgctatat tgaagtacgg attagaagcc 5220gccgagcggg cgacagccct ccgacggaag actctcctcc gtgcgtcctg gtcttcaccg 5280gtcgcgttcc tgaaacgcag atgtgcctcg cgccgcactg ctccgaacaa taaagattct 5340acaatactag cttttatggt tatgaagagg aaaaattggc agtaacctgg ccccacaaac 00

CN 10712 A

序　列　表

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cttcaaatca acgaatcaaa ttaacaacca taggataata atgcgattag ttttttagcc 60ttatttctgg ggtaattaat cagcgaagcg atgatttttg atctattaac agatatataa 5520atgcaaaagc tgcataacca ctttaactaa tactttcaac attttcggtt tgtattactt 5580cttattcaaa tgtcataaaa gtatcaacaa aaaattgtta atatacctct atactttaac 50gtcaaggaga aaaaactata gcgcaatgat tgaatagtca aagatttttt ttttttaatt 5700tttttttttt catagaactt tttatttaaa taaatcacgt ctatatatgt atcagtataa 5760cgtaaaaaaa aaaacaccgt cagttaaaca aaacataaat aaaaaaaaaa agaagtgtca 5820aatcaagtgt caaatgtata cttctttttt ttactttgtt cagaacaact tctcattttt 5880ttctactcat aactttagca tcacaaagta cacaataata acgagtagta acacttttat 5940agttcataca tgcttcaact acttaataaa tgattgtatg ataatgtttt caatgtaaga 6000gatttcgatt atccacaaac tttgaaacac agggacacaa ttcttgatat gctttcaacc 6060gctgcgtttt ggatacctat tcttgacata atatgactac cattttgtta ttgtacgtgg 6120ggcagttgac gtcttatcat atgtcaaagt catttgcgaa gttcttggca agttgccaac 6180tgacgagatg cagtaaaaag agattgccgt cttgaaactt tttgtccttt tttttttccg 6240gggactctac gagaaccctt tgtcctactg attaattttg tactgaattt ggacaattca 6300gattttagta gacaagcgcg aggaggaaaa gaaatgacag aaaaattccg atggacaaga 6360agataggaaa aaaaaaaagc tttcaccgat ttcctagacc ggaaaaaagt cgtatgacat 20cagaatgaaa aattttcaag ttagacaagg acaaaatcag gacaaattgt aaagatatga 80taaatcattt gattcagcgc caatttgccc ttttccattt tccattaaat ctctgttctc 60tcttacttat atgatgatta ggtatcatct gtataaaact cctttcttaa tttcactcta 6600aagcataccc catagagaag atctttcggt tcgaagacat tcctacgcat aataagaata 6660ggagggaata atgccagaca atctatcatt acatttaagc ggctcttcaa aaagattgaa 6720ctctcgccaa cttatggaat cttccaatga gacctttgcg ccaaataatg tggatttgga 6780aaaagagtat aagtcatctc agagtaatat aactaccgaa gtttatgagg catcgagctt 6840tgaagaaaaa gtaagctcag aaaaacctca atacagctca ttctggaaga aaatctatta 6900tgaatatgtg gtcgttgaca aatcaatctt gggtgtttct attctggatt catttatgta 6960caaccaggac ttgaagcccg tcgaaaaaga aaggcgggtt tggtcctggt acaattattg 7020ttacttctgg cttgctgaat gtttcaatat caacacttgg caaattgcag ctacaggtct 7080acaactgggt ctaaattggt ggcagtgttg gataacaatt tggattgggt acggtttcgt 7140tggtgctttt gttgttttgg cctctagagt tggatctgct tatcatttgt cattccctat 7200atcatctaga gcatcattcg gtattttctt ctctttatgg cctgttatta atagagtcgt 7260catggccatc gtttggtata gtgtccaagc ttatattgcg gcaactcccg tatcattaa 7319<210> 4<211> 457<212> DNA<213> Artificial<220><223> 启动子PGAL1的核苷酸序列<400> 4

CN 10712 A

序　列　表

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agtacggatt agaagccgcc gagcgggcga cagccctccg acggaagact ctcctccgtg 60cgtcctggtc ttcaccggtc gcgttcctga aacgcagatg tgcctcgcgc cgcactgctc 120cgaacaataa agattctaca atactagctt ttatggttat gaagaggaaa aattggcagt 180aacctggccc cacaaacctt caaatcaacg aatcaaatta acaaccatag gataataatg 240cgattagttt tttagcctta tttctggggt aattaatcag cgaagcgatg atttttgatc 300tattaacaga tatataaatg caaaagctgc ataaccactt taactaatac tttcaacatt 360ttcggtttgt attacttctt attcaaatgt cataaaagta tcaacaaaaa attgttaata 420tacctctata ctttaacgtc aaggagaaaa aactata 457<210> 5<211> 500<212> DNA<213> Artificial<220><223> 启动子PGAL7的核苷酸序列<400> 5gacggtagca acaagaatat agcacgagcc gcgaagttca tttcgttact tttgatatcg 60ctcacaacta ttgcgaagcg cttcagtgaa aaaatcataa ggaaaagttg taaatattat 120tggtagtatt cgtttggtaa agtagagggg gtaatttttc ccctttattt tgttcataca 180ttcttaaatt gctttgcctc tccttttgga aagctatact tcggagcact gttgagcgaa 240ggctcattag atatattttc tgtcattttc cttaacccaa aaataaggga aagggtccaa 300aaagcgctcg gacaactgtt gaccgtgatc cgaaggactg gctatacagt gttcacaaaa 360tagccaagct gaaaataatg tgtagctatg ttcagttagt ttggctagca aagatataaa 420agcaggtcgg aaatatttat gggcattatt atgcagagca tcaacatgat aaaaaaaaac 480agttgaatat tccctcaaaa 500<210> 6<211> 215<212> DNA<213> Artificial<220><223> 启动子PGAL10的核苷酸序列<400> 6tacttcaata tagcaatgag cagttaagcg tattactgaa agttccaaag agaaggtttt 60tttaggctaa gataatgggg ctctttacat ttccacaaca tataagtaag attagatatg 120gatatgtata tggtggtatt gccatgtaat atgattatta aacttctttg cgtccatcca 180aaaaaaaagt aagaattttt gaaaattcaa tataa 215<210> 7<211> 668<212> DNA<213> Artificial

CN 10712 A

序　列　表

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<220><223> 启动子PGAL1-10的核苷酸序列<400> 7tatagttttt tctccttgac gttaaagtat agaggtatat taacaatttt ttgttgatac 60ttttatgaca tttgaataag aagtaataca aaccgaaaat gttgaaagta ttagttaaag 120tggttatgca gcttttgcat ttatatatct gttaatagat caaaaatcat cgcttcgctg 180attaattacc ccagaaataa ggctaaaaaa ctaatcgcat tattatccta tggttgttaa 240tttgattcgt tgatttgaag gtttgtgggg ccaggttact gccaattttt cctcttcata 300accataaaag ctagtattgt agaatcttta ttgttcggag cagtgcggcg cgaggcacat 360ctgcgtttca ggaacgcgac cggtgaagac caggacgcac ggaggagagt cttccgtcgg 420agggctgtcg cccgctcggc ggcttctaat ccgtacttca atatagcaat gagcagttaa 480gcgtattact gaaagttcca aagagaaggt ttttttaggc taagataatg gggctcttta 0catttccaca acatataagt aagattagat atggatatgt atatggtggt attgccatgt 600aatatgatta ttaaacttct ttgcgtccat ccaaaaaaaa agtaagaatt tttgaaaatt 660caatataa 668<210> 8<211> 668<212> DNA<213> Artificial<220><223> 启动子PGAL10-1的核苷酸序列<400> 8ttatattgaa ttttcaaaaa ttcttacttt ttttttggat ggacgcaaag aagtttaata 60atcatattac atggcaatac caccatatac atatccatat ctaatcttac ttatatgttg 120tggaaatgta aagagcccca ttatcttagc ctaaaaaaac cttctctttg gaactttcag 180taatacgctt aactgctcat tgctatattg aagtacggat tagaagccgc cgagcgggcg 240acagccctcc gacggaagac tctcctccgt gcgtcctggt cttcaccggt cgcgttcctg 300aaacgcagat gtgcctcgcg ccgcactgct ccgaacaata aagattctac aatactagct 360tttatggtta tgaagaggaa aaattggcag taacctggcc ccacaaacct tcaaatcaac 420gaatcaaatt aacaaccata ggataataat gcgattagtt ttttagcctt atttctgggg 480taattaatca gcgaagcgat gatttttgat ctattaacag atatataaat gcaaaagctg 0cataaccact ttaactaata ctttcaacat tttcggtttg tattacttct tattcaaatg 600tcataaaagt atcaacaaaa aattgttaat atacctctat actttaacgt caaggagaaa 660aaactata 668<210> 9<211> 1123<212> DNA<213> Artificial<220>

CN 10712 A

序　列　表

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<223> 启动子PHXT1的核苷酸序列<400> 9gattttacgt atatcaacta gttgacgatt atgatatctt tatagatttt aaggtgggga 60aagaacatga gaccccagat ggaattgatt atggggacat tgttgccttt atatataatt 120tcaatatact aattcaaatg attaaaaacg tgagggggac acgcaacttc gggtgttaag 180aaatattttg ctacattaga taatggtgga gtttcctggc ttgtcggata aaagccatca 240aatgtcgcag cagctcatgt ttacgtttgc tgtcttctgc ccacgtcata tgagtggtat 300tcttctatca gcacttgatg aatattcttt ttctcatata tctgaaagac aaaagatcgg 360cacggcaatg ccctgcagca tttcttccta gtttttccga atttccatta cgtattggat 420cttgtgcgca tatttgtcag tccttcacgg aaaaaaaaaa agagcactgg gtcacttcgg 480aaaaactttt gactcaatgc aacagtgtca taatcctttg cgctgtctct ttgaagaaaa 0atcaggagtg caagatatcg attaattcct tggaagttat gatggttagt cttagtttaa 600ctctcttgaa gaagggtttt ttcagttggt caacactctt tagaggtaaa aaaaaaaaaa 660aaaaaaaaaa aaagagaatt cttcatgtaa tttaccatga ttctacgttt ttgcaagcaa 720aaatgaagat aatccgagcg catgcgcaag tagtccctgc catgccgctt cggaaaaact 780ttcgaaacca atactcctta catccgcctt gaatttagga cctacaattg ttgtctcttc 840tgcttgaacc aataagccct agaaacctta caccctaatt tgcacaagaa aactacgaaa 900aaattttttc ctcttttttc cgcagctcca atctcgccct gctatttttt tggttcggag 960aaaaatagtc ggtcgatatg aattgaagtt tcattgtggc cactcgttta ggaatggaat 1020aacctccgcg aatggaaaaa aagaactcgg aatatcaaaa attccggctc aaaggaaaaa 1080tttgcttcag gaggggggaa ttatattcca gatgagacct gca 1123<210> 10<211> 1740<212> DNA<213> Artificial<220><223> McCrtI的核苷酸序列<400> 10atgtctaaga aacatatcgt tatcatcggt gctggtgttg gtggtactgc aacagctgca 60agattggcta gagaaggttt taaagttaca gttgttgaaa agaatgattt tggtggtggt 120agatgttcat tgatccatca tcaaggtcat agattcgatc aaggtccatc tttgtatttg 180atgccaaagt acttcgaaga tgctttcgca gatttggatg aaagaatcca agatcatttg 240gaattgttga gatgtgataa caactacaag gttcatttcg atgatggtga atctatccaa 300ttgtcttcag atttgactag aatgaaagct gaattggata gagttgaagg tccattgggt 360ttcggtagat ttttagattt catgaaggaa actcatatcc attacgaatc aggtacattg 420atcgctttga agaaaaattt cgaatctatc tgggatttga tcagaattaa atacgcacca 480gaaattttta gattgcattt gttcggtaaa atctatgata gagcatctaa gtacttcaag 0actaagaaaa tgagaatggc ttttactttc caaacaatgt acatgggcat gtcaccatac 600gatgctccag cagtttactc tttgttgcaa tacactgaat ttgctgaagg tatttggtat 660

CN 10712 A

序　列　表

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ccaagaggtg gttttaatat ggttgttcaa aagttggaag ctatcgcaaa gcaaaagtac 720gatgctgaat tcatatataa cgctccagtt gcaaagatta atactgatga tgcaacaaag 780caagttactg gtgttacatt ggaaaacggt catatcatcg atgctgatgc agttgtttgt 840aatgctgatt tggtttacgc ataccataat ttgttaccac catgtagatg gactcaaaac 900acattggctt ctaagaaatt gacatcttca tctatctctt tctactggtc aatgtctact 960aaggttccac aattggatgt tcataacatt ttcttggctg aagcatacca agaatcattc 1020gatgaaattt ttaaggattt cggtttgcca tcagaagctt ctttctacgt taacgttcca 1080tcaagaatcg atccatctgc tgcaccagat ggtaaagatt ctgttattgt tttggttcca 1140atcggtcata tgaagtcaaa aactggtgac gcatctacag aaaattatcc agctatggtt 1200gataaggcaa gaaagatggt tttggcagtt attgaaagaa gattgggcat gtcaaacttc 1260gctgatttga tcgaacatga acaagttaac gatccagcag tttggcaatc taagtttaat 1320ttgtggagag gttcaatctt gggtttgtct catgatgttt tgcaagtttt gtggttcaga 1380ccatcaacta aggattctac aggtagatac gataatttgt ttttcgttgg tgcttcaact 1440catccaggta caggtgttcc aattgttttg gcaggttcaa agttgacttc tgatcaagtt 1500gttaagtctt tcggtaaaac accaaagcca agaaagatcg aaatggaaaa cactcaagca 1560ccattggaag aaccagatgc tgaatcaaca tttccagttt ggttttggtt aagagctgca 1620ttctgggtta tgttcatgtt tttctatttc tttccacaat caaacggtca aactccagct 1680tcttttatta acaatttgtt gccagaagtt tttagagttc ataattctaa tgttatttga 1740<210> 11<211> 930<212> DNA<213> Artificial<220><223> PaCrtB的核苷酸序列<400> 11atgtcacaac caccattatt ggaccacgct acacaaacta tggcaaacgg ttctaaatct 60ttcgctactg ctgctaaatt attcgaccca gcaacaagaa gatctgtatt gatgttgtac 120acctggtgta gacattgcga tgacgttata gatgaccaaa ctcacggttt tgcttcagaa 180gctgcagccg aagaagaagc tacacaaaga ttggcaagat taagaacttt gacattagct 240gcattcgaag gtgccgaaat gcaagatcca gcttttgccg ctttccaaga agttgcatta 300acccatggta ttactcctag aatggctttg gatcacttag acggttttgc aatggatgtc 360gcccaaacaa gatacgtaac cttcgaagac actttaagat attgttacca tgtcgccggt 420gttgtcggtt tgatgatggc tagagtaatg ggtgttagag atgaaagagt tttagataga 480gcatgtgact tgggtttagc cttccaattg acaaacatag ctagagatat aatagatgac 0gcagccatag acagatgcta tttgccagct gaatggttac aagatgcagg tttgactcct 600gaaaattacg ctgcaagaga aaacagagcc gctttagcca gagttgctga aagattgata 660gatgcagccg aaccatatta catctcttca caagctggtt tgcatgattt gccacctaga 720tgcgcatggg ccattgctac cgcaagatct gtttacagag aaatcggtat taaagtcaag 780gctgcaggtg gttccgcatg ggatagaaga caacacactt ctaaaggtga aaagatcgct 840

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atgttgatgg ccgctcctgg tcaagttatt agagcaaaga ccaccagagt caccccaaga 900ccagccggtt tatggcaaag acctgtttaa 930<210> 12<211> 963<212> DNA<213> Artificial<220><223> BtCarG的核苷酸序列<400> 12atgttgacat cttcaaaatc tattgagtct tttccaaaaa atgttcaacc atatggtaag 60cactaccaga atggtttgga gccagtcggt aagtctcaag aagacatttt attggaacca 120ttccattact tatgttcaaa cccaggtaaa gatgtcagaa ctaaaatgat tgaagctttc 180aacgcttggt tgaaggtccc taaggacgat ttaattgtta ttactagagt tattgaaatg 240ttacattctg cttctttgtt aattgacgat gttgaagatg attctgtttt gagaaggggt 300gtcccagctg cacatcacat ttatggtaca ccacaaacta ttaattgtgc aaactacgtt 360tactttttgg ctttgaaaga aattgctaag ttaaataaac caaatatgat tactatttac 420actgatgaat tgataaattt gcatagaggt caaggtatgg aattgttctg gagggataca 480ttgacatgtc caacagaaaa agaatttttg gatatggtta atgataagac tggaggtttg 0ttgagattag ctgttaaatt aatgcaagaa gcatctcaat caggtactga ttatactggt 600ttagtttcaa aaattggtat acactttcaa gttagagatg attatatgaa tttgcagtct 660aaaaattatg ctgataataa aggtttttgt gaggatttaa cagaaggtaa attctctttc 720ccaattatac attctattag atctgatcca tctaatagac aattgttgaa cattttgaaa 780caaagatctt cttctattga attgaaacaa tttgctttgc aattattgga aaatactaat 840actttccaat attgtagaga ttttttgaga gttttggaaa aagaagctag agaagaaatt 900aaattgttgg gtggtaacat tatgttggaa aagattatgg atgttttgtc tgttaatgaa 960taa 963<210> 13<211> 915<212> DNA<213> Artificial<220><223> INO2基因的核苷酸序列<400> 13atgtcccaag caactgggaa cgaattactg ggtatcctag atctggataa cgatatagac 60tttgaaactg cttaccaaat gctcagcagt aacttcgacg accaaatgtc tgcgcacata 120catgaaaaca cgtttagtgc aacttcccct cctctgttaa cacacgagct cggcataatt 180cctaacgtgg caaccgtgca accctctcac gtagaaacta tacctgccga taaccaaact 240catcatgctc ctttgcatac tcatgctcac tatctaaatc acaaccctca tcaaccaagc 300atgggttttg atcaaacgct tggtctcaag ttgtctcctt ccagttcggg gttgttgagc 360

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序　列　表

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序　列　表

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序　列　表

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序　列　表

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aacgtctcag gacacaggtt gggaactgct gaaattgaat cagcattggt cgctcaccct 1620aagatagctg aggcagctgt cgtcggaatt cctcacgcaa ttaagggaca ggcaatttac 1680gcatacgtca ctttgaacca cggtgaagag ccatcaccag agttgtacgc agaggttagg 1740aactgggtca ggaaggagat tggacctttg gcaactccag acgtcttgca ctggacagac 1800tcattgccta agacaaggtc tggaaaaata atgaggagaa tattgaggaa aattgctgct 1860ggagatactt caaacttggg tgacacttct acattggctg acccaggtgt tgtcgagaaa 1920ccattggagg aaaaacaggc aatagctatg ccatcttaa 1959<210> 23<211> 1503<212> DNA<213> Artificial<220><223> ALD6基因的核苷酸序列<400> 23atgactaagc tacactttga cactgctgaa ccagtcaaga tcacacttcc aaatggtttg 60acatacgagc aaccaaccgg tctattcatt aacaacaagt ttatgaaagc tcaagacggt 120aagacctatc ccgtcgaaga tccttccact gaaaacaccg tttgtgaggt ctcttctgcc 180accactgaag atgttgaata tgctatcgaa tgtgccgacc gtgctttcca cgacactgaa 240tgggctaccc aagacccaag agaaagaggc cgtctactaa gtaagttggc tgacgaattg 300gaaagccaaa ttgacttggt ttcttccatt gaagctttgg acaatggtaa aactttggcc 360ttagcccgtg gggatgttac cattgcaatc aactgtctaa gagatgctgc tgcctatgcc 420gacaaagtca acggtagaac aatcaacacc ggtgacggct acatgaactt caccacctta 480gagccaatcg gtgtctgtgg tcaaattatt ccatggaact ttccaataat gatgttggct 0tggaagatcg ccccagcatt ggccatgggt aacgtctgta tcttgaaacc cgctgctgtc 600acacctttaa atgccctata ctttgcttct ttatgtaaga aggttggtat tccagctggt 660gtcgtcaaca tcgttccagg tcctggtaga actgttggtg ctgctttgac caacgaccca 720agaatcagaa agctggcttt taccggttct acagaagtcg gtaagagtgt tgctgtcgac 780tcttctgaat ctaacttgaa gaaaatcact ttggaactag gtggtaagtc cgcccatttg 840gtctttgacg atgctaacat taagaagact ttaccaaatc tagtaaacgg tattttcaag 900aacgctggtc aaatttgttc ctctggttct agaatttacg ttcaagaagg tatttacgac 960gaactattgg ctgctttcaa ggcttacttg gaaaccgaaa tcaaagttgg taatccattt 1020gacaaggcta acttccaagg tgctatcact aaccgtcaac aattcgacac aattatgaac 1080tacatcgata tcggtaagaa agaaggcgcc aagatcttaa ctggtggcga aaaagttggt 1140gacaagggtt acttcatcag accaaccgtt ttctacgatg ttaatgaaga catgagaatt 1200gttaaggaag aaatttttgg accagttgtc actgtcgcaa agttcaagac tttagaagaa 1260ggtgtcgaaa tggctaacag ctctgaattc ggtctaggtt ctggtatcga aacagaatct 1320ttgagcacag gtttgaaggt ggccaagatg ttgaaggccg gtaccgtctg gatcaacaca 1380tacaacgatt ttgactccag agttccattc ggtggtgtta agcaatctgg ttacggtaga 1440gaaatgggtg aagaagtcta ccatgcatac actgaagtaa aagctgtcag aattaagttg 1500

CN 10712 A

序　列　表

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taa 1503<210> 24<211> 1404<212> DNA<213> Artificial<220><223> EUTE基因的核苷酸序列<400> 24atgaatcaac aggatattga acaggtggtg aaagcggtac tgctgaaaat gcaaagcagt 60gacacgccgt ccgccgccgt tcatgagatg ggcgttttcg cgtccctgga tgacgccgtt 120gcggcagcca aagtcgccca gcaagggtta aaaagcgtgg caatgcgcca gttagccatt 180gctgccattc gtgaagcagg cgaaaaacac gccagagatt tagcggaact tgccgtcagt 240gaaaccggca tggggcgcgt tgaagataaa tttgcaaaaa acgtcgctca ggcgcgcggc 300acaccaggcg ttgagtgcct ctctccgcaa gtgctgactg gcgacaacgg cctgacccta 360attgaaaacg caccctgggg cgtggtggct tcggtgacgc cttccactaa cccggcggca 420accgtaatta acaacgccat cagcctgatt gccgcgggca acagcgtcat ttttgccccg 480catccggcgg cgaaaaaagt ctcccagcgg gcgattacgc tgctcaacca ggcgattgtt 0gccgcaggtg ggccggaaaa cttactggtt actgtggcaa atccggatat cgaaaccgcg 600caacgcttgt tcaagtttcc gggtatcggc ctgctggtgg taaccggcgg cgaagcggta 660gtagaagcgg cgcgtaaaca caccaataaa cgtctgattg ccgcaggcgc tggcaacccg 720ccggtagtgg tggatgaaac cgccgacctc gcccgtgccg ctcagtccat cgtcaaaggc 780gcttctttcg ataacaacat catttgtgcc gacgaaaagg tactgattgt tgttgatagc 840gtagccgatg aactgatgcg tctgatggaa ggccagcacg cggtgaaact gaccgcagaa 900caggcgcagc agctgcaacc ggtgttgctg aaaaatatcg acgagcgcgg aaaaggcacc 960gtcagccgtg actgggttgg tcgcgacgca ggcaaaatcg cggcggcaat cggccttaaa 1020gttccgcaag aaacgcgcct gctgtttgtg gaaaccaccg cagaacatcc gtttgccgtg 1080actgaactga tgatgccggt gttgcccgtc gtgcgcgtcg ccaacgtggc ggatgccatt 1140gcgctagcgg tgaaactgga aggcggttgc caccacacgg cggcaatgca ctcgcgcaac 1200atcgaaaaca tgaaccagat ggcgaatgct attgatacca gcattttcgt taagaacgga 1260ccgtgcattg ccgggctggg gctgggcggg gaaggctgga ccaccatgac catcaccacg 1320ccaaccggtg aaggggtaac cagcgcgcgt acgtttgtcc gtctgcgtcg ctgtgtatta 1380gtcgatgcgt ttcgcattgt ttaa 1404<210> 25<211> 1332<212> DNA<213> Artificial<220><223> ERG12基因的核苷酸序列<400> 25

CN 10712 A

序　列　表

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atgtcattac cgttcttaac ttctgcaccg ggaaaggtta ttatttttgg tgaacactct 60gctgtgtaca acaagcctgc cgtcgctgct agtgtgtctg cgttgagaac ctacctgcta 120ataagcgagt catctgcacc agatactatt gaattggact tcccggacat tagctttaat 180cataagtggt ccatcaatga tttcaatgcc atcaccgagg atcaagtaaa ctcccaaaaa 240ttggccaagg ctcaacaagc caccgatggc ttgtctcagg aactcgttag tcttttggat 300ccgttgttag ctcaactatc cgaatccttc cactaccatg cagcgttttg tttcctgtat 360atgtttgttt gcctatgccc ccatgccaag aatattaagt tttctttaaa gtctacttta 420cccatcggtg ctgggttggg ctcaagcgcc tctatttctg tatcactggc cttagctatg 480gcctacttgg gggggttaat aggatctaat gacttggaaa agctgtcaga aaacgataag 0catatagtga atcaatgggc cttcataggt gaaaagtgta ttcacggtac cccttcagga 600atagataacg ctgtggccac ttatggtaat gccctgctat ttgaaaaaga ctcacataat 660ggaacaataa atacaaacaa ttttaagttc ttagatgatt tcccagccat tccaatgatc 720ctaacctata ctagaattcc aaggtctaca aaagatcttg ttgctcgcgt tcgtgtgttg 780gtcaccgaga aatttcctga agttatgaag ccaattctag atgccatggg tgaatgtgcc 840ctacaaggct tagagatcat gacaaagtta agtaaatgta aaggcaccga tgacgaggcc 900gtagaaacta ataatgaact gtatgaacaa ctattggaat tgataagaat aaatcatgga 960ctgcttgtct caatcggtgt ttctcatcct ggattagaac ttattaaaaa tctgagcgat 1020gatttgagaa ttggctccac aaaacttacc ggtgctggtg gcggcggttg ctctttgact 1080ttgttacgaa gagacattac tcaagagcaa attgacagtt tcaaaaagaa attgcaagat 1140gattttagtt acgagacatt tgaaacagac ttgggtggga ctggctgctg tttgttaagc 1200gcaaaaaatt tgaataaaga tcctaaaatc aaatccctag tattccaatt atttgaaaat 1260aaaactacca caaagcaaca aattgacgat ctattattgc caggaaacac gaatttacca 1320tggacttcat aa 1332<210> 26<211> 867<212> DNA<213> Artificial<220><223> IDI1基因的核苷酸序列<400> 26atgactgccg acaacaatag tatgccccat ggtgcagtat ctagttacgc caaattagtg 60caaaaccaaa cacctgaaga cattttggaa gagtttcctg aaattattcc attacaacaa 120agacctaata cccgatctag tgagacgtca aatgacgaaa gcggagaaac atgtttttct 180ggtcatgatg aggagcaaat taagttaatg aatgaaaatt gtattgtttt ggattgggac 240gataatgcta ttggtgccgg taccaagaaa gtttgtcatt taatggaaaa tattgaaaag 300ggtttactac atcgtgcatt ctccgtcttt attttcaatg aacaaggtga attactttta 360caacaaagag ccactgaaaa aataactttc cctgatcttt ggactaacac atgctgctct 420catccactat gtattgatga cgaattaggt ttgaagggta agctagacga taagattaag 480ggcgctatta ctgcggcggt gagaaaacta gatcatgaat taggtattcc agaagatgaa 0

CN 10712 A

序　列　表

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序　列　表

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<400> 28atgaccgttt acacagcatc cgttaccgca cccgtcaaca tcgcaaccct taagtattgg 60gggaaaaggg acacgaagtt gaatctgccc accaattcgt ccatatcagt gactttatcg 120caagatgacc tcagaacgtt gacctctgcg gctactgcac ctgagtttga acgcgacact 180ttgtggttaa atggagaacc acacagcatc gacaatgaaa gaactcaaaa ttgtctgcgc 240gacctacgcc aattaagaaa ggaaatggaa tcgaaggacg cctcattgcc cacattatct 300caatggaaac tccacattgt ctccgaaaat aactttccta cagcagctgg tttagcttcc 360tccgctgctg gctttgctgc attggtctct gcaattgcta agttatacca attaccacag 420tcaacttcag aaatatctag aatagcaaga aaggggtctg gttcagcttg tagatcgttg 480tttggcggat acgtggcctg ggaaatggga aaagctgaag atggtcatga ttccatggca 0gtacaaatcg cagacagctc tgactggcct cagatgaaag cttgtgtcct agttgtcagc 600gatattaaaa aggatgtgag ttccactcag ggtatgcaat tgaccgtggc aacctccgaa 660ctatttaaag aaagaattga acatgtcgta ccaaagagat ttgaagtcat gcgtaaagcc 720attgttgaaa aagatttcgc cacctttgca aaggaaacaa tgatggattc caactctttc 780catgccacat gtttggactc tttccctcca atattctaca tgaatgacac ttccaagcgt 840atcatcagtt ggtgccacac cattaatcag ttttacggag aaacaatcgt tgcatacacg 900tttgatgcag gtccaaatgc tgtgttgtac tacttagctg aaaatgagtc gaaactcttt 960gcatttatct ataaattgtt tggctctgtt cctggatggg acaagaaatt tactactgag 1020cagcttgagg ctttcaacca tcaatttgaa tcatctaact ttactgcacg tgaattggat 1080cttgagttgc aaaaggatgt tgccagagtg attttaactc aagtcggttc aggcccacaa 1140gaaacaaacg aatctttgat tgacgcaaag actggtctac caaaggaata a 1191<210> 29<211> 1476<212> DNA<213> Artificial<220><223> ERG13基因的核苷酸序列<400> 29atgaaactct caactaaact ttgttggtgt ggtattaaag gaagacttag gccgcaaaag 60caacaacaat tacacaatac aaacttgcaa atgactgaac taaaaaaaca aaagaccgct 120gaacaaaaaa ccagacctca aaatgtcggt attaaaggta tccaaattta catcccaact 180caatgtgtca accaatctga gctagagaaa tttgatggcg tttctcaagg taaatacaca 240attggtctgg gccaaaccaa catgtctttt gtcaatgaca gagaagatat ctactcgatg 300tccctaactg ttttgtctaa gttgatcaag agttacaaca tcgacaccaa caaaattggt 360agattagaag tcggtactga aactctgatt gacaagtcca agtctgtcaa gtctgtcttg 420atgcaattgt ttggtgaaaa cactgacgtc gaaggtattg acacgcttaa tgcctgttac 480ggtggtacca acgcgttgtt caactctttg aactggattg aatctaacgc atgggatggt 0agagacgcca ttgtagtttg cggtgatatt gccatctacg ataagggtgc cgcaagacca 600accggtggtg ccggtactgt tgctatgtgg atcggtcctg atgctccaat tgtatttgac 660

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序　列　表

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tctgtaagag cttcttacat ggaacacgcc tacgattttt acaagccaga tttcaccagc 720gaatatcctt acgtcgatgg tcatttttca ttaacttgtt acgtcaaggc tcttgatcaa 780gtttacaaga gttattccaa gaaggctatt tctaaagggt tggttagcga tcccgctggt 840tcggatgctt tgaacgtttt gaaatatttc gactacaacg ttttccatgt tccaacctgt 900aaattggtca caaaatcata cggtagatta ctatataacg atttcagagc caatcctcaa 960ttgttcccag aagttgacgc cgaattagct actcgcgatt atgacgaatc tttaaccgat 1020aagaacattg aaaaaacttt tgttaatgtt gctaagccat tccacaaaga gagagttgcc 1080caatctttga ttgttccaac aaacacaggt aacatgtaca ccgcatctgt ttatgccgcc 1140tttgcatctc tattaaacta tgttggatct gacgacttac aaggcaagcg tgttggttta 1200ttttcttacg gttccggttt agctgcatct ctatattctt gcaaaattgt tggtgacgtc 1260caacatatta tcaaggaatt agatattact aacaaattag ccaagagaat caccgaaact 1320ccaaaggatt acgaagctgc catcgaattg agagaaaatg cccatttgaa gaagaacttc 1380aaacctcaag gttccattga gcatttgcaa agtggtgttt actacttgac caacatcgat 1440gacaaattta gaagatctta cgatgttaaa aaataa 1476<210> 30<211> 1509<212> DNA<213> Artificial<220><223> tHMG1基因的核苷酸序列<400> 30atggttttaa ccaataaaac agtcatttct ggatcgaaag tcaaaagttt atcatctgcg 60caatcgagct catcaggacc ttcatcatct agtgaggaag atgattcccg cgatattgaa 120agcttggata agaaaatacg tcctttagaa gaattagaag cattattaag tagtggaaat 180acaaaacaat tgaagaacaa agaggtcgct gccttggtta ttcacggtaa gttacctttg 240tacgctttgg agaaaaaatt aggtgatact acgagagcgg ttgcggtacg taggaaggct 300ctttcaattt tggcagaagc tcctgtatta gcatctgatc gtttaccata taaaaattat 360gactacgacc gcgtatttgg cgcttgttgt gaaaatgtta taggttacat gcctttgccc 420gttggtgtta taggcccctt ggttatcgat ggtacatctt atcatatacc aatggcaact 480acagagggtt gtttggtagc ttctgccatg cgtggctgta aggcaatcaa tgctggcggt 0ggtgcaacaa ctgttttaac taaggatggt atgacaagag gcccagtagt ccgtttccca 600actttgaaaa gatctggtgc ctgtaagata tggttagact cagaagaggg acaaaacgca 660attaaaaaag cttttaactc tacatcaaga tttgcacgtc tgcaacatat tcaaacttgt 720ctagcaggag atttactctt catgagattt agaacaacta ctggtgacgc aatgggtatg 780aatatgattt ctaaaggtgt cgaatactca ttaaagcaaa tggtagaaga gtatggctgg 840gaagatatgg aggttgtctc cgtttctggt aactactgta ccgacaaaaa accagctgcc 900atcaactgga tcgaaggtcg tggtaagagt gtcgtcgcag aagctactat tcctggtgat 960gttgtcagaa aagtgttaaa aagtgatgtt tccgcattgg ttgagttgaa cattgctaag 1020aatttggttg gatctgcaat ggctgggtct gttggtggat ttaacgcaca tgcagctaat 1080

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序　列　表

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序　列　表

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<211> 1953<212> DNA<213> Artificial<220><223> yap1基因的核苷酸序列<400> 32atgagtgtgt ctaccgccaa gaggtcgctg gatgtcgttt ctccgggttc attagcggag 60tttgagggtt caaaatctcg tcacgatgaa atagaaaatg aacatagacg tactggtaca 120cgtgatggcg aggatagcga gcaaccgaag aagaagggta gcaaaactag caaaaagcaa 180gatttggatc ctgaaactaa gcagaagagg actgcccaaa atcgggccgc tcaaagagct 240tttagggaac gtaaggagag gaagatgaag gaattggaga agaaggtaca aagtttagag 300agtattcagc agcaaaatga agtggaagct acttttttga gggaccagtt aatcactctg 360gtgaatgagt taaaaaaata tagaccagag acaagaaatg actcaaaagt gctggaatat 420ttagcaaggc gagatcctaa tttgcatttt tcaaaaaata acgttaacca cagcaatagc 480gagccaattg acacacccaa tgatgacata caagaaaatg ttaaacaaaa gatgaatttc 0acgtttcaat atccgcttga taacgacaac gacaacgaca acagtaaaaa tgtggggaaa 600caattacctt caccaaatga tccaagtcat tcggctccta tgcctataaa tcagacacaa 660aagaaattaa gtgacgctac agattcctcc agcgctactt tggattccct ttcaaatagt 720aacgatgttc ttaataacac accaaactcc tccacttcga tggattggtt agataatgta 780atatatacta acaggtttgt gtcaggtgat gatggcagca atagtaaaac taagaattta 840gacagtaata tgttttctaa tgactttaat tttgaaaacc aatttgatga acaagtttcg 900gagttttgtt cgaaaatgaa ccaggtatgt ggaacaaggc aatgtcccat tcccaagaaa 960cccatctcgg ctcttgataa agaagttttc gcgtcatctt ctatactaag ttcaaattct 1020cctgctttaa caaatacttg ggaatcacat tctaatatta cagataatac tcctgctaat 1080gtcattgcta ctgatgctac taaatatgaa aattccttct ccggttttgg ccgacttggt 1140ttcgatatga gtgccaatca ttacgtcgtg aatgataata gcactggtag cactgatagc 1200actggtagca ctggcaataa gaacaaaaag aacaataata atagcgatga tgtactccca 1260ttcatatccg agtcaccgtt tgatatgaac caagttacta atttttttag tccgggatct 1320accggcatcg gcaataatgc tgcctctaac accaatccca gcctactgca aagcagcaaa 1380gaggatatac cttttatcaa cgcaaatctg gctttcccag acgacaattc aactaatatt 1440caattacaac ctttctctga atctcaatct caaaataagt ttgactacga catgtttttt 1500agagattcat cgaaggaagg taacaattta tttggagagt ttttagagga tgacgatgat 1560gacaaaaaag ccgctaatat gtcagacgat gagtcaagtt taatcaagaa ccagttaatt 1620aacgaagaac cagagcttcc gaaacaatat ctacaatcgg taccaggaaa tgaaagcgaa 1680atctcacaaa aaaatggcag tagtttacag aatgctgaca aaatcaataa tggcaatgat 1740aacgataatg ataatgatgt cgttccatct aaggaaggct ctttactaag gtgttcggaa 1800atttgggata gaataacaac acatccgaaa tactcagata ttgatgtcga tggtttatgt 1860tccgagctaa tggcaaaggc aaaatgttca gaaagagggg ttgtcatcaa tgcagaagac 1920gttcaattag ctttgaataa gcatatgaac taa 1953

CN 10712 A

序　列　表

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<210> 33<211> 1149<212> DNA<213> Artificial<220><223> PaCrtY(Pantoea ananatis)基因的核苷酸序列<400> 33atgcaaccac attacgattt gatcttggtt ggtgcaggtt tggctaacgg tttgatcgct 60ttgagattgc aacaacaaca accagatatg agaatcttgt tgattgatgc tgcaccacaa 120gcaggtggta atcatacatg gtcttttcat catgatgatt tgactgaatc acaacataga 180tggattgctc cattagttgt tcatcattgg ccagattacc aagttagatt cccaacaaga 240agaagaaagt tgaactctgg ttacttctgt atcacttcac aaagattcgc tgaagttttg 300caaagacaat ttggtccaca tttgtggatg gatacagctg ttgcagaagt taatgcagaa 360tctgttagat tgaagaaagg tcaagttatt ggtgctagag cagttattga tggtagaggt 420tatgctgcaa attctgcttt atcagttggt tttcaagctt ttattggtca agaatggaga 480ttgtctcatc cacatggttt atcttcacca attattatgg atgctactgt tgatcaacaa 0aacggttaca gattcgttta ctctttgcca ttgtcaccaa ctagattgtt gatcgaagat 600acacattaca tcgataacgc tactttggat ccagaatgtg caagacaaaa catctgtgat 660tacgctgcac aacaaggttg gcaattgcaa acattgttga gagaagaaca aggtgctttg 720ccaattactt tatctggtaa tgctgatgca ttttggcaac aaagaccatt ggcttgttca 780ggtttgagag caggtttatt tcatccaact acaggttact ctttgccatt agctgttgca 840gttgctgata gattgtcagc tttggatgtt tttacatctg catcaatcca tcatgctatt 900actcattttg caagagaaag atggcaacaa caaggtttct ttagaatgtt gaacagaatg 960ttgtttttag caggtccagc tgattctaga tggagagtta tgcaaagatt ttatggtttg 1020ccagaagatt tgattgcaag attttacgct ggtaaattga ctttgacaga tagattgaga 1080attttatcag gtaaaccacc agttccagtt ttggctgcat tacaagctat tatgactaca 1140catagataa 1149<210> 34<211> 1809<212> DNA<213> Artificial<220><223> PbCarRA(Phycomyces blakesleeanus)基因的核苷酸序列<400> 34atgttgacat acatggaagt tcatttgtac ttcactttgc cagttttggc attgttggca 60tttttgtaca agccattttt cactacaaaa gatagattca aatacatttt cttgtgtaca 120gttgctttcg caactgcttc tccatgggat aactacatcg tttaccataa ggcatggtca 180tattgtccag aatgtgttac agctgttatt ggttacgttc cattggaaga atacatgttt 240ttcatcatca tgactttgat tactgttact tttacttctt tgacaatgag atggacttta 300

CN 10712 A

序　列　表

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ccatctttct ttattagacc agaaacacca gttttccaat ctgtttgtgt tagatacatt 360ccaattgttg gtttcttgac tattgctgca aaagcatggg cttcttcaat tccagattca 420catccatttt atggtgcatg tattttgtgg tatgtttgtc cagttttagc tttgttatgg 480attggttctg gtgaatatat gttgagaaga tggaaggcag ttttattttc aatcgctgtt 0ccaacaattt tcttgtgttg ggttgatcaa tacgcaattg ctagaggtac ttgggatatc 600tctagaagaa catcaactgg tatcatggtt ttgccatctt tgccattgga agaattcttg 660tttttcttgt tgatcgatac agttttggtt ttcgcatcat gtgctactga tagagcacat 720gctatcgttc atatctatat cacaccaatg aaccataata aggtttctac ttggtacatg 780gatttctttt atttgtgttg ggcatttttg caaactgatc aagctttatc tggtgaaaca 840ttatcagatt tggatgctac ttggagaatt ttgagagaag catctgcttc attctacaca 900gcatcttcag ttttctcttt tgaagctaga caagatttgg gtgttttgta cggtttttgt 960agagcaactg atgatttggc tgataacaac gatgtttctg ttccagatag aaagaaacaa 1020ttggaattag ttagaggttt cgttagacaa atgttcgatt caaagcatgg tcatccagat 1080attgattgga cacaatactc tggttcaatc ccagattctt ttattgctgc ttttagatct 1140tttactagat tgagagatgt tttggaaatt aaagctgttg aagaattgtt ggatggttac 1200acattcgatt tggaacaaag agaagttaaa aatgaagatg atttggttta ctactctgca 1260tgtgttgctt cttcagttgg tgaaatgtgt actagagttt taatggcttc agaaccaggt 1320ggtaatagaa caatgttgaa atggactgtt gaaagagcaa gagatatggg tttggctttg 1380caattgacaa acatcgcaag agatatcgtt actgattcta agcaattggg tagatcatac 1440gttccaagag attggttgac atctcaagaa tcagctttgt taaaagctgg taaagctaga 1500gaattaggtg acgaaagatt gagacaaatc gcattgaaga tggtttacac tgctgatgat 1560ttgaatttga tggcatctag agctattgat tacttaccac catcttcaag atgtggtgtt 1620agagctgcat gtaacgttta cacagctatc ggtgtttcat tgcataaagc aaatggttac 1680ccagatagag ctcatttgac aaagttggaa agaatgaagg ttacttttag atgtgtttat 1740ggttttagaa aaggtcatca aggtgttcaa ggtgaccgtg gtaaatctca agcttttact 1800gttatttga 1809<210> 35<211> 1161<212> DNA<213> Artificial<220><223> PagCrtY (Pantoea agglomerans)基因的核苷酸序列<400> 35atgccaagat atgatttgat tttggttggt gcaggtttgg ctaacggttt gatcgctttg 60agattgagac aacaaagacc atctttgaga atcttgttga tcgatgcaga aagagaacca 120ggtgctaatc atacttggtc atttcatgct gaagatttga ctgaaacaca acatagatgg 180attgcaccat tggttgttca tcattggcca ggttatgaag ttagattccc acaaagatct 240agatcattga actctggtta cttctgtgtt acttcagaaa gattcgttca agttattaga 300gatagattcg ctccagattt gttgttgaac acaagagttg caggtattgc ttctagaact 360

CN 10712 A

序　列　表

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gttacattag atgatggtag agttttggaa tcagatgctg ttattgatgg tagaggttat 420caaccagatg ctgcattgtg tatgggtttt caatcttttg ttggtcaaga atggcaatta 480tcagaaccac atggtttgac tgcaccaatt attatggatg ctacagttga tcaacaagca 0ggttacagat tcgtttactc tttgccattt tcagctgata ctttgttgat cgaagataca 600cattacattg ataatgcaac attggaaggt gacagagcta gacaaaatat tagagcatac 660gctgcacaac aaggttggag attggataga ttgttgagag aagaacaagg tgctttacca 720attactttga caggtgacgt tgctgcattt tggcaaaaac atgatttgcc atgttctggt 780ttaagagctg gtttgtttca tccaactaca ggttactcat taccattggc tgttgcatta 840gctgatagat tggctcaaat gcaaactttt acatctgaaa ctttgcatgc aacaattcaa 900caatttgcat cacaagcttg gcaacaacaa agatttttca gaatgttgaa cagaatgtta 960tttttggcag gtccagctga tcaaagatgg caagttatgc aaagatttta tggtttacca 1020gaaggtttga ttgcaagatt ttacgctggt aaattgactt tgccagatag attgagaatt 1080ttgtctggta aaccaccagt tccagtttta gctgcattgc aagctattat gacaccacat 1140agacaacaag caatgcaata a 1161<210> 36<211> 1755<212> DNA<213> Artificial<220><223> DsLCY( Dunaliella salina)基因的核苷酸序列<400> 36atgttacaaa cattgtcagg tagatctact tcattgttat cttcaccacc acaattgcca 60tctcaacatg tttactctgt taagtcaaca agaatctgtg gtgctgaatc tttacaatca 120ccacaagctg cattaggtac tagaacattg aatgtcacaa gatcaactac acatgcaaga 180gaagcttcta gagcaagaac tagagcacaa gctttgttac aaagaacacc agaaactcca 240tacttttcac caccaaaacc atctgttgat ggtccagttc aatattacta tagagaacca 300tcaccatggc caactcaaca agatgttcaa gttgcttatc atgatttgca aagacaacca 360gctgcagatt tgttagttgt tggttctggt ccatcaggtt tggcagttgc tgaaagagtt 420gctgcaggtg gtttttctgt ttgtgttatt gatttggatc catacgctcc aatgattcca 480aattatggtt gttgggttga tgaaatgcaa gctatgggtt tagaagaatg tttggaagtt 0gtttggccaa aggcaaaggt ttggttggat aacgataagt caggtgaaag atttttgaga 600agaccatacg gtagaatgga tagaccaatg ttgaagaaat tgttgttgca aaagtgtgct 660tctaacggtg ttacattttt gacttctaaa gtttcaggtg tttctcatgg tgacggtact 720tcaacagtta ctttgtctga tggtagaaca atgcaaggta ctatggtttt agatgctaca 780ggtcatgcaa gaaagttggt taagtacgat caagaattca atccaggtta ccaaggtgct 840tatggtatta ctgcagaagt tgaatctcat ccattcgaat tggatacaat gttgtttatg 900gattggagag atgaacatac tcattcaaat ccagttatga gagcttctaa ccaagcattg 960ccaacatttt tgtacgctat gccatacact aaaaataagg ttttcttgga agaaacatct 1020ttggttgcta gaccagcagt tggtttcgat actttgaagg aaagattgat ggcaagaatg 1080

CN 10712 A

序　列　表

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序　列　表

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序　列　表

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ttgcaattat tttggcaagc tattgcagct agataa 1236<210> 40<211> 1845<212> DNA<213> Artificial<220><223> McCarRP (Mucor circinelloides)基因的核苷酸序列<400> 40atgttgttga catacatgga agttcatttg tactacactt tgccagtttt aggtgttttg 60tcttggttat caagaccata ttacactgct acagatgcat tgaagtttaa attcttgact 120ttggttgctt ttactacagc ttctgcatgg gataactaca tcgtttacca taaggcttgg 180tcatattgtc caacttgtgt tacagcagtt attggttacg ttccattgga agaatacatg 240tttttcatca tcatgacttt gttgacagtt gcttttacaa atttggttat gagatggcat 300ttgcattctt tctttatcag accagaaact ccagttatgc aatcagtttt ggttagattg 360gttccaatca ctgctttgtt gatcacagct tacaaagcat ggcatttggc agttccaggt 420aaaccattgt tttatggttc ttgtatcttg tggtacgctt gtccagtttt ggcattgtta 480tggtttggtg ctggtgaata catgatgaga agaccattgg ctgttttagt ttcaatcgca 0ttgccaacat tgtttttatg ttgggttgat gttgttgcta ttggtgcagg tacttgggat 600atctctttgg ctacttcaac tggtaaattt gttgttccac atttgccagt tgaagaattc 660atgtttttcg cattgattaa tactgttttg gttttcggta catgtgctat cgatagaact 720atggcaatct tgcatttgtt taaaaataag tctccatacc aaagaccata ccaacattct 780aagtcatttt tgcatcaaat cttggaaatg acatgggctt tctgtttgcc agatcaagtt 840ttgcattctg atactttcca tgatttgtct gtttcatggg atatcttgag aaaggcttct 900aagtcattct acacagcttc agcagttttt ccaggtgacg ttagacaaga attgggtgtt 960ttatatgctt tttgtagagc aactgatgat ttgtgtgata atgaacaagt tccagttcaa 1020acaagaaagg aacaattgat cttgactcat caattcgttt ctgatttgtt cggtcaaaag 1080acttcagctc caacagcaat cgattgggat ttctacaacg atcaattgcc agcttcttgt 1140atctcagctt ttaaatcttt tacaagattg agacatgttt tagaagctgg tgcaattaaa 1200gaattgttgg atggttacaa gtgggatttg gaaagaagat ctatcagaga tcaagaagat 1260ttgagatact actcagcttg tgttgcatct tcagttggtg aaatgtgtac aagaatcatc 1320ttggctcatg cagataaacc agcttctaga caacaaactc aatggattat tcaaagagca 1380agagaaatgg gtttggtttt gcaatacaca aacatcgcta gagatatcgt tactgattca 1440gaagaattgg gtagatgtta cttaccacaa gattggttga ctgaaaagga agttgctttg 1500atccaaggtg gtttggcaag agaaatcggt gaagaaagat tgttgtcttt gtcacataga 1560ttgatctatc aagctgatga attgatggtt gttgcaaata agggtattga taaattgcca 1620tctcattgtc aaggtggtgt tagagctgca tgtaatgttt acgcttctat tggtacaaag 1680ttgaagtcat acaagcatca ttacccatct agagctcatg ttggtaactc aaagagagtt 1740gaaatcgcat tgttgtctgt ttacaatttg tacactgctc caattgcaac atcttcaact 1800acacattgta gacaaggtaa aatgagaaat ttgaatacta tttga 1845

CN 10712 A

序　列　表

38/45页

<210> 41<211> 1827<212> DNA<213> Artificial<220><223> BtCarRA(Blakesle trispora)基因的核苷酸序列<400> 41atgtcaattt tgacatactt ggaatttcat ttatactata ctttgccagt cttggctgct 60ttgtgttggt tgttgaaacc attccattca caacaagata atttgaaata taaattcttg 120atgttgatgg ctgcttcaac tgcttctata tgggataatt acattgttta tcatagggct 180tggtggtact gcccaacttg tgttgttgct gttattggtt atgttccatt ggaagaatac 240atgtttttta ttataatgac tttaatgact gtcgcatttt ctaattttgt catgagatgg 300cacttgcata cgttcttcat tagaccaaat acttcttgga aacaaacatt gttggttagg 360ttggttccag tttctgcttt attggctatt acttaccatg cttggcattt aactttgcca 420aataaatctt ctttttacgg ttcttgtatt ttgtggtacg cttgcccagt cttggcaatt 480ttgtggttgg gtgcaggtga atacatttta agaagacctg ttgcagtctt gttatcaatt 0gttattccat ctgtttattt gtgttgggca gatattgttg ctatttctgc tggtacatgg 600catatatctt tgagaacatc tacaggtaag atggtcgtcc cagacttgcc tgtcgaagaa 660tgtttgtttt ttactttgat aaacacagtt ttggtttttg ctacatgtgc tattgataga 720gctcaagcta tattacattt atacaaatct tctgttcaaa atcagaaccc taaacaggct 780atttctttgt ttcaacacgt caaggagttg gcatgggctt tctgtttgcc tgaccaaatg 840ttgaataatg aattgtttga cgatttaaca atttcttggg atattttaag aaaagcttca 900aagtcttttt acactgcttc tgctgtcttc ccatcttacg tcaggcaaga tttgggagtc 960ttgtacgctt tctgtagggc tacagacgac ttgtgtgacg atgaatcaaa atctgttcaa 1020gagagaaggg accagttgga cttgacaaga caattcgtta gagatttatt ttctcagaaa 1080acttcagctc caattgtcat tgattgggaa ttataccaaa atcaattacc tgcatcttgc 1140atatctgctt tcagagcatt tactagattg aggcatgttt tggaagttga tccagttgaa 1200gaattattgg acggatacaa gtgggacttg gagaggaggc ctattttgga cgaacaagac 1260ttggaagctt actctgcttg cgtcgcttct tctgtcggag agatgtgcac tagggtcatt 1320ttggctcaag atcaaaaaga aaatgatgct tggattattg acagagctag agaaatgggt 1380ttggttttac aatatgttaa tattgctaga gacattgtca ctgactcaga aacattgggt 1440aggtgctact tgcctcagca atggttgaga aaggaagaaa ctgaacaaat tcaacaagga 1500aatgctagat ctttaggtga ccaaagatta ttgggtttgt cattaaaatt ggtcggtaag 1560gcagatgcta ttatggttag agcaaagaag ggaattgata agttgccagc taattgtcaa 1620ggtggtgtca gggcagcttg tcaagtctat gctgctatag gttctgtttt gaagcaacaa 1680aagacaactt acccaacaag ggctcacttg aagggatctg aaagggctaa aattgcttta 1740ttgtctgttt acaacttgta ccagtctgaa gacaagcctg tcgctttgag gcaggctaga 1800aaaattaaat cttttttcgt tgattaa 1827<210> 42

CN 10712 A

序　列　表

39/45页

<211> 735<212> DNA<213> Artificial<220><223> BreCrtW (Brevundimonas sp. SD212 )基因的核苷酸序列<400> 42atgactgctg cagttgctga accaagaatt gttccaagac aaacttggat tggtttgaca 60ttagctggta tgattgttgc aggttggggt tctttgcatg tttacggtgt ttacttccat 120agatggggta cttcttcatt ggttattgtt ccagctattg ttgcagttca aacatggtta 180tctgttggtt tgtttattgt tgctcatgat gcaatgcatg gttcattagc tccaggtaga 240ccaagattga atgctgcagt tggtagattg acattaggtt tgtacgcagg ttttagattc 300gatagattga agactgctca tcatgcacat catgctgcac caggtacagc tgatgatcca 360gatttttatg ctccagcacc aagagcattt ttaccatggt tcttgaattt ctttagaact 420tactttggtt ggagagaaat ggctgttttg acagcattgg ttttgatcgc tttgttcggt 480ttgggtgcta gaccagcaaa tttgttaact ttttgggctg caccagcttt gttgtcagca 0ttgcaattgt ttactttcgg tacatggtta ccacatagac atacagatca accatttgct 600gatgcacatc atgctagatc ttcaggttac ggtccagttt tgtctttgtt gacttgtttc 660catttcggta gacatcatga acatcatttg acaccatgga gaccatggtg gagattgtgg 720cgtggtgaat cataa 735<210> 43<211> 1335<212> DNA<213> Artificial<220><223> CrBKT（Chlamydomonas reinhardtii）基因的核苷酸序列<400> 43atgggtccag gtattcaacc aacttctgct agaccatgtt caagaacaaa gcattctaga 60ttcgcattgt tagctgcagc tttgactgct agaagagtta agcaattcac taagcaattc 120agatctagaa gaatggctga agatatcttg aagttgtggc aaagacaata tcatttgcca 180agagaagatt cagataagag aacattgaga gaaagagttc atttgtacag accaccaaga 240tctgatttgg gtggtattgc tgttgcagtt actgttattg ctttgtgggc aacattgttc 300gtttacggtt tgtggttcgt taagttgcca tgggctttaa aagttggtga aactgcaaca 360tcatgggcta ctattgcagc tgttttcttt tctttggaat tcttgtacac aggtttgttt 420attactacac atgatgcaat gcatggtact attgctttga gaaacagaag attgaacgat 480ttcttgggtc aattggcaat ttcattgtat gcttggttcg attactctgt tttgcataga 0aagcattggg aacatcataa ccatacaggt gaaccaagag ttgatccaga ttttcataga 600ggtaatccaa atttggcagt ttggtttgct caattcatgg tttcttacat gactttgtct 660caattcttga agatcgcagt ttggtcaaat ttgttattgt tagctggtgc accattagct 720aatcaattgt tgtttatgac agcagctcca atcttgtctg cttttagatt gttttattac 780

CN 10712 A

序　列　表

40/45页

ggtacttacg ttccacatca tccagaaaaa ggtcatactg gtgcaatgcc atggcaagtt 840tctagaacat cttcagcttc aagattgcaa tcatttttga catgttacca tttcgatttg 900cattgggaac atcatagatg gccatacgct ccatggtggg aattaccaaa atgtagacaa 960attgcaagag gtgcagcttt ggctccaggt ccattaccag ttccagcagc tgcagctgca 1020actgctgcaa cagctgcagc tgcagctgca gctactggtt caccagctcc agcatcaaga 1080gctggttctg catcttcagc ttcagcagct gcatctggtt ttggttcagg tcattcaggt 1140tctgttgctg cacaaccatt gtcttcatta ccattgttat ctgaaggtgt taaaggtttg 1200gttgaaggtg caatggaatt agttgctggt ggttcttcat ctggtggtgg tggtgaaggt 1260ggtaaaccag gtgctggtga acatggtttg ttacaaagac aaagacaatt agcaccagtt 1320ggtgttatgg cttaa 1335<210> 44<211> 963<212> DNA<213> Artificial<220><223> HpBKT(Haematococcus pluvialis)基因的核苷酸序列<400> 44atgcatgttg cttcagcatt gatggttgaa caaaaaggtt ctgaagctgc agcttcttca 60ccagatgttt taagagcttg ggcaactcaa tatcatatgc catcagaatc ttcagatgca 120gctagaccag cattgaaaca tgcttacaaa ccaccagctt ctgatgcaaa gggtatcact 180atggctttga caatcatcgg tacttggaca gcagttttct tgcatgctat cttccaaatc 240agattgccaa cttcaatgga tcaattgcat tggttaccag tttctgaagc tacagcacaa 300ttgttaggtg gttcttcatc tttgttgcat atcgcagctg tttttattgt tttggaattc 360ttgtacactg gtttgtttat tactacacat gatgcaatgc atggtacaat cgctttgaga 420catagacaat tgaacgattt gttgggtaac atctgtatct cattgtacgc ttggttcgat 480tactctatgt tgcatagaaa gcattgggaa catcataacc atactggtga agttggtaaa 0gatccagatt ttcataaagg taatccaggt ttagttccat ggtttgcttc ttttatgtca 600tcttacatgt ctttgtggca atttgctaga ttagcatggt gggctgttgt tatgcaaatg 660ttgggtgcac caatggctaa tttgttagtt tttatggcag ctgcaccaat cttgtcagct 720tttagattgt tttatttcgg tacatactta ccacataagc cagaaccagg tccagctgca 780ggttcacaag ttatggcatg gtttagagct aaaacttcag aagcatctga tgttatgtca 840tttttgacat gttaccattt tgatttgcat tgggaacatc atagatggcc atttgctcca 900tggtggcaat tgccacattg tagaagatta tctggtagag gtttggttcc agctttagca 960taa 963<210> 45<211> 882<212> DNA<213> Artificial<220>

CN 10712 A

序　列　表

41/45页

<223> HpCrtZ(Haematococcus pluvialis)基因的核苷酸序列<400> 45atgttgtcta agttgcaatc tatctcagtt aaggctagaa gagttgaatt agcaagagat 60atcactagac caaaggtttg tttgcatgct caaagatgtt cattggttag attaagagtt 120gctgcaccac aaactgaaga agctgttggt acacaacaag ctgcaggtgc aggtgacgaa 180cattctgcag atgttgcttt gcaacaatta gatagagcaa ttgctgaaag aagagctaga 240agaaagagag aacaattgtc ataccaagct gcagctattg cagcttctat tggtgtttca 300ggtatcgcaa tcttcgctac ttacttgaga ttcgctatgc atatgacagt tggtggtgct 360gttccatggg gtgaagttgc aggtactttg ttattggttg ttggtggtgc attgggtatg 420gaaatgtatg caagatacgc tcataaagca atttggcatg aatctccatt gggttggtta 480ttgcataaat cacatcatac tccaagaaca ggtccattcg aagctaacga tttgttcgca 0attattaacg gtttgccagc tatgttgttg tgtacattcg gtttctggtt gccaaatgtt 600ttaggtactg cttgttttgg tgcaggtttg ggtatcacat tgtacggtat ggcctacatg 660tttgttcatg atggtttagt tcatagaaga tttccaactg gtccaattgc tggtttgcca 720tacatgaaga gattgacagt tgcacatcaa ttgcatcatt ctggtaaata cggtggtgct 780ccatggggca tgtttttggg tccacaagaa ttacaacata ttccaggtgc agctgaagaa 840gttgaaagat tggttttgga attggattgg tcaaaaagat aa 882<210> 46<211> 528<212> DNA<213> Artificial<220><223> PaCrtZ(Pantoea agglomerans)基因的核苷酸序列<400> 46atgttgtgga tctggaacgc tttgatcgtt ttggttactg ttattggtat ggaaatcaca 60gctgcattgg cacatagata tattatgcat ggttggggtt ggggttggca tttgtctcat 120catgaaccac ataagggttg gttcgaagtt aacgatttgt acgctgttgt tttcgctgca 180ttgtctatct tgttgatata tttgggttca actggtgttt ggccattgca atggattggt 240gctggtatga cattgtacgg tttgttgtac ttcatcgttc atgatggttt ggttcatcaa 300agatggcctt ttagatacgt tccaagaaga ggttatttga gaagattgta catggctcat 360agaatgcatc atgcagttag aggtaaagaa ggttgtgttt cttttggttt cttgtacgct 420ccaccattgt caaagttgca agcaactttg agagaaagac atggtgttaa aagaggtgct 480gcaagagatc aaagatcagt tgaaagagat gctccacctg gtaaataa 528<210> 47<211> 4<212> DNA<213> Artificial<220><223> HpCrtZ-V( Haematococcus pluvialis)基因的核苷酸序列

CN 10712 A

序　列　表

42/45页

<400> 47atggcattgt ctaaaatgca accaatgggt gttcaaggta gaagaattgc tttaccaaga 60gatatttcta gaccacaaat gccatcacaa agacaaccat tggctcaagt tttaagagtt 120gctgcaccag atactgaagc agttgaatct tcaagagttc aaccatctgt tggtgctggt 180aatcaacaaa cagcagatga tgctttgcaa caattggata gatcaatcgc tttgagaaga 240gcacaaagaa agagagaaca attgacttac caagctgcag ctattgcagc ttcagttggt 300atctcttcat tggcaatctt ggctacttac acaagatttt ctatgcatat cacttcagat 360ggtgaaatgc catggtctga tttgttaggt acattgtcat tagttgcagg tggtgctttt 420ggtatggaaa tgtatgcaag atacgctcat aaagcattgt ggcatgaatc tccattaggt 480tggttgttac ataaatcaca tcatactcca agaacaggtc cattcgaagc taacgatttg 0ttcgcaatta ttaacggttt accagctatg ttgttatgtt attacggttt ttgggaacct 600ggtatggttg gtgcttcttg ttttggtgca ggtttgggta tcactttgta cggtatggct 660tacatgttca tccatgatgg tttggttcat agaagatttc caactggtcc aatctctgat 720ttgccataca tgaagagatt gacagttgca catcaaatcc atcattctgg taaatacgat 780ggtgctccat ggggcatgtt tttgggtcca caagaattag aagctatttc tggtgcaaca 840gaagaattgg atagattagt tgctgatttg gattggtcaa aaagaagagt ttaa 4<210> 48<211> 930<212> DNA<213> Artificial<220><223> AaCBFD(Adonis aestivalis CBFD) 基因的核苷酸序列<400> 48atgttggcat caatggctgc agctacttct atcacatctt catctagagc ttttagattt 60catagaggtt tgtttttaaa cactaagcca aacatcagaa acccaccatg tttgttattt 120tcaccattgt tgatgagaaa tagaaatggt gctggtgcat tgactatctg tttcgttgca 180gaaagaacaa gaggtagaga aatcccacaa atcgaagaag atgaaaagaa tatggatgaa 240gttttcgaac aaatgaactc agcttctgtt agagttgcag aaaagttggc tagaaagaaa 300tctgaaagat tcacttattt gatcgcagct ttgatgtcat ctatgggtat cacatcaatg 360gctatcttgt ctgtttacta cagattttca tggcaaatgg aaggtggtga cattccagtt 420actgaaatgt tgggtacatt tgcattatct gttggtgcag ctgttggtat ggaattttgg 480gctagatggg cacatagagc tttgtggcat gcttcattat ggcatatgca tgaatctcat 0cataaaccaa gagaaggtcc attcgaattg aacgatgttt tcgcaattat taacgctgtt 600ccagctatcg cattgttgaa cttcggtttc tttcataaag gtttgattcc aggtttatgt 660tttggtgcag gtttgggtat tactgttttt ggtatggctt acatgtttgt tcatgatggt 720ttagttcata gaagatttcc agttggtcca atcgctaacg ttccatactt cagaaaggtt 780gcagctgcac atcaaatcca tcatactgat aagttccaag gtgttccata cggtttgttt 840ttaggtccaa aagaattgga agaagttggt ggtaatgaag aattagaaaa agaaattgaa 900agaagaatta aaagaatgaa tgctttataa 930

CN 10712 A

序　列　表

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<210> 49<211> 2241<212> DNA<213> Artificial<220><223> XdCrtR( Xanthophyllomyces dendrorhous)基因的核苷酸序列<400> 49atggctactt tgtctgattt ggttattttg ttgttgggtg ctttgttggc attgggtttc 60tacaataagg atagattgtt gggttcttca tcttcatctg catctactac atcaggttca 120tctgctgcaa ctgctaatgg ttctaaacca acatactcaa acggtaacgg taacgctttt 180aaaggtgacc caagagattt cgttgcaaga atgaaggatc aaaagaaaag attggctgtt 240ttctatggtt ctcaaactgg tacagcagaa gaatacgcta caagaatcgc taaggaagca 300aagtcaagat tcggtgtttc atctttggtt tgtgatatcg aagaatacga tttcgaaaag 360ttggatcaag ttccagaaga ttgtgctatt gttttctgta tggcaactta cggtgaaggt 420gaaccaacag ataacgctgt tcaattcatt gaaatgatct ctcaagatga tccagaattt 480tctgaaggtt caactttgga tggtttgaag tacgttgttt tcggtttggg taataagaca 0tacgaacaat acaatgttgt tggtagacaa ttggatgcaa gattaactgc tttgggtgca 600acaagagttg gtgaaagagg tgaaggtgac gatgataagt ctatggaaga agattatttg 660gcttggaaag atgatatgtt tgctgcatta gctactacat tgtcttttga agaaggtgca 720tcaggtgaaa ctccagattt tgttgttaca gaagttccaa accatccaat cgaaaaggtt 780ttccagggtg aattgtcatc tagagcttta ttgggttcta aaggtgttca tgatgctaaa 840aatccatatg cttcaccagt tttagcatgt agagaattgt ttactggtgg tgacagaaac 900tgtatccatt tggaattcga tatcacaggt tctggtatca cttaccaaac aggtgaccat 960gttgcagttt ggccatcaaa cccagatgtt gaagttgaaa gattgttggc tgttttaggt 1020ttgacttctc cagaaaagag aagaatgatc atccaagttg tttcattgga tccaactttg 1080gcaaaagttc catttccaac accaactaca tacgatgctg tttttagaca ttacttggat 1140atctctgctg ttgcatcaag acaaacttta gctgttttgg caaaatatgc tccatctgaa 1200caagctgcag aattcttgac tagattgggt acagataaac aagcatacca tacagaagtt 1260gtcggtggtc atttgagatt ggctgaagtt ttacaattgg ctgctggtaa tgatattact 1320gttatgccaa cagctgaaaa cactacagtt tggaacatcc cattcgatca tgttgtttct 1380gatgtttcaa gattgcaacc aagattctac tctatctcat cttcaccaaa gttgcatcca 1440aactcaatcc atgttactgc tgttattttg aagtacgaat ctcaagctac agatagacat 1500ccagcaagat gggttttcgg tttgggtact aactacttat tgaacgttaa gcaagctgca 1560aacaacgaaa ctacaccaat gatctctgat ggtcaagatg atgttccaga acatgtttca 1620gctccaaaat atacattaga aggtccaaga ggttcataca agcatgatga tcaattgttt 1680aaagttccaa tccatgttag aagatctact tttagattgc caacatcacc aaagatccca 1740gttattatga ttggtccagg tactggtgtt gctcctttta gaggttttat tcaagaaaga 1800attgctttgg caagaagatc tattgctaaa aatggtccag atgctttagc agattgggct 1860ccaatatatt tgttttatgg ttcaagagat gaacaagatt tcttgtatgc agaagaatgg 1920

CN 10712 A

序　列　表

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ccagcatacg aagctgaatt gcagggtaaa ttcaaaatcc atgttgcttt ttctagatca 1980ggtccaagaa aaccagatgg ttctaagatc tatgttcaag atttgttgtg ggatcaaaag 2040gaagttatta aatctgctat cgttgaaaag agagcatcag tttacatttg tggtgacggt 2100agaaacatgt caaaggatgt tgaacaaaag ttggctgcaa tgttggctga atctaaaaat 2160ggttcagctg cagttgaagg tgctgcagag gttaagtctt tgaaggaaag atcaagattg 2220ttgatggatg tttggtctta a 2241<210> 50<211> 1674<212> DNA<213> Artificial<220><223> XdCrtS(Xanthophyllomyces dendrorhous)基因的核苷酸序列<400> 50atgtttattt tggttttgtt aacaggtgca ttgggtttag ctgcattttc ttgggcttca 60attgctttct tttctttgta tttggctcca agaagatctt cattgtacaa tttgcaaggt 120ccaaaccata caaactactt cactggtaat ttcttggata tcttgtctgc aagaacaggt 180gaagaacatg ctaagtacag agaaaagtac ggttctactt tgagatttgc tggtattgct 240ggtgcaccag ttttgaactc aactgatcca aaggttttta atcatgttat gaaagaagca 300tatgattacc caaaacctgg tatggctgca agagttttga gaattgctac aggtgacggt 360gttgttactg ctgaaggtga agcacataag agacatagaa gaatcatgat cccatcttta 420tcagctcaag ctgttaagtc tatggttcca attttcttgg aaaagggtat ggaattggtt 480gataagatga tggaagatgc tgcagaaaaa gatatggctg ttggtgaatc agcaggtgaa 0aagaaagcta caagattgga aactgaaggt gttgatgtta aagattgggt tggtagagca 600acattggatg ttatggcttt ggcaggtttc gattacaagt ctgattcatt gcaaaataag 660actaacgaat tgtacgttgc ttttgttggt ttaacagatg gttttgcacc aactttggat 720tcttttaaag ctatcatgtg ggatttcgtt ccatacttca gaacaatgaa gagaagacat 780gaaatcccat tgactcaagg tttagcagtt tcaagaagag ttggtattga attgatggaa 840caaaagaaac aagctgtttt aggttctgct tcagatcaag cagttgataa gaaagatgtt 900caaggtagag atatcttgtc tttgttagtt agagctaaca ttgctgcaaa tttgccagaa 960tctcaaaagt tgtcagatga agaagttttg gcacaaatct ctaatttgtt gttcgctggt 1020tacgaaactt cttcaacagt tttgacttgg atgttccata gattgtcaga agataaggct 1080gttcaggata agttgagaga agaaatctgt caaatcgata cagatatgcc aactttggat 1140gaattgaacg cattgccata tttggaagct ttcgttaagg aatctttgag attggatcca 1200ccatcaccat acgcaaacag agaatgtttg aaggatgaag atttcatccc attggctgaa 1260ccagttattg gtagagatgg ttctgttatt aatgaagtta gaatcacaaa gggtactatg 1320gttatgttgc cattgtttaa tatcaacaga tcaaagttta tatatggtga agatgctgaa 1380gaattcagac cagaaagatg gttggaagat gttacagatt ctttgaactc aatcgaagca 1440ccatacggtc atcaagcttc ttttatttca ggtccaagag catgttttgg ttggagattt 1500gctgttgcag aaatgaaggc atttttgttc gttacattga gaagagttca attcgaacca 1560

CN 10712 A

序　列　表

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说　明　书　附　图

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图1

图2

图3

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图4

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图5

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图6

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图7

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