微生物的实验室培养知识清单

（1）概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其 的营养基质。（2）营养构成：一般都含有水、 、 和无机盐。此外，还要满足微生物生长对 、 以及氧气的需求。例如，培养乳酸菌时需要在培养基中添加 ，培养霉菌时p H调至 ，培养细菌时pH调至 。培养厌氧微生物提供 环境。（3）种类：按物理性质可分为 培养基和 培养基。固体培养基中需添加 。（注：加入培养基中的琼脂只能起到凝固作用，一般不能被微生物利用。） 2、无菌技术

（1）获得纯净培养物的关键是 。（2）对实验操作空间，操作者的衣着和手，进行 ；对培养器皿、接种工具、培养基进行 ；实验操作应在 进行，因为 。（3）比较消毒和灭菌： 消毒 概念 常用方法 灭菌 应用范围 3、 制备培养基

（1）配制步骤：计算、 、 、 、倒平板。调pH应在灭菌前进行。（2）牛肉膏蛋白胨固体培养基所需的原料： 、 、 、 、 。（3）在烧杯中加入琼脂后，要不断用玻棒搅拌，防止 。待培养基冷却至 左右时，在 附近倒平板，严格遵循课本上的操作步骤。 4、纯化大肠杆菌

（1）纯化菌种时，为了得到单个 ，最常用的接种方法： 和 。 注 意 事 项 目的 培养 平板划线法 （1）第一次划线及每次划线前都需 要 进行灭菌，划线操作结束后仍需要灼烧接种环；（2）灼烧接种环之后，要（3）划线最后一区域不要与 相连；（4）培养基不要划破。 稀释涂布平板法 （1）稀释操作时：每支试管及其中的9ml水、移液管均需要 ；操作时试管口和移液管应在离火 焰 处。 （2）涂布平板时：涂布器用 消放在盛有酒精的烧杯中；酒精灯与培养皿距离合适，移液管头不要接触任何物体等。 冷却后才能伸入菌液，以免 ；毒，取出后在酒精灯火焰上引燃；不要将过热的涂布器在培养基上形成由单个菌种繁殖而来的 。 平板冷凝后要在 中 培养，防止 。 5、菌种的保存

对于频繁使用的菌种，采用 的方法；需要长期保存的菌种，采用 的方法。 二、简答题 1、完成表格 微生物种类 蓝藻 硝化细菌 同化作用类型 碳源 氮源 能源 根瘤菌 乳酸菌 注：自养微生物所需碳源、氮源来自含碳、含氮无机物，异养微生物所需碳源来自含碳有机物；含氮无机物既可作为氮源，也可提供能源，如NH3。

2、牛肉膏蛋白胨培养基中的碳源、氮源分别是什么？提供能源的物质是什么？

3、无菌技术的目的？使用后的培养基能否直接丢弃，为什么？

4、倒平板时，为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？如果将培养基溅在皿盖和皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？

5、平板划线操作中第一次、每次划线之前及划线结束后灼烧接种环的目的？在第二次以及其后的划线中，为什么总是从上一次划线的末端开始？

6、为什么将接种后的培养基和未接种的培养基或接种无菌水的培养基都放入恒温箱中培养？

7、培养大肠杆菌结束后，若无菌操作基本符合要求，观察到的现象是怎样的？如果培养基上的菌落连成一片，可能的原因是什么？