血凝试验影响因素浅析

血凝试验影响因素浅析

血凝试验临床上常规的检查项目主要包括凝血酶原时间（PT）测定、活化部分凝血活酶时间（APTT）测定、凝血酶时间（TT）测定、纤维蛋白原（Fg）测定，是一组能反应凝血途径中各种凝血因子异常的筛查试验。这些检查项目已广泛应用于出血、血栓性疾病诊断、鉴别诊断、疗效观察、抗凝药物剂量监测和患者手术前的检查。血凝试验检验是一项比较复杂的过程，且容易出现误差，通常情况下，在血凝试验过程中其中的某些因子一旦被某些因素激活，会造成一系列的连锁反应，造成检测结果出现很大的偏差[1]。这就要求我们检验人员必须了解和掌握与之相关的因素，尽量避免其对试验结果的影响。本文对影响血凝试验以下几个方面因素进行探讨。

1 血液标本的采集、运送与处理

1.1标本采集前患者的准备 患者要处于平静和空腹状态，以免造成凝血因子、血小板和纤溶成分的激活。采血前1w内不可服用对血凝试验有影响的药物，某些药物本身就具有影响凝血机制的功能或是有协同抗凝作用[2]，如水合氯醛、阿司匹林、保泰松、氯贝丁酯、吲哚美辛等可使口服抗凝药物在血液中浓度明显增高。大剂量使用青霉素（血浆浓度达5000U/ml）可使PT、APTT明显延长，且随药物浓度的增加而延长[3]。头孢哌酮分子中甲硫甲唑环的侧链与前凝血酶原相仿；羧酶可错误地与抗生素结合而导致凝血酶原的形成减少，干扰肝脏中维生素K的代谢，导致低凝血酶血症[4]。口服避孕药、雌激素、妊娠、香豆素类药物、肝素、天冬酰胺酶、纳洛酮可影响APTT。

1.2采血用具 采血建议使用真空管收集标本，或选择使用一次性塑料注射器、硅化玻璃注射器。贮血使用塑料试管或硅化玻璃管，不宜使用普通玻璃器，避免血小板和凝血因子活化。样本采集后，若不能立即测定，应将样本加塞保存，因为样本暴露于空气中可使pH值升高，引起血浆凝血酶原时间（PT）和活化部分凝血活酶时间（APTT）延长。

1.3标本采集 采血前不要拍打采血部位，采血人员技术熟练，“一针见血”，组织损伤后，组织液中的因子Ⅲ可激活外源性凝血途径，加速凝血酶原的消耗，造成结果偏低，应避免溶血及组织液污染。止血带应尽可能扎得松些，时间不超过1min，否侧可造成局部血液浓缩和组织型纤溶酶原激活物释放等，引起血小板、凝血因子和纤溶成分活化[5]。抽血速度要缓慢、均匀，使血液沿管壁缓慢注入注射器，防止气泡产生。产生的泡沫可使纤维蛋白原和某些凝血因子变性，影响试验结果。采血量的多少根据检验项目需要而定，血量与抗凝剂量比例要合适，采血后迅速将血液与抗凝剂轻轻的颠倒混匀5～8次，但不要用力震荡，以免凝血蛋白破坏。标本避免出现凝块和溶血。采血顺序也影响实验结果，朱忠勇报道[6]：PT血样采集顺序第二管、第三管与第一管比较差异有显著性（P＜0.01），APTT的差异则无显著性（P>0.05）。因此，多管标本采集时，第一管应采集血凝试验。

1.4标本的运送和保存 标本采集后一般在室温下运送，及时送检，严防剧烈震荡、日光直射和污染。因低温会损伤血小板，并可导致某些凝血因子活化，使PT或APTT缩短。在原血浆管置室温2h测得的结果与立即测定的PT、APTT结果差异无显著性（P>0.05），而分离出血浆的试管置室温2h所测结果与立即测定PT、APTT结果有明显差异（P＜0.01）[7]。凝血试验应在室温保存4h内完成，未能完成的应在4℃冰箱保存，必须在24h内完成。-20℃保存标本需1w内完成，否则会对结果产生影响[8]。标本使用前充分融化，避免反复冻融。

1.5标本的分离 一般在室温下及时离心分离血浆。3000rpm（或2500g）离心15min，收集上层黄色血浆。离心尽可能除去血浆中的血小板，分离乏血小板血浆。

2 抗凝剂的选择及使用

凝血试验常用的抗凝剂为109mmol/L枸橼酸钠，它能有效地阻止因子Ⅴ、降解Ⅷ，血液与抗凝剂比例为9：1，一定要准确，标本中抗凝剂的含量可改变血浆中钙离子浓度，而影响试验结果。如果抗凝剂的量增多或采血量过少，可使PT、APTT时间明显延长。当被检者红细胞压积（HCT）>0.55或<0.20时，则需调整抗凝剂的比例，抗凝剂用量（ml）-0.00185×被检血液量（ml）×[1-HCT（%）][9]。血凝试验不宜使用EDTA·Na2、肝素、草酸盐作为抗凝剂，EDTA盐对因子Ⅴ保护性差，因为它能抑制或干扰纤维蛋白形成时纤维蛋白单体聚合，草酸盐与钙离子形成不溶性沉淀物，可影响血凝仪凝固终点的检测，肝素可与AT作用并抑制许多凝血因子反应。

3 试剂的选择及使用

3.1根据检测目的选用敏感性和特异性高的试剂，尽可能使用仪器配套试剂、校准品和质控物。对口服抗凝药物的检测，为了便于估计抗凝剂疗效或指导用药，最好选择INR报告方式。因此，选择试剂应标有ISI值，理论上ISI值越接近1.0越好，ISI值的高低决定INR的精度，也决定试剂的质量[10]。

3.2试剂复溶时使用无Ca2+的未被生物、化学污染的去离子水溶解30min后使用。溶解试剂时不能剧烈振摇，以防产生气泡。复溶后试剂不能反复冻融，防止试剂中因子失活而影响测定结果。不用时保存温度为2℃～8℃，并在有效期内使用。

4 其它因素

血凝仪属于精密仪器，应提供一个良好的检测环境，检测环境可影响仪器的运行状态或光学信号。按照要求对仪器定期进行保养和维护及仪器的校正，使仪器保持良好的工作状态。使用配套定标质控品，严格按照血凝仪说明书上的程序建立标准曲线，或者使用适宜新鲜（混合）血浆，其定值必须直接或间接溯源至国际标准。样品与试剂的预温时间要准确，测定温度为36.5℃～38.5℃，加试剂时防止气泡产生。因试剂的不同、检测原理的差异等，临床实验室可建立自己的

参考值区间。

综上所述，凝血过程包括一系列的反应，常受到许多测试前因素的影响，因此我们实验室工作人员要掌握和了解这些因素，尽量避免其对试验结果的干扰，确保结果准确可靠，为临床提供一个可靠的诊断依据。

参考文献：

[1]门剑龙.原发性高血压患者测定凝血抗凝等指标的临床意义[J].临床检验杂志，2011，18（4）：250.

[2]彭春花，王秀华，陈元媛.血凝试验检验结果的影响因素分析[J].检验医学与临床，2010，7（16）：1733-1735.

[3]常剑峰.大剂量β-内酰胺类抗生素凝血实验的干扰[J].临床检验杂志，2008，18（4）：211.

[4]徐淑云.临床用药指南[M].合肥：安徽科学技术出版社，1997：58.

[5]罗春丽，龚道元，张家忠.血栓与止血检查分析前的质量控制[M]//临床检验基础.3版.北京：人民卫生出版社，2010：87.

[6]肖秀林，陈红宇，王昌富，等.PT和APTT样本采集顺序和保存温度的探讨[J].上海医学检验杂志，2001，16（2）：104.

[7]康志荣.不同存放条件对血浆凝血试验结果的影响[J].临床检验杂志，1998，16（1）：52.

[8]李立青.标本放置时间及温度对凝血三项测定结果的影响[J].大理学院学报，2004，3（5）：47.

[9]丛玉隆，王淑娟.今日临床检验学[M].北京：中国科学技术出版社，1997：207-208.

[10]程峰，朱忠勇.凝血酶原时间测定标准化及在抗凝治疗中应用[J].中华医学检验杂志，1995，18（2）：111.