临床和实验医学杂志２０１１年８月 第１０卷 第１５期 ・１１３７・ 自￥Ｕ Ｉ１￣瘤标志物复合质控血清稳定性的研究 钟志敏 王维 莫云丹 周小棉（广州市第一人民医院检验科 广东 广州 ５１０１８０） 【摘要】 目的研制一种临床检测中可用于化学发光法检测质量控制的肿瘤标志物复合质控血清。方法 从 ２００７—２００９年，对液性质控物血清原料的准备、制备、一般性状、和稳定性进行探讨和研究，并与美国伯一乐质控品进行 比较。结果经３年验证，用日常检测血清作原料、乙烯乙二醇（ＥＧ）作稳定剂制备高低两水平的液性质控物，性质较稳 定，重复性好。结论 自制肿瘤标志物质控血清的时间稳定性良好，且取材于日常检测标本，成本低，稳定剂价格低廉， 适合广大的基层医院使用。 【关键词】 肿瘤标志物液性质控物 室内质控 乙烯乙二醇血清 Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｓｅｌｆ—ｍａｄｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｅｒｕｍ ｆｏｒ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｕｌｎｏｒ ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ．ＺＨＯＮＧ Ｚｈｉ—ｍｉｎ，ＷＡＮＧ Ｗｅｉ．ＭＯ Ｙｕｎ—ｄａｎ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＣｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， ｅＦｉｒｓｔＰｅｏｐｌｅ＇ｓＨｏｓｐｉｔａｌｉｎ Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ５１０１８０，Ｃｈｉｎａ． 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｉｆｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ａｎｄ ｐｒｅｐａｒｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｅｍｉ ｆｏｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｍａｒｋｅｒｓ ｗｉｔｈ ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ｍｅｔｈｏｄ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｇｅｎｅｒｌ ｃｈａａｒａｃｔｅｒｓ ａｎｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ｍａｔｅｒｉｌ ｆａｏｒ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｄｕｒｉｎｇ ２００７ ｔｏ ２００９ ｗｅｒｅ ｅｘｐｌｏｒｅｄ ａｎｄ ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｄｕｒｉｎｇ ｔｅｓｔｉｎｇ ｆｏｒ ３ ｙｅａｒｓ．ｔｈｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄａｉｌｙ ｕｓｅｄ ｓｅＦｕｍ ａｓ ｒａｗ ｍａｔｅｒｉｌ ａｎｄ ｅｔａｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ ａｓ ｓｔｂｉａｌｉｚｅｒ ｉｎ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｇｈ ａｎｄ ｌｏｗ ｔｗｏ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｕｂｓｔｎｃｅ ｗｉａｔｈ ｆｌｕｉｄ ｎａｔｕｒｅ；ｔｈｅ ｎａｔｕｒｅ ｏｆ ｌｉｑｕｉｄ ｍａｔｅｒｉａｌ ｉｓ ｓｔａｂｌｅ ｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉａｂｌｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｃｕｒｒｅｎｔ ｒｅｓｕｌｔｓ，ｔｈｅ ｎａｔｕｒｅ ｏｆ ｓｅｌｆ—ｍａｄｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｏｌｒ ｓｅｒｎｍ ｏｒ ｆｔｕｍｏｒ ｍａｒｋｅｒｓ ｉｓ ｓｔｂｌａｅ，ｉｔ ｉｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｄａｉｌｙ ｔｅｓｔｉｎｇ ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ；ａｎｄ ｔｈｅ ｓｔａｂｉ— ｌｉｚｅｒ ｉｓ ｅａｓｙ ｔｏ ｂｕｙ ｗｉｔｈ ｌｏｗ ｐｒｉｃｅ，ＳＯ ｉｔ ｉｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｍａｊｏｒｉｔｙ ｏｆ ｂａｓｌ ｈｏｓｐｉａｔｌａｓ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ｔｕｍｏｒ ｍａｒｋｅｒｓ；Ｌｉｑｕｉｄ ｍａｔｅｒｉｌａ ｏｆｒ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ；Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｄ；Ｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｇｌｙｃｏｌ；Ｓｅｒｕｍ 质控物在临床检验科的质量控制工作中起监测和 １．２试剂 稳定剂Ｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｇｌｙｃｏｌ为国产分析纯试 评价实验室日常检测工作的精密度和准确性的重要作 剂 。本实验室质量控制采用美国伯一乐（Ｂｉｏ—Ｒａｄ） 用。目前临床实验室肿瘤标志物的定量分析多用化学 公司进口定值冻于质控物。测试试剂采用德国罗氏诊 或电化学发光技术，具有特异、灵敏、准确的特点…，检 断有限公司，相关批号：前列腺特异性抗原（ＰＳＡ） 测使用的质控物多由国外生产，如由美国伯一乐质控品 １５１６６４０２；神经元特异性烯醇化酶（ＮＳＥ）１５１２７００２；Ｂ一 生产“Ｌｙｐｈｏｃｈｅｋ Ｔｕｍｏｒ Ｍａｒｋｅｒ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｌｅｖｅｌ １＆Ｌｅｖｅｌ ２” 绒毛膜促性腺激素（Ｂ—ＨＣＧ）８２７７２５；甲胎蛋白（ＡＦＰ） 冻干质控物，于４℃恒温冰箱中保存，常温复溶使用。 长，便于运输，但存在复溶后需尽快使用、需准确加入定 １５０００２０２ １５０００２０３ ＣＡ１９９ １８０６５４０３、 ＣＡ１５３ 冻干质控物的主要优点是在４０￣Ｃ的条件下储存时间 １８２０７１０２；癌胚抗原（ＣＥＡ）１５０４９５０１、１５０４９５０２、ＣＡ１２５ １８１２８７０３、ＣＡ一７２４ １５４２３６０２；ＣＹ２—１ １ １５４６０５０１。 量的重蒸水、复溶后的质控物常存在一定的浊度以及价 １．３液性质控物的制备以ＢＩＯ—ＲＡＤ公司生产的 Ｍａｒｋｅｒ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｌｅｖｅｌ １＆Ｌｅｖｅｌ ２”冻干 格昂贵等缺点，了其广泛推广使用，不适合在基层 “Ｌｙｐｈｏｃｈｅｋ Ｔｕｍｏｒ医院内广泛开展。国外有一些学者开始进行液性质控 质控物中ＡＦＰ、ＣＥＡ、ＣＡ１２５、ＣＡ１５３及ＣＡ１９９的浓度作 物稳定性的研究 Ｊ，国内也已有人报道自制质控血清在 为制备质控血清的参考标准（见表１）。 临床生化检验和临床放射免疫检验中得到良好的验证 和使用 ，但在化学发光免疫方面则较少报道。因此 研制一种性质稳定、价格低廉的液体质控血清用于化学 发光免疫有其重要的现实意义，能减轻基层医疗单位的 经济压力，使质量控制工作真正落到实处。 本实验从２００７—２００９年，历经３年，利用日常工作 中检测剩余标本，选用乙烯乙二醇（ＥＧ） 为稳定剂来 制备液性质控物，制成的质控血清具有与血清的性状一 表１ ＢＩＯ—ＲＡＤ公司冻干质控血清的参考标准 （ｎｇ／ｍ１） 致、不需复溶、成本低廉等优点，可作为肿瘤相关标志物 室内质控体系的质控物，现报告如下。 １材料与方法 １．１ 仪器 德国Ｒｏｃｈｅ Ｅ１７０电化学发光仪；美国 根据每日检验结果，除黄疸、乳糜血、溶血和乙型肝 Ｂｅｃｋｍａｎ ｃｏｕｌｔｅｒ ＡＣＣＥＳＳ２全自动微粒子化学发光免疫 炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）（＋）标本外，收集当日送检标本的 分析系统。 剩余阳性血清，冷冻保存（一８０％）。当血清收集到一定 课题支持：广东省科学技术厅２Ｏ１ＯＢｏ８０７Ｏ２０１８；广州市卫生局医药 卫生科技重点项目２０１１０２Ａ２１２０２８ 量时，于４￣Ｃ缓慢解冻、混匀，过滤以去除血清中胶冻状 的聚集物，再行ＨＢｓＡｇ、丙型肝炎抗体和人类免疫缺陷 ・１１３８・ ￣ｕｒｎａｌ￣ｉｎｗａｌ ａｎｄＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＭｅｄｗｉ￣Ｖｏ１．１０，Ｎｏ．１５ Ａｕｇ．２０１１ 病毒（ＨＩＶ）抗体检测，结果阴性后，于一２０￣Ｃ储存２周， 性期间，以美国Ｂｉｏ—Ｒａｄ定值冻干质控物为对照。 再于４℃静置解冻２４ ｈ，不能摇动。小心取出容器中上 １．５统计学处理利用ＳＰＳＳ １６．０软件对数据进行处 层１／２液体到另外的１个容器中，将用于低水平液性质 理，采用配对ｔ检验，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。 控物的制备，在容器中剩下的血清将用于高水平液性质 ２结果 控物的制备。将两容器中的血清分别混匀，冷冻储存 自制液性质控物与ＢＩＯ—ＲＡＤ冻干质控物的标准 （一２０℃）１周后，静置于４￣Ｃ解冻２４ ｈ，小心移去各容器 差和变异系数（ＣＶ）的对比，自制液性质控物的浓度水 中３０％的上清液，用等量３０％ＥＧ补入，制成３０％ＥＧ 平接近ＢＩＯ—ＲＡＤ冻干质控物的浓度范围；它的标准差 液性质控物，最后制备成高低两水平的３０％ＥＧ液性质 和变异系数接近ＢＩＯ—ＲＡＤ冻干质控物的实际测量值 控物。将血清以２５０ 为单位分装到微量离心管管中， 的标准差和变异系数。各自制液性质控物分别与ＢＩＯ 于一２０℃储存。 ＲＡＤ质控值作配对ｔ检验，两者间差异无统计学意义 —１．４观察指标每日随机取两种浓度水平的质控物各 （Ｐ＞０．０５），表明两者之间相关性好，提示自制质控物 １份，取出室温静置３０ ａｒｉｎ，平衡至室温后，并与日常标 的稳定性良好。结果见表２、表３。 本一同上机检测，记录数据。在分析液性质控物的稳定 表２自制质控值与ＢＩＯ—ＲＡＤ实测值高值的对｝ｋ（ｎｇ／ ） 注 ＡＦＰ有两个批号：１５０００２０２，１５０００２０３；ＣＥＡ有两个批号１５０４９５０１，１５０４￣０２。 ３讨论 质浓度会产生由上至下的梯度现象，设计了制备高、低 室内质量控制是临床检验结果准确性的重要保证， 两水平质控物原料的方法；主要原料液体血清取材于日 是决定常规检测结果能否发出报告的依据。质量控制 常检测标本，容易获得。液态质控物所使用的３０％ 血清是实现室内质量控制的基本条件，其稳定性对质控 ＥＧ，其商品价格低廉，且具有高渗和抗氧化性质，可防 还能够降低自制液态 结果至关重要，直接影响到失控的检出，质控品不稳定 止细菌生长和某些被测物的氧化，减小了冻融对血清的影响。在收集血 会引起假失控。液体质控血清与冻干质控血清相比避 质控物的凝固点，免了分装、冻干和复溶等操作过程所引起的误差，稳定 清过程中，在３次以内冻融情况下，可以认为血清冻融 ８ 。。。另外，以ＢＩＯ— 性好。液体质控血清基质尽量做到与人血清一致，还能 对肿瘤标记物的影响并不明显＿ＲＡＤ冻干质控物作为参照，自制液性质控物的标准差 减少基质效应，深受广大检验工作者欢迎。 （下转第ｌ１４１页） 本实验利用冷冻的液体血清在缓慢解冻后，其中物 临床和实验医学杂志２０１１年８月 第１０卷 第１５期 ・ｌ１４ｌ・ 细胞的丢失，因此细胞指数较低，始终达不到满意 常规法在滴片后需将玻片放置室温３—７ ｄ或置于 Ｃ左右烤箱烘烤２～３ ｈ，自然冷却后才能行Ｇ显带处 的效果。事实上迄今还不能实现细胞的完全同步化，保 ７０￣持细胞同步的时间也很短，短暂的低温孵育也可使细胞 理。我室采用过氧化氢溶液来老化处理标本后立即用 同步 Ｊ。如果标本中高分辨染色体质量高，其数 胰蛋白酶消化显带，不仅带型清晰，染色片成功率 量并不需要太多。因外周血细胞培养至４８ ｈ有一个分 达１００％，而且缩短了实验时间，可使诊断的时间提前３ 裂高峰，同时降低有丝抑制剂秋水仙胺的浓度及缩 ～４ ｄ。以上改进的实验方法不需昂贵的试剂，操作简 短其作用时间可获得较长染色体。为此，我们设计和实 便易于掌握，重复性好，且快速省时，能及时满足临床诊 验了细胞培养４６ ｈ后，用低温休克和低浓度的秋水仙 断需求，为患者提供方便，适合推广于临床检测应用。胺双重同步处理细胞的方法，结果所获得的细胞指 数与常规组相近，但相中的早期染色体数量明显增 参考文献 ［１］ 李凡，刘永茂．基础医学实验教程［Ｍ］．北京：高等教育出版社， ２００４：１６７—１７０． 多，达到高分辨染色体效果，同时标本中还兼有较多的 中期相，可兼顾常规的Ｇ带分析，完全能满足于分 析应用。 ［２］ 黄修海，单长民．医学遗传学实验指导［Ｍ］．北京：科学出版社， ２００８：２７—３３． 制备高分辨染色体的另一技术关键是染色体的分 散问题。由于早期染色体较长，常交叉卷曲，不易分散， 给显带和识别带来了很大的困难。有多人 。 采用如冰 箱过夜、增加固定次数、改变固定液中甲醇和冰醋酸的 比例，高位滴片（吸管距离载玻片７０ ｃｍ以上）后立即用 ［３］左仅．医学遗传学实验指导［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，２００８：２５ —２８． ［４］ ［英］．ｗ．比克莫尔，Ｊ．克雷格．房德兴，译．染色体带：基因组的 图形［Ｍ］．北京：科学出版社，２０００：３２０—３２８． ［５］［美］．Ｄ．Ｌ斯佩克特，Ｒ．Ｄ．戈德曼，Ｌ．Ａ．莱因万德．细胞实验指 南［Ｍ］．北京：科学出版社，２００５：９３—９７． ［６］ 冯立新，肖桂芝，岳雪玲，等．低温对人外周血淋巴细胞的同步化 作用［Ｊ］．承德医学院学报，２００５，２２（２）：９６—９８． ［７］ＤｅｎｇＷ，Ｔｓａｏ ＳＷ，Ｌｕｃａｓ ＪＮ，ｅｔ ａ１．Ａ ｎｅｗｍｅｔｈｏｄｆｏｒｉｍｐｒｏｖｉｎｇｍｅｔａ． 微火烤干玻片等方法来改善染色体的分散，但这些方法 有的较繁琐，有的较难掌握。本次实验中，Ａ、Ｂ组按常 规采用冰湿玻片高位滴片后过火的方法制片，发现冰片 ｐｈａｓｅ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ｓｐｒｅａｄｉｎｇ［Ｊ］．Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ａ，２００３，５１（１）：４６—５１． ［８］ 吴子钊，程李睛，穆灵敏，等．人类外周血染色体Ｇ显带的改良方 滴片虽可使细胞较好的黏附在玻片上，但染色体分散不 良，而高位滴片细胞容易溅失；实验组改用热滴片法效 果更佳，不仅明显改进了染色体的分散铺展程度，减少 了重叠，而且细胞染色体不易丢失，相形态完整。 法［Ｊ］．中国组织工程研究与临床康复，２００７，１１（１１）：２１８５— ２１８６． （收稿日期：２０１１—０５—１８） （上接第１１３８页） ［３］何思春，王利君，焦鑫．质控血清冷冻保存对电化学发光测定甲状 和变异系数接近ＢＩＯ—ＲＡＤ冻干质控物的实际测量值 的标准差和变异系数，该实验从２００７～２００９年，历经３ 年，与ＢＩＯ—ＲＡＤ质控值作配对ｔ检验，差异均无统计 学意义（Ｐ＞０．０５），表明两者之间相关性好，由此可看 腺激素的影响［Ｊ］．检验医学，２０１０，２５（４）：３２１—３２２． ［４］ 赵令君．自制高、中、低浓度质控血清在甲状腺激素放免分析质控 中的应用［Ｊ］．长春医学，２００６，４（２）：ｌ１—１３． ［５］姜新华，赵燕飞，吴小明，等．自制雌二醇性激素室内免疫质控制 品及其性能评价［Ｊ］．检验医学，２０１０，２５（５），４０３—４０４． 出其自制质控物的稳定性良好。二者的ＣＶ变化也在 １０％以内，据国外文献报道，质控的标准是１５％［１１ ３。 综上所述，自制液性质控物取材于１３常检测标本， 无需成本，稳定剂价格低廉，容易购得，该自制质控品能 精确地显示仪器系统出现的情况，适合广大的基层医院 使用，不失为商品化质控品的良好替代物。 参考文献 ［１］ 叶应妩，王毓三，申子瑜，等．全国临床检验操作规程［Ｍ］．３版． 南京：东南大学出版社，２００６：５７４—５７６． ［２］ＧｏｉＧ，Ｂｅｓｏ￣ｉＭ，Ｂａｉｒａｔｉ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｓｔａｂｌｅｌｉｑｕｉｄｍａｔｅｄ． ａｌ ｆｏｒ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｑｕａＩｉｔｙ ｃｏｎｔｏｌｒ ｆｏｒ ｌｙｓｏｓｏｍａｌ ｅｎｚｙｍｅｓ ｉｎ ｐｌａｓｍａ． ［６］ 马德均，刘福成．稳定的液体质控血清制备法［Ｊ］．临床检验杂志， １９８８，６（３）：１６９． ［７］ 段勇，王玉明，赵滢，等．临床化学检验的液性质控血清的制备研 究［Ｊ］．昆明医学院学报，２００３，２４（２）：２４—２７． ［８］ 高云朝，顾建英，陆汉魁，等．血清反复冻融对肿瘤标志物浓度的 影响［Ｊ］．中国实验诊断学，２００７，１１（１）：１１９—１２０． ［９］张景霞，周红超，徐德忠，等．血清反复冻融对ＨＢｓＡｇ和抗ＨＢｓ抗 体检测的影响［Ｊ］．医学争鸣，２００１，２２（１２）：１０８４． ［１Ｏ］施根林，何海明，林国英．血清冻融前后ＨＢｅＡｇ和抗一ＨＢｅ检测 ．比较［Ｊ］．临床军医杂志，２００４，３２（３）：６７． ［１ １］Ｗｉｌｓｏｎ ＪＦ．Ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｒａｎｇｅｓ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ ｆｏｒ ｐｓｙ－ ｃｈｏａｃｆｉｖｅ ｄｒｕｇｓｉｎ ｓｏｒｕｒｉｌ［Ｊ］．Ｔｈｅｒ Ｄｒｕｇ Ｍｏｎｉｔ，２００３，２５（２）：２４３— ２４７． Ａｓｓａｙ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅｓ ｏｆｌｙｓｏｓｏｍａｌ ｏ，ｉｓｄｎ ｉｎ ｐｌａｓｍａ，Ｉ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ，１９９２，３０（１０）：５９５—５９８． （收稿Ｅｔ期：２０１１—０５—１６）
