真菌的实验报告

1.1了解真菌形态的基本特征。 1.2掌握丝状真菌制片方法。 1.3掌握内生真菌的分离方法 1.4掌握真菌的鉴定方法。 二.前言： 真菌广泛分布于地球表面,从高山、湖泊到田野、森林，从海洋、高空到赤道、两极，到处都有真菌。真菌虽然不在空气中生长繁殖，但它的孢子却成群的漂浮在天空，只要稍微注

意你会发现人类原来生活在真菌的汪洋大海中。 当今世界，生物技术已迈入世界经济的支柱产业，真菌学在生物技术的大潮中得到了长足的发展。真菌是原始的真核生物，具有广泛的多样性，真菌生长我繁殖迅速，在很短的时

间内就可以得到比动物和植物多得多的后代，能够直接、快速地进行遗传性状分离的 分析。因此，真菌可以作为研究基础生物学过程中的一个重要工具，真菌基因的多样性

以及真菌分子生物学的发展，为生物技术产业提供了一个广阔的天地。 植物的生长环境直接影响内生真菌的生物多样性，植物物种的年代越久远，其生物内生真菌的多样性越丰富：抗病原性能越强的植物，其所含的内生真菌具有抗菌活性的可能行就越大；其所含的内生真菌有可能产生与植物相同或相似的抗菌无知或产生抗菌活性物质可能参与了药用植物的抗菌过程，本实验通过植物病原真菌和g+、g-细菌的抑制实验发现茎，根，花，种子或果实内生真菌的代谢产物具有不同程度的抑菌能力，并且对g+、g-有普片遍的抑

菌作用。研究和开发内生真菌的寻找新的抗菌活性物质具有广泛的应用前景。 三.材料与方法： 3.1.1材料：

在校园内采集银杏、喜树、桂花树样品包括叶、茎、 根、花、种子或果实。 3.1.2.药品与试剂：

葡萄糖、蛋白胨、kh2p04·3h2o、mgso4·7h2o，马铃 薯、琼脂。孟加拉红，青霉素，链霉素，甲基蓝，蛋白胨，酵母膏，蔗糖，磷酸盐，葡萄糖，琼脂条，无菌水等。消毒剂：75%的乙醇，0.1%升汞（hgcl2），次氯酸钠溶液（含活性氯10%），30%双氧水。双 蒸水、琼脂糖，tris饱和酚、巯基乙醇(β- mercaptoethanol)，石英砂，tris饱和酚，

氯仿，异戊醇，无水乙醇，硼酸，冰醋酸，氯化钠，盐酸，氢氧化钠，edta，ctab。 3.1.3.培养基： 3.1.3.1马铃薯、葡萄糖琼脂培养基 马铃薯汁 1000ml，葡萄糖20g，琼脂20g （注：取去皮马铃薯200克，切成小块，加水1000毫升煮沸30分钟，滤去马铃薯块，

将滤液补足至1000毫升，加葡萄糖20克，琼脂15克，溶化后分装，15磅灭菌30分钟 3.1.3.2察氏琼脂培养基 蔗糖30g，nano3 3g，mgso4.7h2o 0.5g，kcl 0.5g，feso4.7h2o 0.01g，k2hpo4 1g，

琼脂13g，蒸馏水1000ml，自然ph 3.1.3.3沙氏培养基

蛋白胨 1g，葡萄糖或麦芽糖 4 g，琼脂 1.5克，水 100 ml。 制法：1将上述物质称好，放入水中煮沸溶解（不必调ph即有5左右）分中号试管（约

4毫升）包扎，高压115℃20分钟。趁热斜好，凝固备用。

3.1.3.4马丁氏培养基 葡萄糖10g，蛋白胨5g，kh2po4 1g，mgso4?7h2o 0.5g，1% 孟加拉红3.3ml，琼脂20g， 水 1000ml，ph值自然。 抗生素用法与用量：培养基灭菌之后分装前按链霉素 40u/ml，青霉素30u/ml用量加入，冷却到45℃左右未凝固时加入抗生素，混匀倒平板。 四.方法：

4.1.1采样方法：

在校园内找到银杏、喜树、桂花树并用刀采集叶、茎、 根、皮、种子。 4.1.2样品前处理：

分别取根、茎、叶、果实，用洗涤剂在自来水下洗净。 老树皮用75%酒精进行表面消毒后，用镊子取出，于 酒精灯上烧灼15秒至表面焦糊，切成1×1cm2大小置于pda固体培养基上。 对于根、茎、叶、果实按下列程序进行表面消毒： 75%的酒精漂（浸）洗2-3min→无菌水冲洗4-6次→0.1%升汞不同的消毒时间（见表2-2，共设置7个梯度）→无菌水冲洗4-6次→用灭菌滤纸吸干多余水分→无菌刀片将材料切成小

块将根、茎的表皮、韧皮部、木质部大致分开，并切成0.5×0.5cm2大小。 将果实的外种皮去掉，消毒之后将内种皮去掉。 灭菌时，沥干的植物材料转放到烧杯中，记好时间， 倒入消毒溶液，不时用玻璃棒轻轻搅动，以促进材料各部分与消毒溶 液充分接触，驱除气泡，使消毒彻底。在快到时间之前1-2分钟，开始把消毒液倾入一备好的大烧杯内，要注意勿使材料倒出，倾净后立即倒入无菌水，轻搅漂洗。灭菌时间是从倒入消毒液开始，至倒入无菌水时为止。灭菌液要充分浸没材料。宁可多用些灭菌液，切勿

勉强在一个体积偏小的容器中使用很多材料灭菌。 4.1.3 内生菌的分离方法： 将上述组织块置于分离培养基上（每一平皿培养 5块组织块）于27℃恒温培养，同时将上述消毒过程中最后一次冲洗组织块后的无菌水

滴在培养基上平行培养，用以检测消毒是否彻底。观察菌丝生长情况及污染情况。 4.1.4纯化方法：

培养3-4天后及时采用尖端菌丝挑取法，挑取形 态不同的菌丝或菌落移种到新鲜pda培养基上。纯化3-4次以保证所得菌落为纯培养。 4.2形态鉴定方法： 4.2.1培养方法：

4.2.1.1培养基：查氏培养基、沙氏培养基和pda培养基。 4.2.1.2将4℃保存菌种活化2次； 4.2.1.3将活化菌种分别点种pda、沙氏、察氏平板，每重复 4.2.1.425℃恒温培养箱培养7天； 4.2.1.5然后进行菌落特征描述，取一个平行进行制片（胶带 子粘片法），观察个体形态； 4.2.1.6另两个平行继续培养至14天，取出；篇二：6.4.1检测不同环境中的细菌和真

菌实验报告 初中生物实验操作 （学生用）

检测不同环境中的细菌和真菌（探究）

班级：______ 组别：______ 姓名：____________ 日期：______ 〔目的要求〕: 1. 尝试细菌、真菌的采样（接种）和一般培养方法 2. 认识细菌和真菌的菌落 〔材料用具〕: 装有牛肉汁培养基的培养皿（已经高温灭菌）、无菌棉棒、透明胶带、标签纸、放大镜 〔实验要求〕: 1.清点实验器材。 2.在标签纸上标出组别、实验日期、编号（1号或2号），贴在培养皿底面。 3.接种：可选用以下方法

①将培养皿盖从一侧掀开一条缝隙，用未洗过的手指在培养基上按10秒； ②将培养皿盖从一侧掀开一条缝隙，用肥皂洗过的手指（不用毛巾擦）在培养基上按10秒；

③将培养皿盖从一侧掀开一条缝隙，将硬币或笔帽或一次性卫生筷子或饭勺等轻放在培养基上10秒； ④将培养皿盖从一侧掀开一条缝隙，将头发放在培养基上； ⑤打开培养皿盖，放在实验

室或走廊、操场10分钟

⑥用无菌棉签蘸取饮水机里的水，涂抹在培养基上； 4.将另一套高温灭菌后、没有打开的培养皿不做处理，作为对照。 5.将培养皿放入恒温箱中进行恒温培养。 6.五天至七天后，用放大镜观察出现的菌落。 7.将污物倒进污物桶，清理实验器材。 提示：在没有想好如何工作之前，不能打开培养皿。 教师评价：____________ 日期：____________篇三：真菌学实验指导 本课程，本课程是大学本科生物技术、生物科学专业的选修课程。介绍真菌分类现状、分类方法（包括传统与现代分类方法的比较）、分类依据及其原则。本课程的教学不限于介绍研究的成果，重在介绍分析和解决问题的方法，以培养学生分析问题和创新的能力。所以在理论学习的同时开设综合性实验，培养学生观察、分析和动手能力。基本掌握真菌分离、鉴

定的方法，并应用于真菌其它领域的研究。 本指导书适用于生物技术和生物科学专业。 1、实验：内生真菌的分离及鉴定 ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????3

2、实验报告基本内容要求 ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????7 3、实验报告格

式????????????????????????????????????????????????????????????????8 实验 内生真菌的分离及鉴定 实验学时：18 实验类型：综合 实验要求：选修 一、实验目的

1.了解真菌形态的基本特征。 2.掌握丝状真菌制片方法和真菌鉴定方法。

二、实验内容 采集植物样品包括叶、茎、根、花、种子或果实，然后对分离样品的内生真菌，并进行

形态和分子生物学方法的鉴定。 三、实验原理、方法和手段 （一）实验原理

根据真菌的形态特征和its序列等分子证据对分离到真菌进行归类和鉴定。 （二）实验手段和方法 1、内生真菌分离纯化方法 1.1样品的表面消毒及预处理 分别取根、茎、叶、果实，用洗涤剂在自来水下洗净。 老树皮用75%酒精进行表面消毒后，用镊子取出，于酒精灯上烧灼15秒至表面焦糊，切

成1×1cm2大小置于pda固体培养基上。 对于根、茎、叶、果实按下列程序进行表面消毒： 75%的酒精漂（浸）洗2-3min→无菌水冲洗4-6次→0.1%升汞不同的消毒时间（共设置7

个梯度）→无菌水冲洗4-6次→用灭菌滤纸吸干多余水分→无菌刀片将材料切成小块 将根、茎的表皮、韧皮部、木质部大致分开，并切成0.5×0.5cm2大小。 将果实的外种

皮去掉，消毒之后将内种皮去掉。 灭菌时，沥干的植物材料转放到烧杯中，记好时间，倒入消毒溶液，不时用玻璃棒轻轻

搅动，以促进材料各部分与消毒溶液充分接触，驱除气泡，使消毒彻 底。在快到时间之前1-2分钟，开始把消毒液倾入一备好的大烧杯内，要注意勿使材料倒出，倾净后立即倒入无菌水，轻搅漂洗。灭菌时间是从倒入消毒液开始，至倒入无菌水时为止。灭菌液要充分浸没材料。宁可多用些灭菌液，切勿勉强在一个体积偏小的容器中使用很多材料灭菌。

1.2内生真菌的分离与纯化 将上述组织块置于分离培养基上（每一平皿培养5块组织块）于27℃恒温培养，同时将上述消毒过程中最后一次冲洗组织块后的无菌水滴在培养基上平行培养，用以检测消毒是否彻底。观察菌丝生长情况及污染情况。培养3-4天后及时采用尖端菌丝挑取法，挑取形态不

同的菌丝或菌落移种到新鲜pda培养基上。纯化3-4次以保证所得菌落为纯培养。 2、真菌的形态学鉴定方法 对分离到的内生真菌的分类鉴定主要根据宏观的培养性状（菌落形态），微观的个体形态

特征及一些生物学特性进行经典分类研究。 2.1 培养性状（菌落形态） 培养基：查氏培养基（czapek agar）、沙氏培养基和pda培养基。 方法：将固体培养基制成平板，以点植法接钟，即用接种针尖沾取少量孢子点植在平板的中心位置，然后于25-28℃培养一定时间（通常为7天或14天）进行观察，观察时可用肉眼或借助放大镜等。 观察的要点：

大小：以菌落的直径（mm）表示。 颜色：包括菌落表面和背面的颜色，及色素是否渗入培养基。 菌落表面的纹饰：如皱纹、辐射沟纹、同心环、整个菌落致密或疏松等。 菌落的质地：

毡状、毯状、绒毛状、棉絮状、粉粒状、革质状、有无成束状或绳状的气生菌丝。 菌落的高度：扁平、凸起或隆起，及菌落中心部分状况等。 菌落边缘：全缘、锯齿状、树枝状等。 渗出物：菌落表面有无液滴及液滴的颜色等。

2.2个体形态 菌丝的特征：表面性状（粗糙或光滑），宽度等 分生孢子梗：分支情况--简单或复杂，轮生或单生等；长短；基部粗糙或光 滑等。

产孢结构的形态特征：形状，大小，着生状况（位置，单生、互生或成轮生体） 分生孢子的形态：形状，大小，表面状况，聚集方式（直链、斜链或聚集成头） 2.3真菌制片方法——粘片法 胶带粘贴法：选用在显微镜油镜下观察细致不粗糙且粘性好的胶带。取一小段胶带从菌落表面的中心向边缘粘，75%乙醇固定，乳酸石炭酸棉蓝染色液染色，将粘有菌丝的一面向上，

盖上盖玻片，于显微镜下观察产孢结构等特征。 2.4显微摄影照片 在motic数码显微镜下，观察并选取具典型性状特征的视野拍照、直接测量相关数据和进行描述记载。 2.5菌种的鉴定 根据描述的菌种的特征，索引分析相关文献，综合分析对比相关特征的异同，最后确定

待定菌株的分类地位。

3、真菌的分子生物学鉴定方法 3.1真菌菌丝的获得

（1）固体培养基培养菌丝体 对于气生菌丝较多的真菌可以选择pda固体培养基在培养皿上培养，在固体培养基平板上铺一层玻璃纸，27℃培养5-7天。将3-4个用培养皿平行培养的新鲜菌丝小心地刮下，收集在一起，以备进行dna提取。在刮取菌丝体时，要注意的是不要把培养基一起刮下来，以

免对提取dna造成影响。

（2）液体培养基培养菌丝体 培养基成分与不加琼脂的pda固体培养基成分相同。将液体培养基以100ml每瓶分装至

250ml三角瓶中，用8层纱布封口。121℃，蒸汽灭菌20min。 将菌丝致密的真菌接种到液体培养基中，于恒温振荡培养箱中27℃、120rpm培养5-7天。用两层灭菌纱布过滤菌丝球，用无菌蒸馏水冲洗菌丝球5次，避免培养基中的糖类和蛋白对dna提取的影响。40℃下烘干菌丝，但是不要过于干燥，然后进行dna的提取。篇四：

真菌学实验报告平菇,金针菇 实验报告

10生物技术（1）班 夏志强 10521012 实验一 平菇栽培实验 一·实验目的与原理

1·目的：通过实验，使同学们掌握平菇塑料袋栽培技术。 2·原理：选择适宜的培养料配方，准确称取培养料厚加水搅拌均匀，层播 法装袋接种，在适宜条件下培养菌袋。待菌丝长满培养料后，给予适宜的温、光、湿、

气等条件，进行出菇管理。 二·实验用品

材料：棉籽壳，水，石膏 器材：锅，塑料袋，酒精灯，镊子，剪刀 三·实验内容 1.培养料配制：按照需要量准确称取棉籽壳， 倒在地面，将石灰加入水中搅拌均匀，然后倒入棉籽壳中翻拌均匀。注意含水量要适宜。含水量判断方法为用手握少量培养料用力握

有水渗出而不下滴为宜。

2.装袋接种：采用层播法装袋播种。先撒上一层菌种，装入培养料，待装料至料袋的四

分之一时，撒上一层菌种，待装料至料袋的一半时，撒上一层菌种，封口。 4.菌袋培养：袋装好后搬回宿舍进行培养观察，控制温度25℃左右、空气相对湿度 70％以下，保持空气新鲜，暗光培养。30 天左右菌丝可以发满菌袋。 6.采收和后茬管理 待平菇菌盖平展、连柄处下凹、边缘平伸时，就可以采收。采收后清理料面，停水养菌 5

天左右，再进行后茬菇的管理。 四·注意事项 所压的料应内松外紧，便于菌生长，防止水分过度蒸发，并且上下松紧一致决不允许培养料中出现分层或有大量缝隙；每袋装料不超过2/3袋长。建议每袋料装3~5 cm压一次料，每次压到边缘时，手扶袋，一手用大拇指侧向内压，切记不宜压得太紧，用手握装好的料有

松散感，但不散开为宜。 接种：将装好的料用筷子打一个孔直到底部，在底部上一点也可以（孔是为了通气，增加氧气含量），然后将菌种均匀的洒在培养料 上，接种量不可过多，只要大致覆盖住培养料即可做个标记。 五·实验结果 篇五：真菌检测步骤 真菌检查步骤 1.采集标本 浅部真菌的标本有毛发、皮屑、甲屑、痂等，标本在分离前常先用75%的乙醇消毒。深部真菌的标本可根据情况取痰、尿液、粪便、脓液、口腔或阴道分泌物、血液、

脑脊液、各种穿刺液和活检组织，采集标本时应注意无菌操作。 2.检查方法 真菌检查的方法主要有： （1）直接涂片：为最简单而重要的诊断方法。取标本置玻片上，加一滴10%koh溶液，盖上盖玻片，在酒精灯火焰上稍加热，待标本溶解，轻轻加压盖玻片使标本透明即可镜检。

可用于检查有无菌丝或孢子，但不能确定菌种。 （2）墨汁涂片：用于检查隐球菌及其他有荚膜的孢子。医学教育|网搜集整理方法是取

一小滴墨汁与标本（如脑脊液）混合，盖上盖玻片后直接镜检。 （3）涂片或组织切片染色：涂片染色可更好地显示真菌形态和结构。革兰染色适用于白念珠菌、孢子丝菌等；瑞氏染色适用于组织胞浆菌；组织切片通常用pas染色，多数真菌可被染成红色。 （4）培养检查：可提高真菌检出率，并能确定菌种。标本接种于葡萄糖蛋白胨琼脂培养基上，置室温或37℃培养1～3周，必要时可行玻片小培养协助鉴定。菌种鉴定常根据菌落的形态及显微镜下形态判断，对某些真菌，有时尚需配合其他鉴别培养基、生化反应、分子

生物学方法确定。 四、真菌学检验的基本技术 （一） 直接镜检 是最简单也是最有用的实验室诊断方法，常用的方法有：①氢氧化钾/复方氢氧化钾法：标本置于载玻片上，加一滴浮载液，盖上盖玻片，放置片刻或微加热，即在火焰上快速通过2～3次，不应使其沸腾，以免结晶，然后轻压盖玻片，驱逐气泡并将标本压薄，用棉拭或吸水纸吸去周围溢液，置于显微镜下检查。检查时应遮去强光，先在低倍镜下检查有无菌丝和孢子，然后用高倍镜观察孢子和菌丝的形态、特征、位置、大小和排列等。浮载液：a.10%~20%的koh。配方：氢氧化钾10～20g，蒸馏水加至100ml，待氢氧化钾完全溶解后揺匀存放在塑料瓶内，适用于皮屑、甲屑、毛发、痂皮、痰、粪便、组织、耵聍等的检查。b.复方氢氧化钾溶液配方：氢氧化钾（ar）10g，二甲基亚砜（ar）40ml,甘油50ml, 蒸馏水加至100ml,配制方法：将氢氧化钾先加入30ml蒸馏水中溶解后，再依次加入dmso、甘油揺匀后，用蒸

馏水加到100ml，装入塑料瓶内。此配方的优点是：配方中加dmso，能促进角质的溶解，有甘油涂片不易干，不易制成氢氧化钾结晶，氢氧化钾的浓度相对低，腐蚀性亦低，为进行大面积普查或大批量采集标本作镜检带来了方便。②胶纸粘贴法：用1cm×1.5cm的透明双面胶带贴于取材部位数分钟后自取材部位揭下，撕去复带在上面的底板纸贴在载玻片上，使原贴在取材部位的一面暴露在上面，再进行革兰染色或过碘酸锡夫染色，在操作过程中应注意双向胶带粘贴在载玻片上时不可贴反，而且要充分展平，否则影响观察。③涂片染色检查法：在载玻片上滴1滴生理盐水，将所采集的标本均匀涂在载玻片上，自然干燥后，火焰固定或

甲醇固定。再选择适当的染色方法，染色后，以高倍镜或油镜观察。 常见镜检染色方法有：①革兰染色。所有真菌、放线菌均为革兰染色阳性，被染成蓝黑色。适用于酵母菌、孢子丝菌、组织孢浆菌及诺卡菌、放线菌的感染。②乳酸酚棉蓝染色：

用于 各种真菌培养物的镜检。③印度墨汁：用于检测脑脊液（csf）中的新生隐球菌。④抗酸染色：用于抗酸菌及诺卡菌的诊断。⑤瑞氏染色：用于组织胞浆菌和马内菲青霉的检测。⑥过碘酸锡夫染色（pas）：用于体液渗出液和组织匀浆等。真菌胞壁中的多糖染色后呈红色，细菌和中性细胞偶可呈假阳性，但与真菌结构不同，不难区别。⑦嗜银染色（gms）：真菌可

染成黑色，主要用于测定组织内真菌。 （二） 真菌培养 从临床标本中对致病真菌进行培养，目的是为了进一步提高对病原体检出的阳性率，以弥补直接镜检的不足，同时确定致病菌的种类。真菌培养检查除需要一般细菌检验用到的器具外，还应准备真菌专用的接种针、接种环、或接种钩（用铂丝或镍丝制成）、微型小铲、刀片、针头等，常规分离鉴定使用的培养基为沙氏葡萄糖琼脂（sda）斜面培养基，加0.05%氯霉素，还有多种性质的培养基（见第二部分）以满足各种不同的需要，可酌情选用接种的方法，根据不同的临床标本，大体可分为点植法和划线法两种。①点植法：适用于皮屑、甲屑、毛发、痂皮、组织等有形固体标本，将标本直接与培养基表面点状接触。②划线法：适用于痰、分泌物、脓液、组织液、组织块的研磨液等液体标本，用接种针（环）划线接种在培养基表面。 培养方法有多种，接临床标本接种时间分为直接培养法和间接培养法；按培养方法分为试管法、平皿法（大培养）和玻片法（小培养）。①直接培养：采集标本后直接接种于培养基上。②间接培养：采集标本后，暂保存，以后集中接种。③试管培养：是临床上最常用的培养方法之一，培养基置于试管中，主要用于临床标本分离的初代培养和菌种保存。④大培养：将培养物接种在培养皿或特别的培养瓶内，主要用于纯菌种的培养和研究。⑤小培养：主要用于菌种鉴定，大致分为三种：玻片法，方块法和钢圈法。a.玻片法：在消毒的载玻片上，均匀地浇上熔化的培养基，不宜太厚。凝固后接种待鉴定菌株，置于平皿中，保湿。待有生长后，盖上消毒的盖玻片，显微镜下直接观察，常用米粉吐温琼脂培养基观察白念珠菌的顶端厚壁孢子和假菌丝。b.方块法：适用于霉菌菌落的培养。取无菌平皿倒入约15ml熔化的培养基，待凝固后用无菌小铲或接种刀划成1cm2大小的小块。取一小块移在无菌载玻片上，然后在小块上方四边的中点接种待鉴定菌株，盖上消毒的盖玻片，放入无菌平皿中的v形玻棒上，底部铺上无菌滤纸，并加入少量无菌蒸馏水，孵育，待菌落生长后直接将载玻片置显微镜下观察。c.钢圈法：先将固体石蜡加热熔化，取直径约2cm，厚度约0.5cm有孔口的不锈钢小钢圈，火焰消毒后趁热浸入石蜡油，旋即取出冷却，石蜡油即附着于小钢圈中。再取一无菌载玻片，火焰上稍加热，将小钢圈平置其上，孔口向上。小钢圈上石蜡油遇载玻片的热即熔化后凝固，钢圈就会固定在载玻片上。用无菌注射器经孔口注入熔化的培养基，培养基量约占小钢圈容量的1/2，注意避免气泡。待培养基凝固后取一消毒盖玻片，火焰上加热后，趁热盖在小钢圈表面，也即固定其上。最后用接种针伸入孔口进行接种。这种方法的优点是形成一种封闭式培养，在显微镜下直接观察菌落时可避免孢子吸入人体，而且不易被污

染，盖玻片也可取下染色后封固制片保存。 （三） 培养检查 标本接种后，每周至少检查2次，观察以下指标：①菌落外观：a.生长速度：缓慢生长菌：7～14d，快速生长菌：2～7d。一般浅部真菌超过2周深部真菌超过4周仍无生长，可报告阴性。b.外观：a.扁平。b.疣状。c.折叠规则或不规则。d.缠结或垫状。e.其他。c.大小：菌落大小用cm来表示，菌落大小与生长速度和培养时间有关。d.质地：a.平滑状。b.粉状。c.粒状。d.棉花状。e.粗毛状。f.皮革状。g.粘液状。h.膜状。e.顔色：不同的菌种表现出不同的顔色，呈鲜艳或暗淡。致病性真菌的顔色多较淡，呈白色或淡黄色，而且其培养基也可变色，如马尔尼菲青霉等，有些真菌菌落不但正面有顔色，其背面也有深浅不同的顔色。

菌落的顔色与培养基的种类、培养温度、培养时间、移种代数等因素有关。所以，菌落的顔 色虽在菌种鉴定上有重要的参考价值，但除少数菌种外，一般不作为鉴定的重要依据。f.菌落的边缘：有些菌落的边缘整齐，有些不整齐。g.菌落的高度和下沉现象：有些菌落下沉现象明显，如黄癣菌、絮状表皮癣菌等，更有甚者菌落有时为之裂开。h.渗出物：一些真菌如青霉、曲霉的菌落表面会出现液滴。i.变异：有些真菌的菌落日久或多次传代培养而发生变异，菌落顔色减退或消失，表面气生菌丝增多，如絮状表皮癣菌在2～3周后便发生变异。②显微镜检查：小培养可置普通显微镜下直接观察，而试管和平皿培养的菌落则需挑起后做

涂片检查。 五、

组织病理学检查 真菌病的组织病理检查与直接镜检培养同样具有相当重要的价值，尤其对深部真菌病的

诊断意义更大，如用特殊染色可提高阳性率。 真菌的组织病理反应与其他一些疾病的组织病理反应极其相似，往往只有在仔细研究了病理切片并发现了真菌之后才考虑到真菌病的诊断。而在这种情况下，标本已被固定，培养有时已不可能进行，组织病理切片就成了真菌感染的主要依据。所以临床上在送病理标本的

同时，要尽可能考虑到真菌感染的可能，以便同时采集标本送真菌实验室进行真菌学检查。 真菌在组织内一般表现为：①孢子：酵母和双相型真菌在组织内表现为孢子。②菌丝：许多真菌在组织中只表现为菌丝。组织中发现无色分隔、分支的菌丝多为念珠菌和曲霉。粗大、不分隔少分支的菌丝为接合菌，多为毛霉、根霉、犁头霉等。粗大、少分支有隔的菌丝为蛙粪霉菌。棕色菌丝为暗色丝孢霉病，由暗色孢科真菌引起。③菌丝和孢子，主要见于念珠菌感染。④颗粒：为组织内由菌丝形成的团块。⑤球囊或内孢囊：球囊内含有内孢子，为

球孢子菌或鼻孢子菌在组织内的特征性结构。 组织病理片中根据形态和染色能基本确定种名的真菌为：荚膜组织胞浆菌、杜波伊斯组织胞浆菌、副球孢子菌、皮炎芽生菌、链状芽生菌、粗球孢子菌、新生隐球菌和鼻孢子菌等。根据组织病理中真菌的形态能确定属而不能确定种的病为：放线菌病、奴卡菌病、无绿藻病、念珠菌病、曲霉病和不育大孢子菌病等。多个属的真菌感染可引起相同的临床表现，在组织病理中真菌的形态无法区别的病有皮肤着生芽生菌病、暗色丝孢霉病、接合菌病、皮肤癣菌病和足菌肿等。足菌肿的颗粒若染色适当，很易确定为放线菌性或真菌性的，也能区别出细菌性颗粒。真菌性颗粒中的菌丝又分为无色或暗色两大类。各种病原菌基本上形成各自顔色、

大小、形成和结构的颗粒，可以初步区别，但最后确定必须依靠真菌培养。 六、

血清学方法 随着诊断技术的进展，以免疫学方法检测真菌病已成为可能，引起深部真菌感染的病原菌主要有白念珠菌、曲霉菌和隐球菌等，传统的检测方法主要为血培养和组织活检，但血培

养历时太长，且深部真菌感染的病原菌常不易培养成功，阳性率较低。而深部真菌感染的临床征象错综复杂，又使得组织活检缺乏典型改变，影响正确诊断，这些都使得这些方法所起的作用极为有限，真菌的抗原、抗体及代谢产物的血清学检查用于深部真菌感染的实验室检测，可取得很好的效果。目前常用的免疫诊断方法有：①特异性抗原的检测：a.乳胶凝集试验（la）。b.酶联免疫试验（eia）。c.荧光免疫测定法（fa）。②特异性抗体检测：由于受检

者都为免疫低下患者，因其致阳性率低，故现已少用。 七、分子生物学方法 近年来随着分子生物学的发展，已有聚合酶链反应（pcr）扩增、分子探针、性酶切片段长度多态性分析（rflp）、dna指纹图谱、随机扩增dna多态性（rapd）等方法。用于深 部真菌病的诊断和分型研究，形成了以pcr技术为基础的一系列分子诊断方法。从这些新技术对多种致病真菌鉴定的应用过程中发现，此类方法具有操作简便、省时省力、特异性、敏感性高的优点。特别是从分子水平对真菌从遗传进化角度阐明菌种间内在的分类学关系，真正达到人们追求已久的自然分类的目的。我们有理由相信，随着pcr及相关技术在临床的应用及更广泛深入的研究，将会对真菌感染的诊断和鉴定产生根本的影响。