山西医药杂志２０１１年１０月第４ｏ卷第１ｏ期上半月 Ｓｈａｎｘｉ Ｍｅｄ Ｊ，Ｏｃｔ 望 Ｑ ！ ： Ｑ！ 旦： ！ ！！ ！ ・ ９５７・ 著・ Ｇｒｂ２一相关蛋白２参与ＲＡＮＫＬ诱导的乳腺癌细胞 ＭＤＡ—ＭＢ一２３１迁移的机制研究 中国医科大学附属第一医院（１１０００１） 张凌云 曲秀娟 刘云鹏 侯科佐 【摘 要】 目的 探讨Ｇｒｂ２一相关蛋白２（Ｇａｂ２）在核因子一 Ｂ受体活化因子配体（ＲＡＮＫＬ）诱导的乳腺癌细 胞ＭＤＡ－ＭＢ－２１３迁移中的作用。方法 流式细胞术检测ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞表面ＲＡＮＫ的表达。Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ法 测定ＲＡＮＫＬ刺激后细胞迁移能力的改变。免疫沉降及Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测ＲＡＮＫＬ刺激后ｐ－Ｔｙｒ－Ｇａｂ２和Ｇａｂ２ 的表达。结果ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞表达ＲＡＮＫ蛋白，ＲＡＮＫＬ诱导ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞迁移能力增强。ＲＡＮＫＬ 刺激后ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞ｐ－Ｔｙｒ－Ｇａｂ２表达一过性升高。结论 Ｇａｂ２参与ＲＡＮＫＬ诱导的乳腺癌细胞ＭＤＡ－ ＭＢ－２３１迁移。 【关键词】乳腺肿瘤； 细胞运动； 核因子一 受体活化因子配体 Ｇｒｂ２ ｗａ￥ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ＲＡＮＫＬ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｒｅａｓｔ ｃａＩｌｏｅｒ ｃｅｌｌ ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ＺＨＡＮＧＬｉｎｇ－Ｙｕｎ，ＱＵＸｉｕ－Ｊｕａｎ， ＬＩＵ ＹｕｒｒＰｅｎｇ，ＨｏＵ ＫｅＩＺＨｏ．Ｔｋ Ｆｉｒｓｔ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｃｈｉｎａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ。Ｓｈｅｎｙａｎｇ １１０００１，Ｃｈｉｎａ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ Ｇａｂ２ ｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｂｙ ＲＡＮＫＬ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌ－ｓｕｒｆａｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＲＡＮＫ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｂｙ ｎｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｃｅｌｌ ｓｏｔ— ｔｉｎｇ（ＦＡＣＳ）．Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ ａｓｓａｙｅｄ ｔｈｅ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌ１．Ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔＯ ａｓｓａｙ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐ－Ｔｙｒ－Ｇａｂ２，Ｇａｂ２ ａｎｄ ａｃｔｉｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｃｅｌｌ ｓｏｒｔｉｎｇ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＲＡＮＫ ｉｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ＭＤＡ—ＭＢ－２３１．ａｎｄ ＲＡＮＫＬ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ，ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｂｌｏｃｋｅｄ ｂｙ ｄｅｃｏｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＯＰＧ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐ－Ｔｙｒ－Ｇａｂ２ ｉｎ— ｃｒｅａｓｅｄ ａｔ ５ ｍｉｎｕｔｅｓ ａｆｔｅｒ ＲＡＮＫＬ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｇａｂ２ ｗａｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ＲＡＮＫＬ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ＭＤＡ—Ｍ ２３１ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ Ｂｒｅａｓｔ ｎｅｏｐｌａｓｍｓ； Ｃｅｌｌ ｍｏｖｅｍｅｎｔ； ＲＡＮＫＬ 核因子一．ｃＢ受体活化因子配体（ＲＡＮＫＬ）属于 要作用。近年研究发现，Ｇａｂ２在人类早期肿瘤及 肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）配体超家族成员，属于Ⅱ类 乳腺癌细胞系中高表达，并与其他原癌基因共同协 跨膜蛋白。主要由成骨细胞、骨髓基质细胞表达。 作参与乳腺癌发生及转移。而Ｇａｂ２是否参 ＲＡＮＫＬ的受体是ＲＡＮＫ，属于工类跨膜蛋白，主 与ＲＡＮＫＬ诱导的乳腺癌细胞迁移，国内外文献 要存在于淋巴结、活化的Ｔ细胞、Ｂ细胞、成纤维 尚无报道。本文通过检测ＲＡＮＫＬ刺激后乳腺癌 细胞、破骨细胞及其祖细胞胞膜上。近年来研究发 细胞系ＭＤＡ－ＭＢ一２３１磷酸化Ｇａｂ２蛋白表达的变 现，乳腺癌标本及细胞系的高ＲＡＮＫ表达， 化，探讨Ｇａｂ２在ＲＡＮＫＬ诱导的乳腺癌细胞迁移 ＲＡＮＫＬ能促进表达ＲＡＮＫ的上皮癌细胞迁移至 中的作用。 骨，与乳腺癌骨转移密切相关［１］。所以研究 １材料与方法 ＲＡＮＫＬ诱导的乳腺癌细胞定向性迁移机制是预 １．１材料 防乳腺癌骨转移的基础。 乳腺癌细胞株（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞）（上海细胞库）； Ｇｒｂ２－相关蛋白２（Ｇａｂ２）是一种衔接蛋白，在 Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室（美国Ｃｏｒｎｉｎｇ公司）；Ｌ－１５培养基（美国 细胞增殖、分化、凋亡及迁移等生理过程中发挥重 Ｇｉｂｃｏ公司）；ｓＲＡＮＫＬ（美国Ｐｅｐｒｏ Ｔｅｃ公司）；ｒＯＰＧ（美国 Ｐｅｐｒｏ Ｔｅｃ公司）；ＲＡＮＫ抗体（美国Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ公司）； 基金项目：国家青年科学基金（３０７００８０７）；辽宁省教育厅 Ｇａｂ２抗体（美国Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ公司）；磷酸酪氨酸单克隆抗 基金（２０１０２２５０３２）；辽宁省教育厅重点实验室项目（２ＯＯ８Ｓ２４６） 体４Ｇ１０（美国Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐ公司）。 通信作者：刘云鹏 １．２方法 ・ ９５８・ 山西医药杂志２０１１年１０月第４Ｏ卷第１Ｏ期上半月 Ｓｈａｎｘｉ Ｍｅｄ Ｊ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１ｌ，Ｖｏ１．４０，Ｎｏ．１０ ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ １．２．１ 细胞的培养：ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞系置于含庆大霉 素１００ ｕ／ｍＬ、１Ｏ 胎牛血清的 １５培养基，于３７℃细胞 培养箱中常规培养，所有实验均用对数生长期的细胞。 １．２．２ 流式细胞术检测乳腺癌细胞表面蛋白ＲＡＮＫ的表 达：于对数生长期胰酶乙二胺四乙酸（ＥＤＴＡ）消化收集 ＭＤＡ＿Ｍ【）＿２３１细胞，以ＲＡＮＫ单抗（１：２５０）孵育１ ｈ，异 硫氰酸荧光素（ＦＩＴＣ）结合的羊抗鼠ＩｇＧ（１：２００）避光孵 育３０ ｍｉｎ，０．５ ｍＬ磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）重悬，上机检测。 １．２．３ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测蛋白表达：于对数生长期分别收 集细胞，进行聚丙烯酰胺（ｓＤＳ）一ＰＡＧＥ凝胶电泳，湿法转 印，以Ｇａｂ２（１：１ ０００稀释）及肌动蛋白（ａｃｔｉｎ）（１：１ ０００ 稀释）作为一抗，二抗为辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠 ＩｇＧ或羊抗兔ＩｇＧ（１：８ＯＯ），孵育后增强化学发光法（ＥＣＬ） 显色（按试剂盒说明书操作）。 １．２．４免疫沉降检测Ｇａｂ２的酪氨酸磷酸化（磷酸化Ｇａｂ２ 表达量）：收集ＲＡＮＫＬ刺激后不同时间点的蛋白（１００ ｇ），经ＲＩＰＡ细胞裂解液裂解，将裂解产物用磷酸酪氨酸 单克隆抗体４Ｇ１０抗体免疫沉淀，冰水混合物中摇晃４ ｈ 后，用裂解缓冲液洗涤３次。加入３×上样缓冲液，煮沸５ ｍｉｎ，再用抗Ｇａｂ２抗体做免疫印记，利用化学发光法进行 显色反应。 １．２．５ Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ法测定细胞迁移能力：实验中采用６．５ ｍｍ直径，１０ ｔＬｍ厚度，８ ｍ孔径的聚碳酸酯多孔滤膜（２４ 孑Ｌ板Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室，Ｃｏｒｎｉｎｇ）。取对数生长期细胞，胰酶 ＥＤＴＡ消化收集细胞，离心（１ ０００ｒ／ｍｉｎ×５ ｍｉｎ），弃上清， 无血清Ｉ，１５洗涤１次，细胞计数，用含０．１ 胎牛血清白蛋 白（ＢＳＡ）的无血清培养基重悬细胞至１×１０ 个细胞／ｍＬ。 上室每孔加入２００ Ｌ细胞悬液，下室中５００ Ｌ含２．５％胎 牛血清的Ｉ，１５培养基加或不加（对照）ｓＲＡＮＫＬ，或ＯＰＧ， ３７℃培养箱中培养１６ ｈ。取出Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ，用脱脂棉擦去 上表面细胞并用ＰＢＳ轻吹上室侧壁洗２次，３７℃风干２Ｏ ｍｉｎ，瑞士吉姆萨法染色３７℃４０ ｍｉｎ。ＰＢＳ冲洗，切下小 室膜，底面向上置于载玻片上，盖玻片覆盖固定，显微镜下 观察穿膜细胞总数，计数３次取平均值。实验重复至少３ 次。迁移增加率一１００ ×（ＲＡＮＫＬ处理组穿膜细胞数一 ＝一对照组穿膜细胞数）／对照组穿膜细胞数。 １．３统计学处理 采用ＳＰＳＳ １６．０软件分析实验数据。所有实验结果均 重复至少３次，数据用ｉ±Ｓ表示，ｔ检验检测组间有无统计 学意义，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。 ２ 结 果 ２．１ ＭＤＡ—Ｍ１３－２３１细胞表达ＲＡＮＫ蛋白：见图１。 ２．２ ＲＡＮＫＬ诱导ＭＤＡ—ＭＢ－２３１细胞迁移：Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ法 测定ＭＤＡ－ＭＢ－２３细胞体外迁移能力。结果显示ＲＡＮＫＬ 刺激后细胞迁移能力显著增强，迁移增加率（１５７±２３） ， 而ＲＡＮＫＬ的圈套受体ｒＯＰＧ可显著阻断ＲＡＮＫＬ诱导的 细胞迁移，迁移增加率为（１９±１３） ，Ｐ＜Ｏ．０５。 ２．３ ＲＡＮＫＬ刺激后ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ Ｇａｂ２活化：ＭＤＡ－ＭＢ－ ２３１细胞经ＲＡＮＫＬ（２／￣ｇ／ｍＬ）处理后，分别收集０、５及３０ ｍｉｎ时蛋白样品。免疫沉降及Ｗｅｓｔｅｎｒ ｂｌｏｔ检测结果显示酪 氨酸磷酸化的Ｇａｂ２在ＲＡＮＫＬ处理后５ ｍｉｎ时上调（图２）。 苣 ｌ １０＊ ｌ Ｉ伊 １ ０４ ＲＡＮＫ 图１ 流式细胞术检测ＭＤＡ—ＭＩ３－２３ｌ细胞 ＲＡＮＫ蛋白水平，灰色峰为对照 ０ ５ ３０ ｍｉｎ 幽２ｂ：Ｗｅｓｔ唧一ｈ１０ｔ１聱铡 图２免疫沉降及Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测ＲＡＮＫＬ刺激后 ＭＤＡ—ＭＢ－２３１酪氨酸磷酸化Ｇａｂ２及Ｇａｂ２的表达 ３讨 论 研究发现ＲＡＮＫＬ具有趋化因子样作用，可 趋化表达受体ＲＡＮＫ的细胞发生定向性迁移。最 近研究表明，近年来研究显示乳腺癌胞［１］、前列腺癌细胞ＰＣ３ ］、小鼠恶性黑色素瘤细 胞Ｂ１６Ｆ１０Ｉ】 及肺癌细胞Ａ５４９［ Ｔ４７Ｄ细 ４ 表面均表达受体 ＲＡＮＫ，ＲＡＮＫＬ能趋化ＲＡＮＫ阳性肿瘤迁移。 与上述文献报道相符，本研究结果也显示ＭＤＡ— ＭＢ－２３１细胞表达ＲＡＮＫ，且ＲＡＮＫＬ刺激后细胞 迁移能力增强。也从侧面印证了ＲＡＮＫＬ／ＲＡＮＫ 信号途径的趋化作用可能与乳腺癌骨转移有关，值 得进一步深入研究。 Ｇａｂ２是衔接蛋白Ｇａｂｓ（Ｇｒｂ２－相关蛋白）家族 中的重要成员。该家族蛋白通过介导膜受体与信 号转运蛋白间的偶联及各信号分子间的整合参与 信号传导。作为支架蛋白，Ｇａｂ２可被酪氨酸激酶 磷酸化激活，接受多种生长因子或细胞因子刺激， 招募富含ｓＨ 结构域的信号转运分子，活化下游 ＳＨＰ２／Ｒａｓ／ＥＲＫ和ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ等一系列信号传 导通路［５］，在调节成骨与溶骨之间的平衡 ］、细胞 山西医药杂志２０１１年ｉ０月第４Ｏ卷第１Ｏ期上半月 Ｓｈａｎｘｉ Ｍｅｄ Ｊ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１１，Ｖｏ１．４０，Ｎｏ．１０ ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ ・ ９５９ ・ 增殖、分化、凋亡及迁移等生理过程中发挥重要作 用。文献［７，８］报道Ｇａｂ２可促进乳腺癌细胞 ＭＣＦ—ＩＯＡ的侵袭与迁移，且Ｇａｂ２高表达能够介 导乳腺癌及恶性黑色素瘤的肺转移。Ｇａｂ２可与酪 氨酸激酶人类表皮生长因子受体２型（ＨＥＲ－２）或 ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２０１０，７０（１３）： ５５５８—５５６６． ［４］Ｃｈｅｎ ＬＭ，Ｋｕｏ ＣＨ，Ｌａｉ ＴＹ，ｅｔ ａ１．ＲＡＮＫＬ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｍｉ－ ｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ ａｄ— ｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ一１ ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ，２０１１，１１２ （３）：９３３－９４１． ｃ—Ｓｒｃ共作用促进乳腺癌细胞侵袭表型的发 生Ｌｇ 。而在肝细胞生长因子（ＨＧＦ）／ｃ－ｍｅｔ信号 通路中，Ｇａｂ２衔接并激活ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ信号通路， 促进肺癌细胞的生长和迁移［１ 。破骨细胞活化的 Ｅ５］Ｗａｄａ Ｔ，Ｎａｋａｓｈｉｍａ Ｔ，Ｈｉｒｏｓｈｉ Ｎ，ｅｔ ａ１．ＲＡＮＫＬ＿ＲＡＮＫ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｏｓｔｅｏｃＩａｓｔｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｂｏｎｅ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｏｌ Ｍｅｄ，２００６，１２（１）：１７－２５． ［６］Ｉｔｏｈ Ｓ，Ｙｏｓｈｉｔａｋｅ Ｆ，Ｎａｒｉｔａ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｇａｂ２ ｐｌａｙｓ ｄｉｓｔｉｎｃｔ 过程中，ＲＡＮＫＬ与ＲＡＮＫ结合后，与Ｇａｂ２等形 成蛋白复合体，激活下游的信号通路。但Ｇａｂ２是 否参与ＲＡＮＫＬ诱导的乳腺癌细胞迁移，尚无文 献报道。本研究首次证实，ＲＡＮＫＬ诱导的乳腺癌 细胞ＭＤＡ—ＭＢ－２３１迁移过程中，存在Ｇａｂ２的活 化，说明Ｇａｂ２参与ＲＡＮＫＬ诱导的乳腺癌细胞迁 移。 本研究为明确乳腺癌骨定向性转移的机制奠定 了基础，有利于进一步深入研究研究寻找预防乳腺 癌骨转移的治疗方法以及开发新型分子靶向药物。 参考文献 ［－１－］Ｊｏｎｅｓ ＤＨ，Ｎａｋａｓｈｉｍａ Ｔ，Ｓａｎｅｈｅｚ ＯＨ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｏｎｅ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｂｙ ＲＡＮＫＬ．Ｎａ－ ｔｕｒｅ，２００６，４４０（７０８４）：６９２－６９６． ［２３ Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ ＡＰ，Ｍｉｌｌｅｒ ＲＥ，Ｊｏｎｅｓ ｊｃ，ｅｔ ａ１．ＲＡＮＫＬ ａｃｔｓ ｄｉ— ｒｅｃｔｌｙ ｏｎ ＲＡＮＫ—。ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｍｅｄｉａ—－ ｔｅｓ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｇｅｎｅｓ． Ｐｒｏｓｔａｔｅ，２００８，６８（１）：９２－１０４． ［３３ Ｓａｂｂｏｔａ ＡＬ，Ｋｉｍ ＨＲ，Ｚｈｅ Ｘ，ｅｔ ａ１．Ｓｈｅｄｄｉｎｇ ｏｆ ＲＡＮＫＬ ｂｙ ｔｕｍｏｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ＭＴ１一ＭＭＰ ａｃｔｉｖａｔｅｓ Ｓｒ￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｂｏｎｅ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｍｅ ｐｏｉｎｔｓ．Ｊ Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ Ｍｅｔａｂ，２００７，２５（２）：８１—８５． ［７３ Ｈｏｒｓｔ Ｂ，Ｇｒｕｖｂｅｒｇｅｒ＿ｓａａｌ ＳＫ，Ｈｏｐｋｉｎｓ ＢＤ，ｅｔ ａ１．Ｇａｂ２一 ｍｅｄｉａｔｅｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｍｅｌａｎｏｍａ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ，２００９，１７４（４）：１５２４—１５３３． ［８］Ｋｅ Ｙ，Ｗｕ Ｄ，Ｐｒｉｎｃｅｎ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｇａｂ２ ｉｎ ｍａｍｍａｒｙ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２００７，２６（３４）： ４９５ ｌ＿４９６０． ［９］Ｂｅｎｎｅｔｔ ＨＬ，Ｂｒｕｍｍｅｒ Ｔ，Ｊｅａｎｅｓ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｇａｂ２ ａｎｄ Ｓｒｃ ＣＯ－ ｏｐｅｒａｔｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｍａｍｍａｒｙ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｐｒｏｍｏｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ ａｎｄ ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ ａｃｉｎａｒ ｍｏｒｐｈｏ－ ｇｅｎｅｓｉｓ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２００８，２７（１９）：２６９３—２７０４． ［１０］Ｂｅｎｔｉｒｅｓ—Ａｂ Ｍ，Ｇｉｌ ＳＧ，Ｃｈａｎ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ａ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｃａｆ— ｆｏｌｄｉｎｇ ａｄａｐｔｅｒ Ｇａｂ２ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ．Ｎａｔ Ｍｅｄ，２００６，１２ （１）：１１４－１２１． ［１１３ Ｍａｕｌｉｋ Ｇ，Ｍａｄｈｉｗａｌａ Ｐ，Ｂｒｏｏｋｓ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ａｃｔｉｖａｔｅｄ ＣｍＭｅｔ ｓｉｇｎａｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ＰＩ３Ｋ ｗｉｔｈ ｄｒａｍａｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｍｅｄ，２００２，６ （４）：５３９－５５３． （收稿日期：２０１ｉ－０６—３０） 作者简介：张凌云，女，１９８０年１Ｏ月生，主治医师，中国医 科大学附属第一医院，１１０００１
