不同保存液及放置时间对脐带源间充质干细胞存活率的影响

中国组织工程研究　１９卷　２３　汐２０１５—０６—０４出版　ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＴｉｓｓｕｅＥｎｇ＆ｅｅｆｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈ　Ｊｕｎｅ　４，２０１５　ＶｏＬ１９，Ｎｏ．２３　ＷＷＷ．ＣＲＴＥＲ．ｏｒｇ　不同保存液及放置时间对脐带源间充质干细胞存活率的影响　李一－Ｅ－刚’，贲亮　，韩宇　，毕薇薇　（’四平市中心医院，吉林省四平市１３６０００；　吉林省拓华生物科技有限公司，吉林省四平市　１３６０００）　文章亮点：　１在实际应用中，制备的干细胞不能及时应用，因此合适的保存溶液和放置时间对细胞活性以及细胞活率的　李志刚，男，１９７０年生，　影响是广大基础研究者和临床应用人员最关心的问题。　吉林省四平市人，汉族，　２干细胞的常规活性检测方法是直接锥虫蓝计数，该实验是在脐带源间充质干细胞保存４８　ｈ后重新接种并观　１９９６年吉林医学院毕业，　察培养２４　ｈ的细胞贴壁生长状态，进一步从生长和增殖能力角度判断其活性。　主任医师，主要从事神经　外科疾病的手术治疗和干　３实验通过模拟实际运输的动态温度状态，比４℃冰箱的静态放置更具有实际应用价值。　细胞在神经系统疾病中的　关键词：　研究。　于镪瞻：睽带臃血干缅匏：保存时阃；睹带源闻充硬于镪泡：培养基：低分子旰素钙：镪匏总数：存活率：　保存液　通讯作者：毕薇薇，博士，　主题词：　主任技师，吉林省拓华生　物科技有限公司，吉林省　脐带；闻质于缎泡：培养基：保存　生物学　四平市１３６０００　摘要　中图分类号：Ｒ３９４　背景：干细胞制　塞　后的放戛　间与其存　率的关系是临床应用安全、有效的基础。目的　妻　嘉　．４　：观察不同保存液及不同保存时间对脐带源间充质干细胞存活率的影响，为干细胞有效期的确定提供重　；２　＿０３６６４４．３０４５　要依据。　稿件接受：２０１５－０５．１２　方法：选用脐带源间充质干细胞制备干细胞制剂，分别采用生理盐水、培养基、培养基＋生理盐水、生理盐水ｈｔｔｐ：／／ＷＷＷｃｒｔｅｒ．ｏｒｇ　含表皮生长因子、培养基含低分子肝素钙悬浮保存。使用冷藏箱模拟细胞运输条件，分别在第０，６，１２，１８，　２４，３０，３６，４２，４８小时取样，进行细胞总数和细胞活率的检测。　结果与结论：各组在２４　ｈ内的细胞数量和细胞活率差别不大。２４　ｈ后，培养基组和培养基含低分子肝素　钙组的细胞总数和细胞活率优于生理盐水含因子组、生理盐水组、培养基＋生理盐水组。干细胞制剂制备　完成后，冷藏运输２４　ｈ内细胞活率可达９０％以上，保存液中的营养成分及合适的ｐＨ值，可使细胞活率　显著提高。　李志戳．贲亮．韩宇．毕薇薇．不固保存波及放置时阃对脐带源　充质于细跑存活率的影　！．中国组织Ｉ程　碜｝究．２０１５．１９（２３）：３６６４—３６６８．　ｄｏｉ：ｌ０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．２０９５－４３４４．２０１５．２３．０１０　Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｐｌａｃｉｎｇ　ｔｉｍｅ　ｏｎ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　ｃｏｒｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　Ｌｌ　Ｚｈｉ．ｇａｎｇ’，Ｂｅｎ　Ｌｉａｎｇ　，Ｈａｎ　Ｙｕ　，Ｂｉ　Ｗｅｉ—ｗｅｉ　（￣Ｓｉｐｉｎｇ　Ｃｅｎｔｅｒ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｉｐｉｎｇ　１　３６０００，Ｊｉｌｉｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　Ｃｈｉｎａ；　Ｔｕｏｈｕａ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｓｉｐｉｎｇ　１３６０００，．Ｊｉｌｉｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ　ＢＡＣＫＧＲＯＵＮＤ：Ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｐｌａｃｉｎｇ　ｔｉｍｅ　ａｆｔｅｒ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｅｌＩ　ｓｕｒｖｉｖａＩｉｓ　ｔｈｅ　ｂａｓｉｓ　０ｆ　ｓａｆｅｔｙ　ａｎｄ　ｅｆｆｅ￣ｉｖｅｎｅｓｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｌｉｎｉｃａＩ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．　ＯＢＪＥＣＴⅣＥ：ＴＯ　ｏｂｓｅｒｖｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｔｉｍｅ　ｏｎ　ｓｕｒｖｉｖａＩ　ｒａｌｅ　Ｏｆ　ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　ｃｏｒｄ—ｄｅｒｉｖｅｄ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ．ａｎｄ　ｔｏ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｉｍｐｏ￣ａｎｔ　ｅｖｉｄｅｎｃｅ　ｆｏｒ　ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ　ｏｆ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ．　ＭＥＴＨｏＤＳ：ＵｍｂｉｌｉｃａＩ　ｃｏｒｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａＩ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ｔｏ　ｐｒｅｐａｒｅ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌＩ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ．　ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ　ｉｎ　ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓａｌｉｎｅ，ｍｅｄｉｕｍ，ｍｅｄｉｕｍ＋ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓａｌｉｎｅ，ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓａｌｉｎｅ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｅｐｉｄｅｒｍａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ，ａｎｄ　ｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｌｏｗ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｈｅｐａｒｉｎ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ．Ｃｏｌｄ　ｃｌｏｓｅｔ　ｗａｓ　ｅｓｌｅｃｔｅｄ　ｆｏｒ　ｉｍｉｔａｔｉｎｇ．ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｔｒａｎｓｐｏ￣ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ａｔ　０，６，１２，１８，２４，３Ｏ，３６，　Ｌｉ　Ｚｈｉ－ｇａｎｇ，Ｃｈｉｅｆ　ｐｈｙｓｉｃｉａｎ，　４２　ａｎｄ　４８　ｈｏｕｒｓ．ＴｏｔａＩ　ｃｅｌｌ　ｎｕｍｂｅｒ　ａｎｄ　ｃｅｌｌ　ｓｕｒｖｉｖａＩ　ｒａｔｅ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ．　Ｓｉｐｉｎｇ　Ｃｅｎｔｅｒ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｉｐｉｎｇ　ＲＥＳＵＬＴＳ　ＡＮＤ　ＣＯＮＣＬＵＳｌＯＮ：Ｔｈｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ｉｎ　ｃｅｌＩ　ｎｕｍｂｅｒ　ａｎｄ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　ｎｏｔ　ｇｒｅａｔ　ｗｉｔｈｉｎ　２４　ｈｏｕｒｓ　ｉｎ　１３６０００．Ｊｉｌｉｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ．Ｃｈｉｎａ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ．Ｔｗｅｎｔｙ－ｆｏｕｒ　ｈｏｕｒｓ　Ｉａｔｅｒ．ｔｏｔａＩ　ｃｅｌｌ　ｎｕｍｂｅｒ　ａｎｄ　ｓｕｒｖｉｖａＩ　ｒａｔｅ　ｗｅｒｅ　ｂｅ￣ｅｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ａｎｄ　ｍｅｄｉｕｍ　Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ：Ｂｉ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｌｏｗ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｈｅｐａｎｎ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｇｒｏｕｐｓ　ｔｈａｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓａｌｉｎｅ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｅｐｉｄｅｒｍａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ，　Ｗｅｉ－ｗｅｉ，Ｍ　Ｄ，Ｃｈｉｅｆｔｅｃｈｎｉｃｉａｎ，　ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓａｌｉｎｅ，ａｎｄ　ｍｅｄｉｕｍ＋ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓａｌｉｎｅ　ｇｍｕｐｓ．Ｔｈｅｓｅ　ｆｉｎｄｉｎｇｓ　ｓｕｇｇｅｓｔ　ｔｈａｔ　ａｆｔｅｒ　ｓｔｅｍ　ｅｃｌ　ｌＴｕｏｈｕａ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ．ｔｈｅ　ｃｅｌＪ　ｓｕｒｖｉｖａＪ旧ｔｅ　ａｃｎ　ｒｅａｃｈ　ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　９０％ｗｉｔｈｉｎ　２４　ｈｏｕｒｓ　ｕｎｄｅｒ　ｅｒｆｒｉｇｅｒａｔｅｄ　ｔｒａｎｓｐｏｄ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．　Ｃｏ．Ｌｔｄ．．Ｓｉｐｉｎｇ　１３６０００．Ｊｉｌｉｎ　ＮｕｔｒｉｔｉｏｎａＩ　ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｐｒｏｐｅｒ　ｐＨ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｃａｎ　ｍａｋｅ　ｔｈｅ　ｃｅｌＩ　ｓｕｒｖｉｖａＩ　ｒａｔｅ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｇｒｅａｔｌｙ．　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ　Ｓｕｂｊｅｃｔ　ｈｅａｄｉｎｇｓ：Ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　Ｃｏｒｄ；Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　Ｓｔｅｍ　Ｃｅｌｌｓ；Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｍｅｄｉａ；Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａ　３６６４　Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ　１０００２，Ｓｈｅｎｙａｎｇ　１１０１８０　ｗｗｗ．ＣＲＴＥＲ．ｏｒｇ　李志刚．等　不同保存波及故置时闯对瞵带泺闻充质于细胞存活率的影响　Ｌ１　ＺＧ，Ｂｅｎ　Ｌ，Ｈａｎ　Ｙ，Ｂｉ　ＷＷ．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｐｌａｃｉｎｇ　ｔｉｍｅ　ｏｎ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　一ｃ尺矾。俘　ｃｏｒｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ．Ｚｈｏｎｇｇｕｏ　Ｚｕｚｈｉ　Ｇｏｎｇｃｈｅｎｇ　Ｙａｎｊｉｕ．２０１　５；１　９（２３）：３６６４－３６６８．　０　引言Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　脐带源闻充质千细胞制备、保存、细胞活性检测所用主要试剂和仪器　试剂和仪器　ａ—ＭＥＭ培养基　血清　胰蛋白酶　来源　ＨｙＣｌｏｎｅ公司，ＳＨ３０２６５．Ｏ１　ＨｙＣｌｏｎｅ公司，ＳＶ３００８７．０２　Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司　脐带源间充质干细胞具有自我更新、多项分化潜能以　及较强的免疫调节作用，而且其来源丰富、易于培养，这　些特性使其在组织损伤性疾病和免疫性疾病的治疗中有　重要的应用价值【１刮。研究显示，脐带源间充质干细胞已　经在多种疾病的临床试验中应用，包括神经系统疾病、心　脏疾病、肝纤维化、骨科疾病及自身免疫性疾病［５－１２】，还　可应用于降低器官移植后的免疫排斥反应，提高器官移植　的成功率【１　伯ｌ。　细胞制备技术和治疗方案具有多样性、复杂性和特殊　性。国际国内相继出台了一些干细胞应用指导原则及规范，　以确保干细胞治疗的安全性和有效性［１６－１８】。由于种种原因，　制备的干细胞时常不能立即应用，因此保存溶液和放置时间　对细胞活性以及细胞活率的影响是广大基础研究者和临床　应用人员最关心的问题。干细胞的活率和活性会影响到患者　的医疗安全和疗效。中华人民共和国国家卫生和计划生育委　员会在２０１　３年３月份发布的《干细胞制剂质量控制及临床前　研究指导原则》中明确提出要对干细胞制剂的稳定性及有效　期进行确定。为此，本实验制备脐带间充质干细胞制剂，用　玻璃瓶包装封盖，监测不同保存液及不同放置时间的细胞存　活率，为干细胞有效期的确定提供重要依据。　１　材料和方法Ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ａｎｄ　ｍｅｔｈｏｄｓ　设计：体外细胞学观察实验。　时间及地点：于２０１４年８至９月在四平市中心医院中心　实验室完成。　材料：　脐带　表脐带组织由四平市中心医院提供，无菌采　集剖宫产产妇自愿捐献的脐带组织，乙肝、丙肝、艾滋、　梅毒等病毒检测均阴性。实验经四平市中心医院伦理委员　会批准。　实验方法：　缅　保荐磁　总悬浮细胞的溶液体积为５０　ｍＬ。　①生理盐水组：生理盐水４７．５　ｍＬ＋白蛋白２．５　ｍＬ。②培养　基组：无酚红培养基４７．５　ｍＬ＋白蛋白２．５　ｍＬ。③培养基＋　生理盐水组：无酚红培养基：生理盐水＝１：１（共４７．５　ｍＬ）＋　白蛋白２．５　ｍＬ。④生理盐水含因子组：生理盐水４７．５　ｍＬ＋　白蛋８２．５　ｍＬ＋２０　ｐｇ／Ｌ表皮生长因子。⑤培养基含低分子　肝素钙组：无酚红培养基４７　ｍＬ＋白蛋白２．５　ｍＬ＋１支低分子　肝素钙（０．４　ｍＬ）。　篇　司充赁于缅艇嘲　齑：按照实验室建立的　脐带问充质干细胞的培养方法，分离培养脐带源间充质干　细　伯】。取５０瓶（ＴＩ８２）生长状态良好的第４代脐带源间充　质干细胞Ｃ２０１４０４２５，显微镜下分别观察并照相，各瓶细　｜ＳＳＮ　２ｏ９５－４３４４　ＣＮ　２１－１５８１／Ｒ　Ｃ０ＤＥＮ：ｚＬＫＨＡＨ　自蛋白　奥克特珐玛药剂生产有限公司，注册号：￥２０１３００３０　生理盐水　巨能药业　无酚红培养基　Ｇｉｂｃｏ公司　锥虫蓝　ＳＩＧＭＡ公司，Ｔ８０７０　低分子肝素钙　葛兰素史克，注册号：Ｈ２００８０４８０　细胞培养瓶　ＪＥＴ公司，ＪＥＴ－ＴＣＦ０１１６００　移液管、离心管　Ｃｏｍｉｎｇ公司　细胞计数板　上海求精生化仪器有限公司　低温运输箱　广州赛能冷藏科技有限公司　离心机Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ，Ｘ３Ｒ　正置显微镜　Ｏｌｙｍｐｕｓ公司，ＣＸ３１　倒置显微镜　Ｏｌｙｍｐｕｓ公司，ＣＫＸ４１　生物安全柜　北京东联哈尔仪器公司．ｃｌａｓｓ　ＩＩ　ＴＹＰＥ　Ａ２　胞生长状态及融合率基本一致，融合率均达９５％。每１０瓶　细胞为１组，制备成１支干细胞制剂，选择对干细胞培养技　术熟练的两名技术人员操作，具体步骤为：将各瓶干细胞　随机分组转移至生物安全柜内，弃去培养基，ＰＢＳ洗涤，　每瓶加入６　ｍＬ胰蛋白酶消化３　ｍｉｎ，显微镜下观察细胞完　全脱离瓶底，加入５倍胰酶量的ＰＢＳ终止消化。收集细胞悬　液于５０　ｍＬ离心管中，１　０００　ｒ／ｍｉｎ离心５　ｍｉｎ，弃上清，ＰＢＳ　洗涤３次。按不同分组用相应保存液混匀悬浮细胞，７０　Ｕｍ　滤膜过滤后盛装于５０　ｍＬ无菌玻璃瓶中　取样计细胞总数　及活率后封口。此时，记为第０小时。　保存取簪　将制备的５瓶干细胞制剂保存于低温运输箱　中，模拟运输条件，每小时轻轻晃动１次，使细胞悬起。每　间隔６　ｈ从低温运输箱中取出细胞瓶，混匀细胞，在生物安　全柜中操作，取样１次，即第６，１２，１８，２４，３０，３６，　４２，４８小时取样，并交由２名具有细胞计数丰富经验的技　术人员双盲进行细胞总数、细胞活率检测，每个样本平行　检测３次，记录检测结果。最后一次检测结束后，将细胞重　新接种于细胞瓶中，待细胞贴壁培养２４　ｈ后观察细胞形态　及生长状态，照相。　细菌．径　取哥伦比亚血琼脂平板，将第０，６，１２，　１８，２４，３０，３６，４２，４８小时取出的样本接菌环取样涂　板，置于３７℃，体积分数为５％ＣＯ２培养箱培养２４　ｈ，观　察有无菌落。　３６６５　０　０住１２倡　李志刚．等．不确保存液及放置时闻对脐带源间充质干缅瞻存活率的影响　∞　一｛５；∞镗钙　ｃ尺矾。但　２．２随着时间的延长细胞数量和活率的变化　随着时间　的延长，生理盐水组细胞数量及活率减少的最快，尤其是　在１８　ｈ后尤为明显。生理盐水含因子组比单纯生理盐水组　择无酚红培养基是考虑到其没有颜色便于临床应用。根据　多年实验经验，如果细胞直接悬浮于生理盐水中会发生聚　集，造成细胞死亡从而减少有效细胞数量并且在临床输注　稍好些，但差别不明显。细胞数量和活率下降最慢的是培　养基含低分子肝素钙组，第４８小时时细胞活率还在９０％以　上。培养基组与培养基含低分子肝素钙组结果无明显差别。　培养基＋生理盐水组结果介于中间。干细胞制剂在各时间点　取样检测结果见图１，图２。　时也会堵塞输血器及微血管。白蛋白具有维持胶体渗透压　和结合离子的能力，防止细胞聚集的作用。人血白蛋白是　临床常用药物，所以添加到干细胞制剂中不会影响使用安　全。　∞　佰¨仃伯｛寻伯伯　弱　４　２　８　３　９　５　５　２　５　８　２　９　Ｏ　实验结果显示，生理盐水组采用单纯盐水加白蛋白保　２．３　细胞处理前及各组细胞在模拟运输４８　ｈＡ重新接种　并培养２４　ｈ的细胞贴壁生长状态在未进行制备处理时的　存，随着放置时间的延长，细胞数量和活率都明显下降，　尤其是在２４　ｈ后，细胞数量由最初的７．２４ｘｌ０　降至　细胞融合率达９５％，生理盐水组细胞贴壁率为５％。培养基　组细胞贴壁率为６５％，培养基＋生理盐水组细胞贴壁率为　３０％，生理盐水含因子组细胞贴壁率为５％，培养基含低分　子肝素钙组细胞贴壁率为７０％，见图３。　２．４冷藏箱温度监测结果每隔３　ｈ，观察冷藏运输箱的　温度并记录，见表１。　表１　冷藏箱温度监测结果　Ｔａｂｌｅ　１　Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ　ｆｏｒ　ａ　ｃｏｏｌｅｒ　时间（ｈ）　温度（℃）　３讨论Ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ　目前，国际上已有３００多项干细胞的临床试验研究已　获批准进行。脐带源间充质干细胞因其具有多向分化潜能、　低免疫原性、无致瘤性等诸多优势在国内研究和应用的比　较早而且最广泛［２ｏ－２６ｌ。大多数实验室均可培养出脐带源间　充质干细胞，但细胞的质量却差别较大。各研究和应用单　位都是参照国家的指导原则再建立自己的质量标准　删，　因此在临床试验研究中的质控标准有所不同。临床应用前　细胞的数量和活率对治疗的安全性和有效性至关重要。目　前，临床试验输注干细胞常用生理盐水悬浮输注，生理盐　水的ｐＨ值为５．５左右，偏酸性，而且其中没有任何营养成　分，干细胞悬浮在其中长期运输会影响细胞活率，因此在　细胞运输液中添加营养及保护成分来改变干细胞的运输环　境，对比不同运输液对干细胞数量及活率的影响。实验选　２０９５－４３４４　ＣＮ　２１－１５８１／Ｒ　ｃｏＤＥＮ：ｚＬＫＨＡＨ　２．９３ｘｌ０　，细胞活率由刚制备完成时的９８．２０％降至　４５．６３％。而生理盐水含因子组在生理盐水组的基础上添加　了表皮生长因子，并没有明显改变，说明细胞因子对悬浮　状态下的间充质干细胞无明显促进作用。培养基组用无酚　红培养基来悬浮细胞，使细胞在放置过程中有了营养成分，　在细胞数量和活率上都好于生理盐水组和生理盐水含因子　组，尤其是２４　ｈ后，两个指标下降均不明显。培养基含低　分子肝素钙组是在培养基组上增加肝素钙，肝素钙也是临　床常用药物，起到抗凝的作用，实验添加此种药物观察其　能否增加对细胞的保护作用，结果表明未明显起到保护作　用，与培养基组相似。而培养基＋生理盐水组是盐水和培养　基等比混合，对细胞的保护作用介于单纯使用生理盐水和　培养基之间。　实验在干细胞放置４８　ｈＡ，重新接种到培养瓶中，　结果培养基组和培养基含低分子肝素钙组细胞贴壁约　７０％，而生理盐水组则有５％贴壁。总体结果说明，脐带　间充质干细胞无论用何种保护液运输，在２４　ｈ内细胞数　量和活率无明显差别，但２４　ｈＡ，悬浮液中有无营养成　分对细胞数量和活率有一定的影响。重新接种的结果表　明，细胞放置４８　ｈ后细胞计数活率虽然不低，但贴壁增　殖能力下降。同时，实验还监测运输温度，模拟了实际　运输的环境，提示温度的升高可能也是造成细胞死亡的　原因之一。以上实验结果为干细胞应用研究中的运输环　节提供了基础依据。　孝贡窟不实验设计为毕薇薇、李志刚，实验实施为贲亮、　韩宇。李志刚成文，毕薇薇审校并对文章负责。　益傅窕文章及内容不涉及相关利益冲突。　伦理冕　脐带标本的采集经四平市中心医院伦理委员会批　准，并经产妇（或家属）书面同意用于科学研究。　锥虫蓝一是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完　整性　还常用于检测细胞是否存活，正常的活细胞，胞膜结构完　整，能够排斥锥虫蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞　膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被锥虫蓝染成蓝色。通　常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。　耆　文章为原创作品，无抄袭剽窃，无泄密及署名和　专利争议，内容及数据真实，文责自负。　３６６７　ＩＳＳＮ　李志嘲．等　不同保存液及放置时间对侪带滚闯充覆干缅瞻存活率的影响　４参考文献Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ　『１１　Ｇａｍｉｅ　Ｚ。ＭａｃＦａｒｌａｎｅ　ＲＪ，Ｔ０ｍｋｉｎｓｏｎ　Ａ，ｅｔ　ａ１．ＳｋｅｌｅｔａＩ　ｔｉｓｓｕｅ　ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ｕｓｉｎｇ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｏｒ　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｓｔｅｍ　ｃｅｉｌｓ：　ｃｌｉｎｉｃａＩ　ａｎｄ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａＩ　ｄａｔａ．Ｅｘｐｅｒｔ　Ｏｐｉｎ　ＢｉｏＩ　Ｔｈｅｒ．２０１　４：　１４（１１、：１６１１．１６３９．　【２２］　Ｗａｎｇ　Ｇ，Ｌｉ丫Ｗａｎｇ　Ｙ　ｅｔ　ａ１．Ｒｏｌｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏ—ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　ｃｏｒｄ　Ｗｈａｒｔｏｎ’ｓ　ｉｅｌｌｙ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｗｉｔｈ　ｒａｔ　ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｗｉｔｈ　ｄｉａｂｅｔｅｓ　ｍｅｌｌｉｔｕｓ．Ｅｘｐ　Ｔｈｅｒ　Ｍｅｄ．２０１４；８（５）：１３８９—１３９６．　【３】　Ｗｏｏｄｗｏｒｔｈ　ＴＧ，Ｆｕｒｓｔ　ＤＥ．Ｓａｆｅｔｙ　ａｎｄ　ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　ｃｏｒｄ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａＩ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ—ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ　ｓｙ￣ｅｍｉｃ　ｌｕｐｕｓ　ｅｒｙ［ｈｅｍａｔｏｓｕｓ　ｎｅｐｈｒｉｔｉｓ：ｔｉｍｅ　ｆｏｒ　ａ　ｄｏｕｂｌｅ－ｂｌｉｎｄ　ｐｌａｃｅｂｏ—ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　ｔｒｉａＩ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｅｆｆｉｃａｃｙ．　Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　Ｒｅｓ　Ｔｈｅｒ．２０１　４：１　６（４）：１　１　３．　【４】　Ｗｅｎ　Ｙ，Ｇｕ　Ｗ，Ｃｕｉ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｐｌａｔｅｌｅｔ—ｒｉｃｈ　ｐｌａｓｍａ　ｅｎｈａｎｃｅｄ　ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　ｏｃｒｄ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ—ｂａｓｅｄ　ｂｏｎｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ａｒｃｈ　Ｏｒａｌ　Ｂｉｏ１．２０１４；５９（１１、：１１４６—１１５４．　【５］　Ｗａｋａｏ　Ｓ，Ｍａｔｓｕｓｅ　Ｄ，Ｄｅｚａｗａ　Ｍ．Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ａｓ　ａ　ｓｏｕｒｅｃ　ｏｆ　ｓｃｈｗａｎｎ　ｃｅｌｌｓ：ｔｈｅｉｒ　ａｎｔｉｃｉｐａｔｅｄ　ｕｓｅ　ｉｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａＩ　ｎｅｒｖｅ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．ＣｅｌｌｓＴｉｓｓｕｅｓ　Ｏｒｇａｎｓ．２０１４；２００（１）：３１－４１．　【６】　Ｃｕｉ　Ｂ，Ｌｉ　Ｅ，Ｙａｎｇ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．Ｈｕｍａｎ　ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　ｃｏｒｄ　ｂｌｏｏｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａＩ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌＩ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｓｐｉｎａｌ　Ｃｏｒｄ　ｉ￣ｕｒｙ　Ｅｘｐ　Ｔｈｅｒ　Ｍｅｄ．２０１　４；７（５）：１　２３３—１　２３６．　【７】Ｘｉｏｎｇ　Ｎ。Ｚｈａｎｇ　Ｚ，Ｈｕａｎｇ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．ＶＥＧＦ—ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ　ｈｕｍａｎ　ｕｍｂｉｌｉｃａＩ　ｃｏｒｄ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ，ａｎ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｔｈｅｒａｐｙ　ｓｔｒａｔｅｇｙ　ｆｏｒ　Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ‘ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ．Ｇｅｎｅ　Ｔｈｅｒ．２０１　１；１　８（４）：　３９４．４０２．　［８　８】Ｗａｎｇ　Ｘ，Ｈｕ　Ｈ，Ｈｕａ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｅ讹ｃｌ　ｏｆ　ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　ｃｏｒｄ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｒｏｍａＩ　ｃｅｌｌｓ　ｏｎ　ｍｏｔｏｒ　ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｉｄｅｎｔｉｃａＩ　ｔｗｉｎｓ　ｗｉｔｈ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｐａｌｓｙ：ｐｉｌｏｔ　ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｆｆｉｃａｃｙａｎｄ　ｈｅｒｅｄｉａｔｒｙｆａｃｔｏｒｓ．Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ．２０１５；１７（２）：　２２４－２３１．　【９】Ｌｅｅ　ＨＪ，Ｌｅｅ　ＪＫ，Ｌｅｅ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｕｍｂｉｌｉｃａＩ　ｃｏｒｄ　ｂｌｏｏｄ．ｄｅｒｉｖｅｄ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａＩ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ＡＩｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ　Ｌｅｔｔ．２０１　０；４８１（１）：３０—３５．　【１　０】Ｅｌ—Ｊａｗｈａｒｉ　ＪＪ，Ｅｌ—Ｓｈｅｒｂｉｎｙ　ＹＭ，Ｊｏｎｅｓ　ＥＡ，ｅｔ　ａ１．Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ．ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ　ａｎｄ　ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．ＱＪＭ．２０１４　１　０７（７）：５０５－５１　４．　【１　１】Ｘｕｅ　ＨＬ，Ｚｅｎｇ　ＷＺ，Ｗｕ　ＸＬ，ｅｔ　ａ１．Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｕｍｂｉｌｉｃａＩ　ｏｃｒｄ—ｄｅｒｉｖｅｄ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ａｎｄ．柏ａｅ　ｌｉｖｅｒ　ｄｉｓｅａｓｅ．　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ　Ｐｒｏｃ．２０１５；４７（２）：４１２－４１８．　【１２】Ｓａｎｔｏｓ　Ｎａｓｃｉｍｅｎｔｏ　Ｄ，Ｍｏｓｑｕｅｉｒａ　Ｄ，Ｓｏｕｓａ　ＬＭ，ｅｔ　ａ１．Ｈｕｍａｎ　ｕｍｂｉｌｉｃａＩ　ｃｏｒｄ　ｔｉｓｓｕｅ．ｄｅｒｉｖｅｄ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａＩ　ｓｔｒｏｍａＩ　ｃｅｌｌｓ　ａｔｔｅｎｕａｔｅ　ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ　ａｆｔｅｒ　ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ　ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ｐｒｏａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ，ａｎｔｉａｐｏｐｔｏｔｉｃ，ａｎｄ　ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ　ｃｅｌｌ—ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｓｔｅｍ　ＣｅｌＩ　Ｒｅｓ　Ｔｈｅｒ．２０１４；５（１　１：５．　３】ＣｈａｏＹＨ，ＷｕＨ　Ｐ－ＷｕＫＨ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｉｎｃｒｅａｓｅｉｎ　ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　Ｔ　ｃｅＩＩｓ　ａｆｔｅｒ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　ｃｏｒｄ—ｄｅｒｉｖｅｄ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｄｕｒｉｎｇ　ｓｅｐｓｉｓ．　ＰＬｏＳ　ＯＲｅ．２０１４；９ｆ１０）：ｅｌ１０３３８．　３６６８　ｗｗｗ．ＣＲＴＥＲ．ｏｒｇ　【１４】Ｗｕ　ＫＨ，－Ｉ＇ｓａｉ　Ｃ，Ｗｕ　Ｈ　Ｐ，ｅｔ　ａ１．Ｈｕｍａｎ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｘ　ｖｉｖｏ　ｅｘｐａｎｄｅｄ　ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　ｃｏｒｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ：　ｅｎｈａｎｃｅ　ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ　ａｆｔｅｒ　ｃｏｒｄ　ｂｌｏｏｄ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．Ｃｅｌｌ　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２０１３；２２（１１１：２０４１－２０５１．　ｆ１　５１　Ａｕｔｅｔｔａ　ＪＪ，Ｅｉｄ　ＳＫ，Ｗｕｔｔｉｓａｒｎｗａｔｔａｎａ　Ｐ，ｅｔ　ａ１．Ｈｕｍａｎ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｒｏｍａｌ　ｃｅｌｌｓ　ａｔｔｅｎｕａｔｅ　ｇｒａｆｔ－．ｖｅｒｓｕｓ－－ｈｏｓｔ　ｄｉｓｅａｓｅ　ａｎｄ　ｍａｉｎｔａｉｎ　ｇｒａｆｔ·－ｖｅｒｓｕｓ－·ｌｅｕｋｅｍｉａ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｆｏＩｌｏｗｉｎｇ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ　ｂｏｎｅ　ｍａｒｒｏｗ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．Ｓｔｅｍ　Ｃｅｌｌｓ．２０１　５；３３（２）：６０１．６１　４．　［１６】　《中国组织工程研究与临床康复》杂志社学术部．《干细胞临　床转化指南》：干细胞临床应用标准与规则【Ｊ】．中国组织工程研究　与临床康复，２０１０，１４（３６）：６７９８—６７９９．　【１７】国家食品药品监督管理局．《人体细胞治疗研究和制剂质量控制　技术指导原则》【ＥＢ／ＯＬ］．ｈｔｔｐ：ｆｗｗｗ．ｓｄａ．ｇｏｖ．ｃｎ／ＷＳ０１／　ＣＬ０２３７／１　５７０９．ｈｔｍＩ＿２００３—０３－２０　【１　８】Ｂｏｓｓｅ　Ｒ，Ｓｉｎｇｈｏｆｅｒ－Ｗｏｗｒａ　Ｍ，Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．Ｇｏｏｄ　ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ　ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ｆｏｒ　ｓｏｍａｔｉｃ　ｃｅｌｌ　ａｎｄ　ｇｅｎｅ　ｔｈｅｒａｐｙ．Ｓｔｅｍ　Ｃｅｌｌｓ．１　９９７；１　５　Ｓｕｐｐｌ　１：　２７５．２８０．　【１９】毕薇薇，郭立斌，李志刚．人脐带源间充质干细胞的培养及生物学　性状［Ｊ】．中国现代医学杂志，２００９．１９（１０）：１５１１－１５１３．　【２０】Ｅｆｆｅｋｈａｒ—Ｖａｇｈｅｆｉ　ＳＨ，Ｚａｈｍａｔｋｅｓｈ　Ｌ，Ｓａｌｅｈｉｎｅｊａｄ　ｅｔ　ａＩ．　Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｅｕｒｏｇｅｎｉｃ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　ｃｏｒｄ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｃｅｌｌｓ；ａ　ｔｉｍｅ－－ａｎｄ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ－－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｍａｎｎｅｒ．Ｉｒａｎ　Ｂｉｏｍｅｄ　Ｊ．２０１　５：１　９（２）：８２—９０．　【２１】Ｆｒａｕｓｉｎ　Ｓ，Ｖｉｖｅｎｔｉ　Ｓ，Ｖｅｒｇａ　Ｆａｌｚａｃａｐｐａ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｗｈａｒｔｏｎ’ｓ　ｊｅｌｌｙ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｒｏｍａｌ　ｃｅｌｌｓ：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｅｕｒｏｎａｌ　ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ　ａｎｄ　ｃｕｒｒｅｎｔ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｎｅｕｒ０ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉＯｎ　ｒｅｓｅａｒｃｈ．Ａｃｔａ　Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．２０１　５　Ｍａｒ　３．　【Ｅｐｕｂ　ａｈｅａｄ　ｏｆ　ｐｒｉｎｔ］　『２２１　Ｃｏｓｋｕｎ　Ｈ，Ｃａｎ　Ａ．Ｔｈｅ　ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎ　ｖ　Ｊｖｏ　ｔｏ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　ｃｏｒｄ　ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ　ｓｔｒｏｍａｌ　ｃｅｌｌｓ．Ｐｌａｃｅｎｔａ．２０１　５；３６（２）：２３２．２３９．　『２３１　Ｍａｌｅｋｉ　Ｍ，Ｇｈａｎｂａｒｖａｎｄ　Ｒｅｚａ　Ｂｅｈｖａｒｚ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｉｎ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｈｕｍａｎ　ａｄｕｌｔ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ．Ｉｎｌ　Ｊ　Ｓｔｅｍ　Ｃｅｌｌｓ．２０１４：７（２）：１１８．１２６．　［２４】Ｓｈａｅｒ　Ａ，Ａｚａｒｐｉｒａ　Ｎ，Ａｇｈｄａｉｅ　ＭＨ，ｅｔ　ａ１　Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｈｕｍａｎ　Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｒｏｍａｌ　Ｃｅｌｌｓ　Ｄｅｒｉｖｅｄ　ｆｒ０ｍ　ＰｌａｃｅｎｔａＩ　Ｄｅｃｉｄｕａ　Ｂａｓａｌｉｓ；Ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　ｃｏｒｄ　Ｗｈａｒｔｏｎ。ｓ　Ｊｅｌｌｙ　ａｎｄ　Ａｍｎｉｏｔｉｃ　Ｍｅｍｂｒａｎｅ．Ｐａｋ　Ｊ　Ｍｅｄ　Ｓｃｉ．　２０１　４：３Ｏ（５）：１　０２２．１　０２６．　【２５】Ｍｕｅｌｌｅｒ　ＡＡ，Ｆｏｒｒａｚ　Ｎ，Ｇｕｅｖｅｎ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｉｃ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｗｈａｒｔｏｎ　ｊｅｌｌｙ　ｂｉｏｐｓｙ　ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｒｏｍａｌ　ｅｃｌｌｓ　ａｆｔｅｒ　ｓｅｒｕｍ－ｆｒｅｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｐｌａｓｔ　Ｒｅｃｏｎｓｔｒ　Ｓｕｒｇ．２０１４：１３４（１）：５９ｅ．６９ｅ．　【２６】Ｎａｇａｍｕｒａ—Ｉｎｏｕｅ　Ｈｅ　Ｈ．Ｕｍｂｉｌｉｃａｌ　ｃｏｒｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ：Ｔｈｅｉｒ　ａｄｖａｎｔａｇｅｓ　ａｎｄ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｕｔｉｌｉｔｙ．Ｗｏｄｄ　Ｊ　Ｓｔｅｍ　Ｃｅｌｌｓ．２０１４；６（２１：１９５—２０２．　【２７】张可华，纳涛，刘静，等．建立间充质干细胞制剂质量控制评价体系　【Ｃ】．南宁：２０１３年中国药学大会暨第十三届中国药师周论文集，　２０１３－１１－Ｏ２．　【２８】孙瑞婷，陈瑶瑶，王华，等．脐带来源间充质干细胞的制备及其质　量检定【Ｊ】．中国医药生物技术，２０１３，８（６）：４０１－４０７．　ＰＯ．Ｂｏｘ　１０００２，Ｓｈｅｎｙａｎｇ　１１０１８０　ｗｗｗ．ＣＲＴＥＲ．ｏｒｇ