科技论坛 ・９７・ 能力验证菌落总数测定结果不确定度的评定 刘洋 （牡丹江友搏药业有限责任公司，黑龙江牡丹江１５７０００） 摘要：目的：通过实验对茵落的总数的不确定度进行判定。方法：参照我国食品安全的相关规定和能力验证的相关技术对结果进行 判定，在对茵落总数进行判定与计算时采取合成的方法。结果：通过实验判定出茵落的总数的不确定度以及扩展后的不确定度。结论：本 次实验的测量数值具有科学性，在对能力验证的样品进行不确定度的测评时可以使用这种方法，与本次实验条件相符的茵落总数判定都 能使用这种方法。 关键词：能力验证；茵落总数；不确定度评定 在对某些实验项目的不确定度进行评定时要注意其测量数值的分 ６４６—２００６《移液器检定规程》的规定，其容量允许误差分别是±０．０１ 散胜以及与测量结果存在联系的固定参数。如果想要保持测量数据的 和±０．００６，Ｂ类评定，按均匀分布，它们的标准不确定度分别是ｕ 完整性，要给出两方面的数据，一方面是最佳的估算结果，另一方面是 （ｖｘ）＝Ｏ．Ｏｌ￣３＝０．００５７７４，ｕ（Ｖ２）＝ｏ．ｏｏ６ｍ／３＝０．００３４６４。本实验取第３个 测量值的不确定度。按照关于实验室的能力验证的相关规定，一般在检 稀释级（即ｌ０—３涞报告结果，即取１ ｍＬ至９ ｍＬ共操作了３次，所 、／３￣．００５７７４２ 测方法有明确的要求时，有时实验的用户也会对实验有具体的要求并 以，稀释倍数产生的标准不确定度为ｕＢ 且在规范中已经给出了窄限，检测报告中应当显示出实验结果的不确 ０．００３４６４２）＝０．０１ １６６。相对标准不确定度ｕ ＝１／（１＋９）×ｕ Ｑ 定度的数值。 １材料与方法 ００１１６６。 由于每次检测各平板上接种稀释液的体积均为１ ｍＬ，使用１ ｍＬ １．１材料与仪器。能力验证需要的药品、平板计数琼脂、生化ｆ生培养 无菌吸头移液器），属Ｂ类评定，按均匀分布，加样引入的不确定度 箱，培养箱的温度要控制在０—６０摄氏度，还需要立式蒸汽压力型灭菌 为：ｕＢ（ｖ＇￣－－Ｏ．Ｏｌ／，／３＝０．００５７７４，相对标准不确定度是ｕ ｍ＝Ｏ． 设备。 １．２方法 ００５７７４／１＝０．００５７７４。 合成相对标准不确定度为： ＝１．２．１检测依据。食品中微生物学能力验证计划参试指导书， ４ｕＪ．ｔ（ｒ）＂＋＂ｉｒｍａ（Ｄ）＂＋ｔｑｔｒｔｌ（Ｋ）＂＋ｔｑｔｔ￣（Ｖ Ｇ Ｂ ４７８９．２—２０ｌＯ《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数 ｌ＿ｏ ０Ｏ９６Ｏ６ 测定》。 实验测得菌落总数对数平均值为ｌｇ ｘ＝５．２４８８，则检测结果的合成 １．２．２实验过程。在无菌的环境下打开西林瓶，将３ｍＬ的稀释溶液 加人到西林瓶中溶解，稀释溶液一共有４０ｍＬ。等待溶解完成后，将溶解 不确定度为：鞠 ｉ —吣 ０５０４２ 的溶液倒人无菌瓶中，剩余的溶液不要丢弃，将其用来对西林瓶的内壁 取置信概率为９５％，包含因子ｋ＝２，扩展不确定Ｕ＝ｋｕ ＝２× 进行清洗，将清洗后的溶液在回收进西林瓶中，最终西林瓶中的溶液即 ０５０４２＝０．１００８。 为本次实验需要进行检测的药品。将检测药品使用无菌吸头来吸取 ０．本实验菌落总数的结果表示为（５．２４８８±Ｏ，ｌＯＯ￣，ｋ＝２，取反对数得 ｌｍＬ，顺着管壁注人无菌试管中，无菌试管中原有９ｍＬ的溶液，将两种 溶液摇晃均匀，制成混合溶液，得到样品为１：１０（１０ ），使用同样的操作 取值因司为１４０６０５～２２３６６６ｃｆｕ・ｍＬ－ 。最终本实验室能力验证样品 （１４—２．２）Ｘ １０ｓ ｅｆｕ・ｍＬ－Ｉ，包含因子ｋ＝２，或菌落 方式，再制成另一种稀释样品，按照１Ｏ倍递增的方法进行稀释，将每个 的菌落总数应报告为：ｌｍＬ的样品都 无菌的平吼中。 总数估计值在１４００００～２２００００ ｅｆｕ・ｍ 之间。 ２结果 ３讨论 一般测量不确定度的地点为理化性的实验室，虽然相关专家已经 告。 提出了测量不确定度的实验要求，但是在具体的实验以及检测工作中， ２．２数学模型。Ｙ＝Ｋ＊ｘ／Ｖ 并没有落实下来。通过本次实验可以有效地对自邑力验证进行检测，本次 其中，样品菌落的总数为Ｙ，稀释倍数记为Ｋ，在检测稀释度的平 的实验中，为了避免实验样品中的琼脂的表面有以弥漫的生长方式生 板上检测的聚落数量记为ｘ，在—定的稀释度下的样品的体积记为Ｖ。 长出的菌落，因此在琼脂的表面覆盖了一层培养基，另外还进行了直接 ２．３判定。由于重复１０次检测的菌落总数结果相差较大，因此对 倾注法作为对比陛的实验。在琼脂的外部的培养基呈固体状时，对平板 根据—定的培养条件进行培养。结合实验结果来观测这两种 检测结果取对数后，再计算检测结果对数值的样本标准偏差。按Ａ类 进行翻转，评定，根据贝塞尔公式，得到检测结果对数值的样本标准偏差。 对比实验可以发现，两种实验的实验结果相差不多，因此本次的实验效 ， －’ ＿ ’．＾ｒ ２．１报告规则。选取菌落数在３０—３００ ｅｆｕ之间的稀释度进行报 果还是比较令人满意的。 在对菌落的总数进行判定时，很多实验研究人员都重视发散性的 问题，一些检测人员认为菌落发散ｆ生主要是由于菌落在培养皿中的分 布范围不集中，比较分散，使对菌落的检测结果存在差异，也有实验人 ０．０１２３０ 员将标准物质作为测试的样品，提升了实验使用的样品的额稳定性以 、，辩 及均匀性，在这种实验条件下，平板中的菌落计数的数值是产生较大的 发散ｆ生的主要原因。对微生物进行检测与一般的检测不同，具有极大的 特殊性，发散洼是—个重要影响因素，化学物 一 吨沁奶 分散性。当菌落的总数达到了不同的数量级时，差异更大。主要是由于 该不确定度来源于用５０ ｍＬ量筒量取４０ ｍＬ稀释液将样品溶解 微生物并不是静止不动的，会在培养皿中发生拮抗、互生的反应。 定容至４０ ｍＬ。依据ＪＪＧ１９６－－２００６｛常用玻璃量器检定规程》，５０ ｍＬ 参考文献 量筒容量允差为±０．５ ｍＬ，属Ｂ类评定。按均匀分布，标准不确定度 ［１ 培海，王玉兰，郑家利，王学军进口瓶装饮用水中茵落总数不确定 为ｕ舡 ｎ５，＼／，３：Ｏ．２８８６８，相对标准不确定度ｕ ｕ ｙ４０＝ 度的评定叨冲国卫生检验杂志，２０１４（７）． ０．００７２１７。 ［２］岁源，吴晓军，曹俊，徐沛麟．食品检验中茵落总数的不确定度评定叨． 该不确定度来源于用１ ｍＬ无菌吸头吸取不同稀释级溶液１ ｍＬ 江苏卫生保健，２０１３（６）． 至９ ｍＬ灭菌生理盐水的稀释过程，所采用的量器分别是１ ｍＬ无菌 ［３调婕，姚羚羚，瘳惠青农村饮用水茵落总数测量不确定度的评定 ．医 吸头（移液器）和１一ｌＯｍＬ瓶口分液器，根据国家检定规程ＪＪＧ 学动物防制，２０１４（７）． ’． ．…
