维普资讯 http://www.cqvip.com ・４６・ 杂交水稻（ＨＹＢＲＩＤＲＩＣＥ＂），２００２，１７（５）：４６—５０ 利用微卫星ＤＮＡ标记进行杂交水稻 种子纯度鉴定的研究 詹庆才 （湖南省水稻研究所，湖南长沙摘４１０１２５） 要：利用微卫星分子标记，对湖南目前推广的６个杂交稻组合及其亲奉之间的多态性进行 研究 在已筛 ｌ 选的１７８对引物中、有５２对能在一个或多个组合中显，Ｊ；稳定的多态性，杂种表现为父母本互补带型。小同组合 问多态性的比例具有差异：用表现多态性的『蛳对引物分别对掺假的威优４６和金优２０７进行纯度鉴定、都能有 效地将掺入组合中的假种子区分开：该方法具有准确可靠、多态性高、稳定性好、易于操作的特点： 关键词：杂交水稻；微卫星标记；纯度鉴定 中图分类号：Ｑ３３９．３；Ｑ９４３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００５ ３９５６（２００２）０５ ０Ｏ４６ ０５ 杂交水稻的推广对大幅度提高我国的粮食产量 起了巨大的推动作用，但由于种子纯度问题给农户 稻组合是目前湖南省大面积推广的主要组合： １．２实验方法 造成严重减产的事件也常有发生 目前普遍采用的 田间种植鉴定方法，一方面由于环境条件的变化，可 能影响纯度鉴定的准确性，另一方面，由于田间鉴定 需要时间长，给种子的销售带来诸多不便，有的甚至 １．２．１ ＤＮＡ的提取ＤＮＡ的提取参照Ｖｉｃｔｏｒ等 介绍的方法，略有改进 取５ ｎ１ｇ叶片剪碎后，加入 ４ＪＤ ０．２５ ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＯＨ，放入沸水中３Ｏ ｓ，然后加入 ４ＪＤ ｕｌ ０．２５ ｍｏｌ／Ｌ ＨＣ１，２０ ０．５ ｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ和０．２５％ 要等到第２年接近播种时才能销售。ＤＮＡ分子标记 以遗传物质为基础，具有稳定可靠的特点，应用它进 行杂交水稻种子纯度鉴定的研究，正在多个实验室 （Ｖ／Ｖ）ＩＧＥＥＭ，－ＣＡ６３０的混合液，放入沸水中２ ｍｉｎ。 此ＤＮＡ样品１ 可直接用于ＰＣＲ，本研究所有引物 筛选均采用本方法提取的ＤＮＡ。该ＤＮＡ样品在４ｑｃ 的冰箱中可保存３０ ｄ左右 １．２．２ ＰＣＲ反应和电泳ＰＣＲ反应在１Ｏ 的反应 体积中进行，包含１／ｍｌｏｌ引物，１ ＤＮＡ样品，０．２单 位：￣ｎｐｌｉＴａｑ Ｇｏｌｄ ＤＮＡ聚合酶，１０ ｎｇ的模板ＤＮＡ， ０．２５％（ｖ／ｖ）ＩＧＥＰＡＬ—ＣＡ６３０，１ ｔｄｌＯ倍ＰｃＲ反应液 （１００ ｍｍｏｌ Ｔｒｉｓ—ＨＣ１，ｐＨ８．３，１５ ｍｍｏｌ ＭｇＣｌ２，５００ ｍｍｏｌ 开展。其中研究得较多的是利用ＲＡＰＤ标记进行杂 交水稻种子纯度鉴定：杨剑波等 在３０对引物中 找到了６对引物能够区分杂交水稻汕优６３及其亲 本：陈洪等 ！从３００对ＲＡＰＤ引物中，筛选到一对 引物Ｐ１８可用于汕优６３的纯度鉴定。钱前等 用 Ｒ Ｄ对真假杂交水稻Ⅱ优６３组合进行了鉴定。杨 蜀岚 从２５０个随机引物中筛选出了一个引物能将 以培矮６４ｓ为母本的两系杂交稻及亲本区分开 除 在水稻上的研究外，玉米 、棉花。、油菜 、西瓜 等作物上都有报道。但目前采用的ＲＡＪ）Ｄ分子标记 对ＤＮＡ纯度要求较高，重复性差；而ＲＦＬＰ和ＡＦＬＰ 标记技术要求高，成本昂贵，很难在实践中推广应 用：建立一套准确、快速、稳定、简单的杂交种子纯 度鉴定方法，对于我国主要粮食和经济作物杂交种 子的推广应用具有重大意义。 １材料和方法 １．１ 实验材料 ＫＣ１，质量分数为０．０１％的明胶）。扩增反应条件为： ９４ｑｃ变性４ ｍｉｎ，然后是９４ｑｃ ３０ Ｓ，５５ｑｃ ３０ Ｓ，７２ｑｃ １ ｍｉｎ，进行４５个循环，最后７２％延伸７ ｍｉｎ。反应采 用９６孔ＰＣＲ盘在ＰＥ公司９７００型基因扩增仪上进 行。扩增产物在质量浓度为４％的Ｎｕｓｉｅｖｅ ３：１琼脂 糖凝胶进行电泳分离，溴化乙锭染色，紫外光下观察 拍照。 ２实验结果和分析 ２．１ 微卫星引物的多态性 以分布于染色体１—１２的１７８对微卫星引物对上 述６个杂交稻组合进行了筛选，有５２对引物能分别 收稿日期：２００２ Ｏ１ ３０ 水稻不育系新香Ａ，Ｖ２０Ａ，金２３Ａ及相应的保持 系新香Ｂ，Ｖ２０Ｂ，金．２３Ｂ；恢复系Ｒ８０，密阳４６，Ｒ４０２， 先恢２０７，９２—１９８，明恢６３；杂种一代新香优８Ｏ，威优 ４６，威优４０２，金优２０７，金优１９８，金优６３ 上述杂交 基金项目：湖南省科委、计委资助项日 作者简介：詹庆才（１９６２ ），男，湖南桃江人、副研究员，硕 Ｊ 维普资讯 http://www.cqvip.com 詹庆才：利用微卫星ＤＮＡ标记进行杂交水稻种子纯度鉴定的研究 ・４７・ 在１～６个组合的供试材料中显示稳定的多态性，占 ２．２用于鉴定杂交稻种的特异多态性引物 在能产生多态性的引物中，有的引物只在某一 特定的组合中产生多态性，如ＲＭ２６７只有杂交组合 威优４６的父母本具有多态性，因而只有威优４６产 生双亲互补的带型（图１），这种引物在进行杂交水 检测引物的２９．２％。一般来说，在父母本之间存在 多态性的引物，在其杂种一代具有双亲的互补带型。 在新香优８ｏ、金优２０７、金优１９８、金优６３、威优４Ｏ２ 和威优４６等６个组合中表现多态性的引物的数目 分别是２０对、２ｌ对、２２对、２５对、３２对和３７对，威优 稻的纯度鉴定时，除了能将混入杂交种中的不育系、 保持系及恢复系区别外，混入该组合的其它杂交稻 组合与金优和新香优组合相比，父母本之间具有较 多的多态性，可能与不同来源的不育系和恢复系的 亲缘关系的远近有关。只有９对引物在所有６个Ｆ 及其亲本中均不能扩增出带。但如果改变ＰＣｔｌ反 组合的种子也能区分开。同样，也筛选得到了新香 优８Ｏ和威优４Ｏ２的特异多态性引物。在进行杂交 种子纯度鉴定时，我们尽可能筛选这种引物。如果 筛选更多的引物，我们同样可能找到其它组合的特 异多态性引物。 应条件或用纯的ＤＮＡ进行试验，这９对引物也能将 ６个组合全部或部分扩增出带。 图ｌ 引物ＲＭ２６７对水稻杂种Ｆ．及不育系、保持系和恢复系的扩增结果 Ｆｉｇ １．Ｔｈｅ ａｍｐｌｉｔｉｅｄ ｒｅｓｕ］ｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｅｓｔｅｄ Ｆ．ｈｙｂｒｉｄｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｐａｒｅｎｔｓ ｂｙ Ｐｒｉｍｅｒ Ｒ】Ⅵ２６７． Ｍ：１００ ｂｐＤＮＡ分子量标准；１：新香Ａ；２：新香Ｂ；３：新香优８０（Ｆ１）；４：Ｒ８０；５：Ｖ２ＯＡ；６：Ｖ２ＯＢ；７：威优４６（Ｆ１）；８：密阳４６；９：威优 ４Ｏ２（Ｆ１）；１０：Ｒ４０２；１１：金２３Ａ；１２：金２３Ｂ；１３：金优２０７；１４：先恢２０７；１５：金优１９８（Ｆ１）；１６：９２，１９８；１７：金优６３（Ｆ１）；１８：明恢６３。 图２～４同此。Ｍ：１００ ｂｐ ＤＮＡｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔ ｓｔａｎｄａｒｄ；１：ＸｉｎｘｉａｎｇＡ；２：Ｘｉｎｘｉａｎｇ Ｂ；３：Ｘｉｎｘｉａｎｇ３，ｏｕ ８０（Ｆ１）；４：Ｒ８０；５：Ｖ２ＯＡ￣ ６：Ｖ２０Ｂ；７：Ｗｅｉｙｏｕ ４６（Ｆ１）；８：Ｍｉｌｙａｎｇ４６；９：Ｗｅｉｙｏｕ ４０２（Ｆ１）；１０：Ｒ４０２；１１：Ｊｉｎ ２３Ａ；１２：Ｊｉｎ ２３Ｂ；１３：Ｊｉｎｙｏｕ ２０７（Ｆ１）；１４： Ｙｄａｎｈｕｉ ２０７；１５：Ｊｉｎｙｏｕ １９８（Ｆ１）；１６：９２．１９８；１７：Ｊｉｎｙｏｕ ６３（Ｆ１）；１８：Ｍｉｎｇｈｕｉ ６３．Ｔｈｅ ｓａｎ ｉｎ Ｆｉｇ ２～４． ２．３用于鉴定杂交种的多态性引物 威优４Ｏ２和金优２０７具有相同的多态性，而新香优 ８０、金优１９８和金优６３则不表现出多态性（图３）。 在我们的研究中，发现大多数引物能在２个以 上的杂交稻组合中产生多态性，有的引物在不同的 组合中扩增的带型在分子量上存在差异，如引物 ＲＭ３４０在新香优８０中产生１００ ｂｐ和１６０ ｂｐ的两条 带，在威优４６中则产生１６０，１８０和２００ ｂｐ ３种多态， 在金优２０７、金优１９８、金优６３和威优４０２的扩增产 物中，双亲和Ｆ 之间则没有多态性（图２）。有的引 物在２个以上的杂交组合中表现的带的数量和分子 量都完全相同，具有多态性的引物中以这类居多，如 引物ＲＭ３２８对上述６个组合进行扩增时，威优４６、 有个别引物在６个组合中都能扩增出父母本互补带 型，如以引物ＲＭ２０８对上述６个组合进行扩增时， 由于６个组合的父母本的扩增带都具有差异，６个 杂种Ｆ 都具有双亲互补的带型（图４）。杂交稻种子 不纯主要是制种所用的不育系中混杂有保持系或收 获过程中混杂了恢复系，上述引物都能将混入Ｆ．中 的不育系、保持系和恢复系区分开，在找不到特异引 物的情况下，上述引物在进行杂交水稻纯度鉴定时 仍然是有用的。 维普资讯 http://www.cqvip.com ・４８・ 杂交水稻（Ｈ｝ＢＲ／Ｄ ＰＡＣＥ），２００２，１７（５）２００２年９月（ ｆ）．，２００２） 图２引物１￣Ｍ３４０对水稻杂种Ｆ。及小育系、保持系干ｕ恢复系的扩增结果 Ｆｉｇ ２．Ｔｈｅ ａｍｐｌｉｉｆｅｄ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｅｓｔｅｄ Ｆｌ ｈｙｂｒｉｄｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｐａｒｅｎｔｓ ｂ ｙ Ｐｒｉｍｅｒ ＲＭ３４０ Ｍ １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ Ｒ ９ １ ０ ｌ ｌ ｌ ２ Ｉ ３ ｌ ４ ｌ ５ ｌ ６ ｌ ７ ｌ Ｒ 图３引物ＲＭ３２８对水稻杂种 及不育系、保持系和恢复系的扩增结果 Ｆｉｇ ３．Ｔｈｅ ａｍｐｌｉｉｅｄ ｒｆｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｅｓｔｅｄ Ｆ１ ｈｙｂｒｉｄｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｐａｒｅｎｔｓ ｂｙ Ｐｒｉｍｅｒ ＲＭ３２８ Ｍ 图４引物ＲＭ２０８对水稻杂种Ｆ。及不育系、保持系和恢复系的扩增结果 Ｆｉｇ ４．Ｔｈｅ ａｍｐｌｉｉｅｄ ｒｆｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｅｓｔｅｄ ＦＩ ｈ ｖｂｒｉｄｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｐａｒｅｎｔｓ ’Ｐｒｉｍｅｒ ＲＭ２０８ 维普资讯 http://www.cqvip.com 詹庆才：利用微卫星ＤＮＡ标记进行杂交水稻种子纯度坚定的研究 ２ ４利用微卫星ＤＮＡ标记技术进行杂交水稻种子 纯度鉴定的可靠性 ・４９・ 对威优４６的鉴定结果，很明显，１０，１１，１２，１６，２０号 是假杂种，且１６，２０号是掺人的恢复系种子 图６ 是用ＰｕＭ３４１对金优２０７的检测结果，５，９，１０，１２，ｌ８， 为了证明本方法进行杂交水稻种子纯瞍鉴定结 果的可靠性，我们在威优４６和金优２０７种子中，人 为掺人本组合的小育系、保持系和恢复系种子，以及 其它杂交稻组合的种子：为了防止原样本本身含 杂，影响结果的准确性，我们将原样本种子和掺人的 种子进行了单粒编号，住测试者４ 知编号『勺容的情 况下．对种子进干亍纯度检测。图５是用引物ＲＭ２６７ １９号是似杂种，且９，１０，１２号是恢复系种子，１０号并 不是设计者有意掺人的杂，但可以肯定，１０号是原 样本本身含的杂一我ｆ『Ｊ同时用多态性引物ＲＭ２０８ 和ＲＭ３２８对上述人为掺杂的种子进行了检测，得到 的结果完全一致。由此看出，本方法能有效地把掺 人组合中的不育系，保持系和恢复系区别出来。 Ｍ １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ ｌＯ １ １ １ ２ １ ３ １４ ｌ５ １６ １ ７ １ ８ １９ ２０ ２１ ２２ ２３ ２４ 图５ 引物ＲＭ２６７对威优４６（Ｆ．）人为掺杂种子进行纯度鉴定的结果 Ｆｉｇ ５．Ｐ ｔｙ ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｄｕｌｔｅｒａｔｅｄ ｓｅｅｄｓ ｏｆ Ｗｅｉｙｏｕ ４６（Ｆ１）ｂｙ Ｐｒｉｍｅｒ ＲＭ２６７． １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １０ １ １ ｔ ２ １ ３ １４ １５ １６ １ ７ １ ８ １９ ２０ ２１ ２２ ２３ ２４～ｌ 图６以引物ＲＭ３４１对金优２０７（Ｆ ）人为掺杂种子纯度鉴定结果 Ｆｉｇ ６．Ｐｕｒｉｔｙ ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｄｕｌｔｅｒａｔｅｄ ｓｅｅｄｓ ｏｆ Ｊｉｎｙｏｕ ２０７（Ｆ１）ｂｙ Ｐｒｉｍｅｒ ＲＭ３４１． ！．５利用微卫星ＤＮＡ标记技术鉴别杂交稻组合真 实性 一一区别出来： 为了既不影响实验的准确性，又尽可能缩短反 ２．６用于杂交种子纯度鉴定的ＰＣＲ程序筛选 本研究结果表明，６个被鉴定的杂交稻组合中． 有３个组合，只需使用一对引物就能将它与其它５ 个组合及３个不育系和６个恢复系区分开一另外３ 个组合也只需使用２对引物就能将它与其余５个组 应时间，我们用９４℃预变性４ ｍｉｎ后，９４℃变性１５ ｓ， ５５℃结合１５ Ｓ，７２℃延伸３０ Ｓ，扩增３５个循环．７２℃ 延伸７ ｍｉｎ的ＰＣＲ程序代替引物筛选时的ＰＣＲ程 序，从而使ＰＣＲ反应过程从原来的２００ ｍｉｎ缩短至 １００ ｍｉｎ内完成，我们用引物ＲＭ２６７和ＲＭ３４１对威 合区分开，我们总共只用Ｊ，７对引物成功地将由这 ３个不育系、６个恢复系和６个｝、．组成的未知样本 维普资讯 http://www.cqvip.com ・５０・ 杂交水稻（ＨＹＢＲＩＤ ＩＣＥ），Ｒ２００２，１７（５）２００２年９月（Ｓｅｐ．，２００２） 般文献中介绍的２Ｏ～２５ 降到１Ｏ ，因而减少了 Ｔａｑ酶及ｄＮＴＰ的用量，大大降低了检测成本。 Ｎｕｓｉｅｖｅ ３：１琼脂糖和９６孑Ｌ ＰＣＲ盘比较贵，但都可以 重复利用。用该方法鉴定小批量的种子，与生产上 采用的田间种植鉴定法相比，成本仍然要高，但如能 进入产业化鉴定大批量的种子或鉴定经济价值高的 经济作物种子，成本是完全可以接受的。 参考文献： ［１］杨剑波，李莉，汪秀峰，等．利用ＲＡＰＤ技术检测杂交 水稻种子纯度（１）一汕优６３与其三系ＤＮＡ扩增产物 优４６和金优２０７掺假种子的样品进行纯度鉴定验 证时，就是采用上述程序。从图５和图６可以看出， 不会影响实验的准确性和分辨率。 ３讨论 种子纯度鉴定不仅要求准确、快速，还要求成本 合适、操作简单，易于实现自动化。我们目前研究的 方法，可基本满足上述要求。 杂种Ｆ．具有父、母本双方的遗传基础，我们筛 选得到的引物，Ｆ，具有双亲互补的带型，凝胶通过 染色后，能清楚的分辨出来。因而具有准确可靠的 特点。 的区别［Ｊ］．安徽农业科学，１９９６，２４（３）：１９３，１９５． 我们采用的方法快速表现在：ａ）引物筛选快。 ［２］陈洪，钱前，朱立煌，等．杂交水稻汕优６３杂种纯度的 ＲＡＰＤ鉴定［Ｊ］．科学通报，１９９６，４１（９）：８３３．８３６． 我们曾经用上述６个组合，筛选了４００多个ＲＡＰＤ引 物，但由于ＲＡＰＤ对反应条件太敏感，一般的工作人 ［３］钱前，陈洪，孙宗修，等．真假杂交水稻Ｉ１优６３的 ＲＡＰＤ鉴定［Ｊ］．中国水稻科学，１９９６，１０（４）：２４１．２４２． 员不容易掌握，可重复性差，最终没有筛选到一对引 物能用于完成某一杂交稻组合种子的纯度和真实性 鉴定。而微卫星引物则不同，从２０对引物中找到一 ［４］杨蜀岚，伏健民，杨仁崔，等．培矮６４Ｓ为不育系的两 系杂交稻杂种纯度的ＲＡＰＤ鉴定［Ｊ］．福建农业大学 学报，１９９８，２７（１）：６－９． 对能区别杂种Ｆ．及其亲本的引物是比较容易的，因 而对于生产上推广的杂交组合，我们都能很快找到 ［５］ 王斌，张超良，翁曼丽，等．玉米自交系８ＩＩ２特异 ＳＣＡＲ标记的获得［Ｊ］．高技术通讯，１９９９，９（３）：４５４７． ［６］郭旺珍，张天真，潘家驹，等我国棉花主栽品种的 ＲＡＰＤ指纹图谱研究［Ｊ］．农业生物技术学报，１９９６，４ （２）：１２９—１３４． 适合其纯度鉴定的分子标记。ｂ）ＤＮＡ提取快。我们 试图用ＮａＯＨ一步法提取的ＤＮＡ进行扩增，但在１Ｏ 反应体积的情况下，会出现许多空管，而用目前采 用的ＤＮＡ提取方法，虽然比用ＮａＯＨ一步法提取 ［７］Ｍａｒｓｈａｒｌｌ Ｐ，Ｍａｒｃｈａｎｄ Ｍ Ｃ．Ａ ｓｉｍｐｌｅ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｅｓｔｉｍａｔｅ ｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔｔａｇｅ ｏｆ ｈｙｂｒｉｄｉｔｙ ｉｎ ｃａｎｏｌａ（Ｂｒａｓｓｉｅａ ｎａｐｕｓ）Ｆ１ ＤＮＡ稍微复杂，但提取的ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增时，可 保证完全没有空管。ｃ）完成纯度鉴定时间快。从种 ｈｙｂｒｉｄｓ［ＪＪ．Ｔｈｅｏｒ Ａｐｐｌ Ｇｅｎｅｔ，１９９４，８９：８５３—８５８． ［８］欧阳新星，许勇，张海英，等．应用ＲＡＰＤ技术快速进 行西瓜杂交种纯度鉴定的研究［Ｊ］．农业生物技术学 报，１９９９，７（１）：２３．２７． １９ Ｊ Ｖｉｃｔｏｒ １ Ｋｌｉｍｙｕｋ，Ｂｅｒｎａｒｄ Ｊ Ｃａｒｒｏｌ，Ｃｏｌｗｙｎ Ｍ Ｔｈｏｍａｓ，ｅｔ ａ１．Ａｌｋａｌｉ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ ｒａｐｉｄ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌ ｍａｔｅｒｉｌａ ｆｏｒ ｔｅｌｉａｂｌｅ ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓｌＪｊ．Ｔｈｅ ＰＩａｎｔ Ｊｏｕｒｎａｌ，１９９３，３ （３）：４９３＿４９４． 子ＤＮＡ提取至得到纯度鉴定结果可在３～４ ｈ内完 成。另外，用本方法鉴定杂交水稻种子纯度的整个 程序，只是几次机械式的加样过程，易于操作，也容 易实现自动化。 由于我们采用了简单的ＤＮＡ提取方法（米粒和 叶片都行），一名熟练实验工在一个工作１３内可完成 数千粒种子的ＤＮＡ提取。且ＰＣＲ反应体积也由一 Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ Ｉｄｅｎｔｉｉｃａｔｆｉｏｎ ｏｆ Ｐｕｒｉｔｙ ａｎｄ Ｆａｃｔｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｈｙｂｒｉｄ Ｒｉｃｅ Ｓ‘ ｄｓ Ｕｓｉｎｇ Ｍｉｃｒｏｓａｔｅｎｉｔｅ Ｍａｒｋｅｒ ＺＨＡＮ Ｏｉｎｇ．ｃａｉ （Ｈｕｎａｎ Ｒｉｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｌｎｓｔｈｔｔｔｅ，Ｃｈａｎｇｓｈａ，Ｈｕｎａｎ ４１０１２５，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｉｘ ｈｙｂｒｉｄ ｒｉｃｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｐａｒｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｃｒｅｅｎ ｔｈｅｉｒ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｕｓｉｎｇ ｍｉｃｒｏｓａｔｅＨｉｔｅ ｍａｌ＂ｋｅｐｓ．Ｏｕｔ ｏｆ １７８ ｐｒｉｍｅｒ ｐａｉ，￣，５２ ｐａｉ，￣ｓｈｏｗｅｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｅ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｉｎ ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｌｅ ｏｆｔｈｅ ｔｅｓｔｄ ｃｏｍｅｂｉａｔｉｎｏｎｓ．Ｔｈｅ Ｆｌ ｈｙｂｒｉｄｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆ ｔｈｅｉｒ ｐａｒｅｎｔｓ．Ｕｓｉｎｇ ｔｗｏ ｐｒｉｍｅｒ ０ａｉ，￣ｏｆ ｍａｒｋｅｍ，ｗｅ ｔｅｓｔｄ ｔｅｈｅ ｐｕｒｉｔｙ ａｎｄ ｆａｃｔｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｗｅｉｙｏｕ ４６ ａｎｄ Ｊｉｎｙｏｕ ２０７ Ｆ，ｓｅｅｄｓ．ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｐｕｒｐｏｓｅｌｙ ａｄｕｌｔｅｒａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓｅｅｄｓ ｏｆｔｈｅｉｒ ｍａｌｅ ａｎｄ ｆｅｍａｌｅ ｐａｒｅｎｔｓ．Ｂｙ ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｒａｐｉｄ，ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ｌｏｗ ｃｏｓｔ ｍｅｔｈｏｄ ｏｎ ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｗｅ ｆｏｕｎｄ ｉｔ ｗａｓ ｅａｓｙ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ｐｕｒｌ— ｙ ａｔｎｄ ｆａｅｔｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｈｙｂｒｉｄ ｓｅｅｄｓ ｗｉｈ ｔｔｈｅ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒ ｍｅｔｈｏｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｈｙｂｒｉｄ ｒｉｃｅ；ｍｉｅｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒ；ｐｕｒｉｔｙ ｉｄｅｎｔｉｉｃａｔｉｆｏｎ
