凝胶成像:
1、 打开电源开关,然后打开仪器主开关,电脑开机。
2、 打开Image lab新建一个协议(有直接打开右边的EB协议) 3、 放置凝胶 4、 运行协议
5、 保存(直接保存是scn格式可以编辑,导出成发布是保存成jpg格式)
Note:无滤光片是蛋白成像,滤光片1是EB成像,滤光片2是校准
曝光程度,一般是强条带,若想看弱的转换成弱条带,再想弱则选择手工调节时间 高显示是如果过饱和显示红色
控制面板上的按钮一般不用,TRANS/UV门没有关好闪烁。
脉冲电泳:
配置:电泳槽,涌动泵,制冷机,主机和参数设置仪器 开机:主机后面开关------参数设置仪器侧面的开关-------pump switch开关-------制冷机的开关 关机:相反
电泳槽:buffer必须是去离子水,一般跑一次电泳换一次buffer,如果电泳时间超过24h需
要暂停,20s后打开电泳槽盖更换buffer,再开始。
电泳Buffer:
TAE: 1X,大片段,迁移率快
TBE: 0.5X,小片段或>2M的大片段,迁移率慢 涌动泵:一般调成70度左右不变(70ml/min流动速度)
制冷机:设置14°,可上下调整,但一般不变。还可显示当前温度。
参数设置:角度恒定,120°,先西南方向60°然后是东南方向60°,转头方向时片段大小不同所用时间不同,设置时间长分辨率较高。假设片段大约为200kb,时间有起始时间5s和终止时间40s,场强为6V/cm运行约20h左右,中间只有暂停没有stop。 场强: <4M: 6V/cm 一般100kb—500kb 约20h >4M: 2-4V/cm
最大6M约30—50h
Blook:分多个程序,先运行第一个如设置起始时间2s和终止时间8s,场强6v/cm和运行时间10h,再运行第二个如设置起始时间5s和终止时间12s,场强6v/cm和运行时间10h. 组合按钮的使用按仪器操作。 放buffer和清洗:
1、 先打开进水口将管子里的buffer放出来
2、 打开涌动机连接在电泳槽上的短管,转动涌动机上转子小角度使之流动将buffer
排出
3、 释放电泳槽内的buffer 样本准备:
大肠杆菌涂板培养,刮菌到悬浮液中,菌液和胶1:1混匀,要预热避免凝固,用枪注入胶孔板,取出放入溶菌酶液,清洗加入蛋白酶k,再清洗然后进行酶切,切完取出胶块贴在梳子宽部分,先贴的可多加点缓冲液避免风干,要适量避免滑出,将梳子放进胶版再灌胶。
电击仪:
打开总开关,先自检(不动)然后自动进入home画面,按向下按钮进入预设程序,enter进入,选择E.Coil,进入看到闪烁的P就可以准备电击 电击杯0.2cm ,金属壳对准金属突起处。
一般使用指数波,瞬间达到高压然后自动放电,多用于细菌 方波多用于动物,细胞壁很厚的细菌
天平:
1、 打开on键,长按关机
2、 第一次预热1h以后每次打开预热30min 3、 一般自动调平,设置自检,12点进行校准 4、 O/T进行清零,长按关机
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