科技论坛 ・97・ 能力验证菌落总数测定结果不确定度的评定 刘洋 (牡丹江友搏药业有限责任公司,黑龙江牡丹江157000) 摘要:目的:通过实验对茵落的总数的不确定度进行判定。方法:参照我国食品安全的相关规定和能力验证的相关技术对结果进行 判定,在对茵落总数进行判定与计算时采取合成的方法。结果:通过实验判定出茵落的总数的不确定度以及扩展后的不确定度。结论:本 次实验的测量数值具有科学性,在对能力验证的样品进行不确定度的测评时可以使用这种方法,与本次实验条件相符的茵落总数判定都 能使用这种方法。 关键词:能力验证;茵落总数;不确定度评定 在对某些实验项目的不确定度进行评定时要注意其测量数值的分 646—2006《移液器检定规程》的规定,其容量允许误差分别是±0.01 散胜以及与测量结果存在联系的固定参数。如果想要保持测量数据的 和±0.006,B类评定,按均匀分布,它们的标准不确定度分别是u 完整性,要给出两方面的数据,一方面是最佳的估算结果,另一方面是 (vx)=O.Ol ̄3=0.005774,u(V2)=o.oo6m/3=0.003464。本实验取第3个 测量值的不确定度。按照关于实验室的能力验证的相关规定,一般在检 稀释级(即l0—3涞报告结果,即取1 mL至9 mL共操作了3次,所 、/3 ̄.0057742 测方法有明确的要求时,有时实验的用户也会对实验有具体的要求并 以,稀释倍数产生的标准不确定度为uB 且在规范中已经给出了窄限,检测报告中应当显示出实验结果的不确 0.0034642)=0.01 166。相对标准不确定度u =1/(1+9)×u Q 定度的数值。 1材料与方法 001166。 由于每次检测各平板上接种稀释液的体积均为1 mL,使用1 mL 1.1材料与仪器。能力验证需要的药品、平板计数琼脂、生化f生培养 无菌吸头移液器),属B类评定,按均匀分布,加样引入的不确定度 箱,培养箱的温度要控制在0—60摄氏度,还需要立式蒸汽压力型灭菌 为:uB(v' ̄--O.Ol/,/3=0.005774,相对标准不确定度是u m=O. 设备。 1.2方法 005774/1=0.005774。 合成相对标准不确定度为: =1.2.1检测依据。食品中微生物学能力验证计划参试指导书, 4uJ.t(r)"+"irma(D)"+tqtrtl(K)"+tqtt ̄(V G B 4789.2—20lO《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数 l_o 0O96O6 测定》。 实验测得菌落总数对数平均值为lg x=5.2488,则检测结果的合成 1.2.2实验过程。在无菌的环境下打开西林瓶,将3mL的稀释溶液 加人到西林瓶中溶解,稀释溶液一共有40mL。等待溶解完成后,将溶解 不确定度为:鞠 i —吣 05042 的溶液倒人无菌瓶中,剩余的溶液不要丢弃,将其用来对西林瓶的内壁 取置信概率为95%,包含因子k=2,扩展不确定U=ku =2× 进行清洗,将清洗后的溶液在回收进西林瓶中,最终西林瓶中的溶液即 05042=0.1008。 为本次实验需要进行检测的药品。将检测药品使用无菌吸头来吸取 0.本实验菌落总数的结果表示为(5.2488±O,lOO ̄,k=2,取反对数得 lmL,顺着管壁注人无菌试管中,无菌试管中原有9mL的溶液,将两种 溶液摇晃均匀,制成混合溶液,得到样品为1:10(10 ),使用同样的操作 取值因司为140605~223666cfu・mL- 。最终本实验室能力验证样品 (14—2.2)X 10s efu・mL-I,包含因子k=2,或菌落 方式,再制成另一种稀释样品,按照1O倍递增的方法进行稀释,将每个 的菌落总数应报告为:lmL的样品都 无菌的平吼中。 总数估计值在140000~220000 efu・m 之间。 2结果 3讨论 一般测量不确定度的地点为理化性的实验室,虽然相关专家已经 告。 提出了测量不确定度的实验要求,但是在具体的实验以及检测工作中, 2.2数学模型。Y=K*x/V 并没有落实下来。通过本次实验可以有效地对自邑力验证进行检测,本次 其中,样品菌落的总数为Y,稀释倍数记为K,在检测稀释度的平 的实验中,为了避免实验样品中的琼脂的表面有以弥漫的生长方式生 板上检测的聚落数量记为x,在—定的稀释度下的样品的体积记为V。 长出的菌落,因此在琼脂的表面覆盖了一层培养基,另外还进行了直接 2.3判定。由于重复10次检测的菌落总数结果相差较大,因此对 倾注法作为对比陛的实验。在琼脂的外部的培养基呈固体状时,对平板 根据—定的培养条件进行培养。结合实验结果来观测这两种 检测结果取对数后,再计算检测结果对数值的样本标准偏差。按A类 进行翻转,评定,根据贝塞尔公式,得到检测结果对数值的样本标准偏差。 对比实验可以发现,两种实验的实验结果相差不多,因此本次的实验效 , -’ _ ’.^r 2.1报告规则。选取菌落数在30—300 efu之间的稀释度进行报 果还是比较令人满意的。 在对菌落的总数进行判定时,很多实验研究人员都重视发散性的 问题,一些检测人员认为菌落发散f生主要是由于菌落在培养皿中的分 布范围不集中,比较分散,使对菌落的检测结果存在差异,也有实验人 0.01230 员将标准物质作为测试的样品,提升了实验使用的样品的额稳定性以 、,辩 及均匀性,在这种实验条件下,平板中的菌落计数的数值是产生较大的 发散f生的主要原因。对微生物进行检测与一般的检测不同,具有极大的 特殊性,发散洼是—个重要影响因素,化学物 一 吨沁奶 分散性。当菌落的总数达到了不同的数量级时,差异更大。主要是由于 该不确定度来源于用50 mL量筒量取40 mL稀释液将样品溶解 微生物并不是静止不动的,会在培养皿中发生拮抗、互生的反应。 定容至40 mL。依据JJG196--2006{常用玻璃量器检定规程》,50 mL 参考文献 量筒容量允差为±0.5 mL,属B类评定。按均匀分布,标准不确定度 [1 培海,王玉兰,郑家利,王学军进口瓶装饮用水中茵落总数不确定 为u舡 n5,\/,3:O.28868,相对标准不确定度u u y40= 度的评定叨冲国卫生检验杂志,2014(7). 0.007217。 [2]岁源,吴晓军,曹俊,徐沛麟.食品检验中茵落总数的不确定度评定叨. 该不确定度来源于用1 mL无菌吸头吸取不同稀释级溶液1 mL 江苏卫生保健,2013(6). 至9 mL灭菌生理盐水的稀释过程,所采用的量器分别是1 mL无菌 [3调婕,姚羚羚,瘳惠青农村饮用水茵落总数测量不确定度的评定 .医 吸头(移液器)和1一lOmL瓶口分液器,根据国家检定规程JJG 学动物防制,2014(7). ’. .…