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艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南

（试行）

A Guideline for Quality Assurance of CD4+ T Lymphocyte Test in People Living with HIV/AIDS

中国疾病预防控制中心

2006年2月

本指南由中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心艾滋病参比实验室组织有关专家撰写，由中国疾病预防控制中心批准执行。

编写主持人：

蒋岩

编写人员 ：

肖瑶 蒋岩 裴雪涛 刘艳荣 仲人前 苏旭 姚均 尚红 于世北 徐建青

编写单位：

中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心

参编单位：

军事医学科学院野战输血研究所 上海第二军医大学长征医院 北京大学人民医院血液病研究所

中国疾病预防控制中心辐射防护和核安全医学所 中国医科大学附属第一医院 顾问：

Francis F. Mandy

加拿大公共卫生局疾病预防控制中心国家免疫学实验室

Thomas J. Spira,

美国艾滋病性病与结核病预防中心免疫和诊断系临床 免疫学实验室 Trover Peter

克林顿基金中国项目实验室专家

Tao Ding

加拿大公共卫生局疾病预防控制中心国家免疫学实验室

前 言

随着我国艾滋病患者抗病毒治疗和自愿咨询和检测（VCT）工作的深入开展，对CD4+T淋巴细胞的检测需求日益增加。截至2005年，全国已经有近百台各型流式细胞仪和/或CD4+T淋巴细胞计数仪直接服务于艾滋病病毒感染者和艾滋病患者，这些仪器在艾滋病防治工作中发挥着重要作用。为了保证实验室CD4+T淋巴细胞的检测质量，特制定适合我国现状的CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南。

本指南的制定以我国艾滋病防治现行和相关技术标准为依据，同时参考了美国、加拿大和澳大利亚等国家的现行指南。本指南适用于目前国内使用的检测CD4+T淋巴细胞的主要仪器，旨在为各地在实际工作中提高CD4+T淋巴细胞检测质量，因地制宜地建立适合当地实验室条件的质量保证规程和标准操作程序提供有益的参考。

致 谢

本指南写作过程中，得到了世界卫生组织和克林顿基金的大力支持，也得到了许多病毒和免疫学领域资深专家的支持，使得本指南能在很短的时间内呈现给工作在CD4+T淋巴细胞检测一线的同仁们，为规范我国CD4+T淋巴细胞检测，保证有效治疗艾滋病做出了无私奉献，在此我们表示深深的敬意。

国家艾滋病首席专家邵一鸣教授在本指南编写过程中给予了重要的指导建议，在此特别致谢。

目录

第一章 总则 ................................................................................................................. 1 第二章 实验室环境与设施 ....................................................................................... 2 第三章 实验室安全 ................................................................................................... 4 第四章 质量保证 ....................................................................................................... 6 第五章 室内质控 ....................................................................................................... 7 第六章 外部质控 ..................................................................................................... 13 第七章 标准操作程序 (SOP)模板 ......................................................................... 15 附表1 CD4+Ｔ淋巴细胞检测样品发送/接收单 .................................................. 16 附表2 药物及其他生物学因素对CD4+T淋巴细胞测定结果的影响 .................. 17 附表3 CD4+Ｔ淋巴细胞检测结果报告单 ............................................................ 18 附表4 CD4+Ｔ淋巴细胞检测能力验证样品接收表 ............................................ 19 附件5 CD4+Ｔ淋巴细胞检测能力验证样品结果报告表 .................................... 20 参考文献 ..................................................................................................................... 23

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第一章 总则

1.1 意义

准确可靠的CD4+T淋巴细胞检测是评价HIV感染者免疫状况，预测判断疾病进程、评价抗病毒药物治疗效果和估测预后的重要指标；世界卫生组织(WHO)和欧美等国家均推荐，艾滋病病毒（HIV）感染者每3-6个月监测一次CD4+T淋巴细胞水平，并以该指标作为开始预防间质性浆细胞肺炎和其它机会性感染，以及作为开始抗逆转录病毒治疗的主要指标。依照世界卫生组织和美国CDC成年人和未成年人AIDS病例中HIV感染和病例监测分类系统定义，CD4+T淋巴细胞水平也作为判断HIV相关临床病程的标准。我国“国家免费艾滋病抗病毒药物治疗手册”中也将CD4+T淋巴细胞CD4<200/mm做为开始抗病毒治疗的标准。因而保证CD4+T淋巴细胞检测质量是非常重要的。《艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南》对保证CD4+T淋巴细胞检测质量有重要的指导意义。 1.2目的

指导我国从事HIV感染者和AIDS患者CD4+T淋巴细胞检测工作的实验室人员，规范CD4+T淋巴细胞检测方法和程序，完善实验室质量保证与质量控制，提高检测的准确性。 1.3 适用范围

适用于我国采用单平台法检测艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞的所有实验室。 1.4 缩略语

HIV/AIDS: 艾滋病病毒感染者和艾滋病患者；HIV：艾滋病病毒； AIDS：艾滋病； SOP：标准操作程序； FCM：流式细胞术；SPT：单平台技术；ID：患者编号；PMT：光电倍增管； PT：能力验证

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第二章 实验室环境与设施

2.1 CD4+T 淋巴细胞检测实验室设施

理想的CD4+T淋巴细胞检测实验室应该有专用实验室。如果空间有限，CD4+T淋巴细胞检测可以与HIV检测的筛查和确认实验室共享一个空间。本指南推荐的是理想的CD4+T淋巴细胞检测实验室的空间安排。样品接收、处理在一单独房间，样品检测、分析和报告在另一单独房间。该类实验室应符合国家生物安全二级 (BSL-2)实验室的有关规定。 2.2 CD4+T淋巴细胞检测实验室空间安排的一般性原则

实验室应有以下区域： 2.2.1 样品接收区； 2.2.2 样品存放区； 2.2.3 样品处理区； 2.2.4 样品检测区； 2.2.5 结果分析和发布区； 2.2.6 资料存放区（实验室档案)

房间进出口样品接收区 样品存放区 样品准备区 样品处理区 结果分析和发布区 计算机 打印机 (注: 具体空间尺寸应与设备大小相一致)

如在实验室进行CD4+T淋巴细胞检测，其实验室规划和工作流程应如图1所示。虚

冰箱 样品检测与分析区 流式细胞仪及附属设备 图1 CD4+T淋巴细胞检测实验室规划图(建议)

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线以上相对。如果属于共用实验室也应按照如图1所示的区域设计实验室。

实验室空间规划应参考仪器制造商提供的主机及其附属设备的尺寸。样品检测和数据分析可以在同一实验室或不同实验室进行。

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第三章 实验室安全

实验室负责人应保证所有涉及CD4+T淋巴细胞检测的检验员和管理者接受足够的生物安全培训，并接受年度复训，了解生物安全保障的一般性导则。相关人员要接受实验室安全员和实验室安全负责人的监督。所有实验室事故和意外要根据艾滋病实验室事故和意外处理的原则进行处理、记录和报告。

实验室安全负责人的责任是保证实验室处于安全状态。所有人员有责任实现自身保护和其他工作人员的安全。所有人员的安全培训均应记录在实验室和人事档案中。具体操作应遵照国家卫生部2004年4月颁布的《医务人员艾滋病病毒职业暴露防护工作指导原则（试行）》，2003年8月颁布的《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（WS 233-2002）》中华人民共和国卫生行业标准，和中国疾病预防控制中心《全国艾滋病检测技术规范(2004版)》中的相关条文和一般性导则规定。 3.1 环境

应符合国家二级生物安全实验室(BSL-2)有关规定。

3.2 制度与管理

实验所涉及的称量器具和测试仪器均要求建立管理与登记制度。使用管理制度应参照国家生物安全相关规定，结合本实验室其他HIV检验工作安全制度，并使称量器具和测试仪器的使用规程相一致。CD4+T淋巴细胞检测最基本的管理内容应包括：移液器、细胞计数仪、冰箱、计算机及其附属设备等。使用登记内容应当尽量涵盖必要的管理要素，按执行日期登记。 3.3 样品安全

本节内容包含与CD4+T淋巴细胞检测检测相关的样品采集、包装、运输、接收、分装、测试和储存等各环节的安全要求。采集、包装、运输三部分为实验室外部过程，应遵循现场工作安全规范。

接收样品的所有措施、规程和制度均应符合国家相关规定。在实际操作中(包括各级各类筛查、确认和参比实验室)应在符合2级生物安全实验室（BSL-2）要求的实验室中进行。 3.4 废弃物处理

所有废弃物应按照HIV污染物品处理。由专人按特定程序和方法进行清洁和消毒。只有在确认彻底消毒后，才能移出污染区，妥善包装后移交专门机构进行销毁，不得循环使用。 3.4.1废弃物分类

按照物理特性分类，主要有液体、可燃性物质与不可燃性物质。不可燃性物质又可分为金属和非金属类。分类有助于选择适宜的消毒方法。

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3.4.2 消毒方法

液体类消毒应注意消毒剂被废液稀释后，最终稀释浓度必须保持在有效消毒浓度。计算消毒剂用量应以需处理的废液总量为分母。可燃性物质应遵循先消毒后焚烧的程序。焚烧应由环保部门认可的专业机构进行，防止造成环境污染；不可燃物质中非一次性用品应遵循先消毒后清洗，清洗后常规消毒包装后再使用的程序。一次性用品应按照先消毒后深埋的程序进行。

常用消毒剂配制浓度与物理消毒方法

3.4.2.1 含氯消毒剂（次氯酸钠，含有效氯2000-5000mg/L）适用于废液缸、溢出物 3.4.2.2 3.4.2.3

75%乙醇 适用于实验室桌面、生物安全柜工作台面和仪器表(非光学部件) 2%戊二醛

以上浸泡消毒时间为器具保持在液面下1030 min。

3.4.2.4 3.4.2.5 3.4.2.6 3.4.2.7

高压蒸汽消毒，121℃，保持1520min;

干燥空气烘箱消毒（干烤消毒），140℃，保持23h。

流式细胞仪内置的废液收集桶应按照HIV实验室废液处理方法和规程进行消毒。 标识与登记

所有消毒剂都应明确标记浓度。配制好的消毒剂应标明配制时间。

3.5 个人防护

个人防护应符合国家有关艾滋病实验室标准的要求。

尽管流式仪激光束属于低能量激光。但在实施仪器维护和检修过程中，应注意避免激光束对眼睛的直接照射。

3.6 人员培训与考核

CD4+T淋巴细胞检测的管理人员和检测人员应接受与工作相关的技术培训。所有工作人员必须经过HIV检测技术和省级以上艾滋病实验室安全培训，包括CD4+T淋巴细胞检测上岗培训和定期复训。接受实验室生物安全责任人和实验室管理人员的监督。实验室的安全责任人要对工作秩序和环境的安全负责，所有工作人员都有责任保护自己和他人的安全。

3.7 突发事件处理与报告

遵循国家HIV检测实验室有关突发性生物安全事件处理程序和认定原则进行登记上报和应急处理。

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第四章 质量保证

实验室的质量保证是为达到质量目标而制定的一套规范行为的标准。质量保证的目的是持续为病人提供准确可靠的检测结果。实验室的质量保证要考虑自接受样品到发出检测报告过程中所有可能影响检测结果的因素。包括行政支持、实验室管理、环境要求、人员培训和质量控制等多方面的内容(见图2)。有关行政支持、实验室管理和环境等要求按照“全国艾滋病检测技术规范”和“全国艾滋病检测工作管理办法”的规定执行。工作人员应在实验室管理、CD4+T淋巴细胞检测技术和质量保证等方面得到全面培训。

质量控制包括室内质量控制（简称室内质控）和外部质量控制（简称外部质控）。室内质控要求工作人员做好仪器质控和过程质控（详见第五章）, 过程质控主要由试剂质控、样品质控和数据质控构成。外部质控主要要求CD4+T淋巴细胞检测实验室参加检验能力验证（详见第六章）。

质量保证 行政支持，实验室管理，环境条件 质量控制 培 训 外部质控 室内质控 过程质控 仪器质控 试剂质控 样品质控 数据质控 图 2 实验室质量保证工作流程图

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第五章 室内质控

5.1仪器质控

5.1.1 仪器应按照生产厂家的要求进行校准。正式检测样品前应先用仪器生产厂家的质控品校准仪器，质控品通过测试后方可检测样品。

5.1.1.1 通常仪器设置应当按照仪器生产厂家的要求用商业化的校准物质(如荧光微球)校准流式细胞仪并建立档案,保存记录并监测流式细胞仪的性能变化(电压,放大,补偿)。 5.1.2设置分析窗口

5.1.2.1 依据试验所用荧光单克隆抗体所带荧光素选择对应的通道，建立分析窗口。专门设置的分析窗口取决于流式细胞仪荧光性的范围通道特性与所使用的抗体组合。分析窗口的荧光范围由相应通道的特性决定。设计分析窗口在特定设置情况下，通过流式检测的荧光范围。 5.1.2.2 目的是可以达到荧光范围的重复性和细胞群位置的标准化 5.1.2.3 使用荧光微球作为参考标准。

5.1.2.4 收集每个通道的信号作为靶标，记录保存建立的分析窗口为以后分析所用。 5.1.2.5 再开机检测时用此靶值作为标准值，调节PMT电压，得到同一窗口进行样品分析。 5.1.2.6 每天对电压做Levey-Jenning图。

5.1.3 每日应校正光路，确保所有的参数都有最明亮最窄的峰。

5.1.4 进行多色分析时，颜色补偿通常由自动软件完成，自动补偿一般情况下会运行很好。通常在一至两个月中定期设置一次荧光补偿。如果变异系数(CV)有较大变化或在样品获取时出现问题要及时进行调节或校准(见图3)。在某些情况下推荐手动补偿，例如：需确认现有光学滤镜与新的荧光剂的兼容性。手动补偿即是将每一抗体在单独的试管中与正常人阴性血样结合进行每一种单一抗体的补偿，然后混合单色的样品，依照仪器生产厂家要求设置色补偿。

5.1.5 使用多色试剂( 三色和四色)，可用仪器质控软件成功运行后自动生成的仪器设置文件内的荧光补偿。强力推荐每1-2个月使用正常人全血，对每一通道进行补偿和电压调节。使用单色试剂，需要调用上述文件后，依据样本情况和图4的补偿原理进行优化。 5.2 过程质控 5.2.1试剂质控

5.2.1.1 所用试剂应在有效期内。

5.2.1.2 使用不同批号试剂时，需要进行平行实验。即新批号试剂在测定质控品(已知细胞数

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的商业质控品)时能够获得与原试剂相同的结果。

未补偿 补偿不足 正确补偿 A1–A3分布图，分别显示实验图。B1–B3是A1–A3相对应的示意图

图3 多色补偿图

此图引自《用CD45设门的单平台法检测人类免疫缺陷病毒（HIV）感染者的CD4＋T淋巴细胞实验操作指南（2003年版）美国ＣＤＣ》

5.2.1.3 对于同批试剂，应采用HIV阴性全血样品作为定值指标。

5.2.1.4 用CD45设门进行CD4+T淋巴细胞检测。对于不能测定进样体积的流式细胞仪，非测量体积获得细胞数的仪器，必须用微球计数T淋巴细胞各亚型的绝对数。 5.2.2样品质控 5.2.2.1样品采集

a)抗凝管的准备和标记：选择含有固态抗凝剂（KEDTA）的采血管(2ml或5 ml)作为血样采集管。应保证采血量达到但不超过抗凝管容积的水平，以保证抗凝剂的最终有效浓度。尽可能采用真空管，避免使用注射器采集血样。将被检者ID号标签贴于抗凝管上，并在CD4+T淋巴细胞检测样品发送/接收单上注明采样日期和时间(见附表1)。

b)采血时间：鉴于CD4+T淋巴细胞数日间自然变化的个体差异，每一病人采样时间应尽可能集中在某个相同的时段。如：每次采样时间均在上午或均在下午。

c)采样量：成人采集静脉血5ml，采集儿童静脉血样品建议用儿童型注射器和小试管(2ml)，采集婴儿样品较为困难，用小试管采集0.5-1ml即可。所有血样应立刻注入事先加入适当抗凝剂的试管。

d)样品混匀：采集的静脉血注入抗凝管后，立即轻轻颠倒抗凝管6-8次，使血液与抗凝剂充

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分混匀，防止血液凝固。

e)影响因素: CD4+T淋巴细胞水平会受到一些因素的影响，采血前应了解患者的状况。服用肾上腺皮质激素，急性病毒感染以及术后病人等均不宜采血。参见病人用药和疾病情况可能影响CD4+T淋巴细胞检测结果简表（附表2）。 5.2.2.2样品运输

a)安全运输样品：按照“病原微生物实验室生物安全管理条例”和国际传染病物质航空运输的标准，进行三层包装。参见《全国艾滋病检测技术规范（2004年版）》。 b)样品运输条件：37℃以上的温度会破坏细胞，使血液学和流式仪的检测结果受到影响。在室温（18-25℃）保存和运输样品，避免极端温度（结冰或大于37℃）。高温季节，需用隔热容器盛装样品，并将其置于有冰袋和吸热物质的容器中。如样品不能立即送达实验室或送到后不能立即检测，应存放于室温，不得冰冻保存。特殊情况下按要求保存和运输。 c)样品运输条件：样品应在48小时之内送达检测实验室。 5.2.2.3样品接收和贮存

a)样品接收：检测实验室应指定专人接受样品。收到样品后，应填写CD4+T淋巴细胞检测样品发送/接收单（见附表1）。检查样品质量、数量并核对标识。溶血、凝血或结冰的样品应视为不合格样品，不可检测。如果样品较热或较冷，但没有明显的溶血或结冰，可以进行处理检测，但要在接收记录以及结果报告表上详细注明接收时不正确的温度条件或存在溶血的程度。

b)样品贮存：样品到达后，应及时进行处理，如不能马上处理，应在室温（18-25℃）保存，避免极端温度（结冰或大于37℃）。样品应在采集后72小时内完成检测。 5.2.2.4样品处理

样品的处理和分析应遵循有关标准操作程序(SOP)，并需注意下列要点：

a) 吸液: 吸液不准确是导致检测错误的最常见原因。检测前，实验人员必须经技术培训，并接受周期性测评。移液器需定期校正(见附件1)。

b) 混合: 处理样品时，应充分混合样品和试剂，再移至上样管。 c) 应采用免洗法进行样品处理。

d) 所有加入抗体后的试管应避光，并按规定的时间进行孵育。

e) 经染色处理的样品应用含有多聚甲醛的固定剂(PFA)固定。以保证样品稳定并使HIV灭活。

f) 样品固定30分钟后方可上机检测，若不能即刻检测，应将染色样品储存于4-10℃冰箱。已经加入荧光微球的样品应在6小时内上机检测。如不能按时上机检测，荧光微球须在检测

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前加入。检测时间必须遵循不同仪器的相关标准操作程序。 5.2.2.5样品分析

a)样品分析应遵循与仪器相应的标准操作程序(SOP)。

b)如果利用CD45单克隆抗体和侧向光设门(见图4)，可检测放置72小时的样品，并可用于检测6岁以下儿童CD4+T淋巴细胞占淋巴细胞总数的百分率。

c)每份待检样品应保证收集足够的T淋巴细胞数（至少2000-2500个）。分析所收集到的荧光微球，至少要大于荧光球的数目。通过分析所收集到的荧光微球量计算CD4+和CD8+T淋巴细胞的绝对数量。 5.2.2.6每日质控

a)稳定的全血样品可用于室内质控。在CD4+T淋巴细胞测定过程中，同时使用室内质控品，可帮助分析和判断仪器的准备和分析是否均处于最佳状态。 b)实验室需绘制每日质控图。

c)每日质控图应由参加CD4+T淋巴细胞检测的工作人员绘制。绘制质控图(Levey-Jenning)均值和标准差来自商用质控品或CDC提供的质控品。该质控品提供CD4+T淋巴细胞数的均值和标准差。 实验室将每次测定的CD4+T淋巴细胞计数点在上述质控图内。实验者必须检查各点是否在2倍标准差之内。使用该图的目的是每日检查实验质量，发现并及时改正不良操作。此外，当改用不同厂家试剂或改变质控品时须重新绘制质控图(Levey-Jenning)。 5.2.3数据质控 5.2.3.1数据分析

a）用高亮度的CD45和低亮度的侧向散射光确定淋巴细胞。用CD45设门确定淋巴细胞的单平台(SPT)分析方法如图4所示。

b）对淋巴细胞进行设门时，单核细胞不能超过3％，设门不能过小，应保证门内有97%以上的淋巴细胞。 5.2.3.2结果报告

a）结果报告时间及复检：按照报告单内容填写结果，接受样品后72小时之内出具CD4+T淋巴细胞检测结果报告。CD4+T淋巴细胞检测结果报告单应由检测者和主管共同签字。见附表三。 b）正常值范围：成人和儿童的参考范围应该由国家或省市级实验室制定，结果报告单中应附有参考范围（例如，CD4+T淋巴细胞绝对数和百分数）。

c)各项检测指标的含义：CD4+T淋巴细胞是T辅助淋巴细胞。报告该值的正确细胞是CD3和CD4全部双阳性的细胞，未使用CD3抗体时，正确细胞应是高表达CD4受体的细胞。同样，CD8+T淋巴细胞是T抑制淋巴细胞/细胞毒细胞和CD3,CD8都为阳性的细胞。在识别CD4和CD8中应不包括

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其他细胞型别的非T淋巴细胞。 5.2.3.3 数据储存

a)尽可能对所有分析过的样品都存储成原始数据文件(data file)格式，这样可以对原始数据进行分析。

b)保留所有的原始文件、报表和报告。保存期至少两年，或按照当地或有关部门规定要求保留更长的时间。数据可以电子版存放。保存期限过后由实验室主任决定如何处理。 5.2.3.4可靠性分析

CD3+CD4+%与CD3+CD8+%总和等于CD3+%加减5%。两管都有CD3的三色试剂检测CD3+CD4+与CD3+CD8+T淋巴细胞时变异性应小于等于2%。用新方法或改变操作者时建议每一个实验室应进行不少于5次重复检测和分析来确定检测的变异性。实验结果的变异性应小于10％（CD4+T淋巴细胞应大于50个细胞/ul）。

1设R1门 ( 总淋巴细胞) 2.分析R1门内细胞 (CD3+CD4+总淋巴细胞) 3. 分析R1门内细胞 (CD3+CD8+总淋巴细胞) 艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南

图4. 流式细胞仪显示屏上所示4色单平台法图像

点分布图的1–3分别显示CD45侧向散射，CD4/CD3和CD8/CD3的图像。点分布图中4、5用来确定荧光微球数目。图中4、5中荧光微球分别被定位在R2和M1区域内。此图引自《用CD45设门的单平台法检测人类免疫缺陷病毒（HIV）感染者的CD4＋T淋巴细胞实验操作指南（2003年版）美国CDC》

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第六章 外部质控

6.1 外部质控

外部质控是有组织地系统质控测量。是由具有外部考核经历，并且检测质量获得改进的实验室之间进行相互质量参比，从而提高实验室结果的可比性(国内的外部质控流程参见图5)。

6.1.1 外部质控的目的: 确保在所有实验室CD4+T淋巴细胞检测都有良好的高度一致的结果。 6.1.2 参与者: 所有用单平台方法进行CD4+T 淋巴细胞检测的实验室。 6.2 组织者

国家艾滋病参比实验室负责制订和发展外部质控相关技术标准，并负责组织检验能力验证(PT)计划的实施。 有条件的实验室可参加国际认可机构的质控。 6.2.1 PT频率: 每年至少2次，每次2－5支质控品。

6.2.2 参评单位职责: 参评单位实验室应在指定期间分析测定质控品，并填写结果报告单。按规定时间将填写完整并经单位审核的报表上交国家艾滋病参比实验室或相应的国际认可机构。

中国CDC艾滋病参比实10天前通知 分析检测结果 1个月内 分发PT样参评机构 反馈检测结果 上报结果到中国CDC艾滋病参比实验室

复核样品，填写样品接收单，在 要求的时间内完成质控品检测 填写结果报告单

图5 国内CD4＋T淋巴细胞检测实验室参加能力验证流程图

6.3 PT样品来源及要求

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PT样品由中国疾病预防控制中心艾滋病参比实验室提供或国际认可机构。

PT样品的保存、运输：运输应遵守其特殊要求，通常运输温度应保持4℃。到达参加能力验证实验室的PT样品应在4℃保存，并应于收到之日后下一个工作日进行检测分析。结果一般要求在完成检测后次下一个工作日，通过电子邮件、互联网或传真尽快上报。如参加能力验证实验室遇到特殊情况，不能检测（如仪器故障等)，可暂时将PT样品保存在4℃，待故障排除后再进行检测。需要指出的是，PT样品的稳定期在3周之内，自接到样品之日超过3周的样品即不能检测。 6.4 PT样品的检测

6.4.1 PT样品的接收：要求参加能力验证的实验室收到PT样品后，立即进行清点、检查，填写接收表（见附件4），如发现缺失、空管、溶血、凝血、结冰等情况，应及时向国家艾滋病参比实验室或相应国际机构报告，并要求补寄或更换。

6.4.2 PT样品的检验：PT样品应按常规操作与日常样品一同进行检测，以反映实验室日常检测质量。不能对PT样品给与特殊待遇，不可修改检测结果。

6.4.3 结果报告：实验人员完成PT样品检测后，应填写结果报告表（见附件5），经实验人员及实验室负责人审核后签字。 6.5 外部质控数据管理

参加能力验证实验室经传真或电子邮件将数据发送至国家艾滋病参比实验室或国际认可机构，由中国疾病预防控制中心艾滋病参比实验室或相应的国际认可机构进行数据分析。 中国疾病预防控制中心艾滋病参比实验室或国际认可机构将根据所有参加能力验证实验室总的结果进行评分。如果某实验室结果超出两倍标准差指数（SDI），则必须进行及时质量改进，中国疾病预防控制中心艾滋病参比实验室提供质量改进建议。

SDI＝(某实验室试验结果－所有参加实验室试验结果的平均值)/所有参加实验室试验结果的

标准差.

＝残差 （Residual ）/ 标准差（SD）

当SDI 值超出±1.5 时系统处于告警状态，应予注意,

当SDI 值超出±2.0时整个系统处于失控状态，提示存在较大的问题， 检验结果无效。

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第七章 标准操作程序 (SOP)模板

7.1 SOP的定义

SOP是实验室内部以文件的形式对质量活动用规定的方法进行连续而恰当的控制。应包括对试验中每项工作所拟定的标准或所规定的途径。 7.2 SOP的作用

为保证某个特定活动进程的一致性而制定的详细指令。实验室的SOP应涵盖所有的质量活动，包括检测或校准计划、管理性程序、技术性程序、项目操作程序和记录表格等。由于影响每个实验室的质量活动的条件和因素不一样，一个SOP只在某个实验室内有效，不一定适用于其他实验室。 7.3 SOP的一般性原则

• 由实验室相关人员书写 • 实验室人员能够方便查取 • 所有程序要符合实验室情况

• SOP由作者和/或主任签署并标明日期 • 可随时根据实验室变化修改 • 任何变动要签字 7.4 SOP至少包含以下 内容

（1）目的 （2）范围 （3）职权和授权 （4）定义

（5）背景 （6）程序 （7）质量控制 （8）安全操作和防护 （9）参考文献 （10）相关文件 （11）附录

艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南

送样品单位： 送样品单位地址： 接样品单位名称： 检测实验室名称： 包装 完□ 不完整□ 如有渗漏， 请描述___ _____年 ――月 ——日 ——时 _____年 ――月 ——日 ——时 _____年 ――月 ——日 ——时 完□ 不完整□ 如有渗漏， 请描述-___ _____年 ――月 ——日 ——时 _____年 ――月 ——日 ——时 _____年 ――月 ——日 ——时 完□ 不完整□ 如有渗漏，请描述___ _____年 ――月 ——日 ——时 _____年 ――月 ——日 ——时 _____年 ――月 ——日 ——时 完□ 不完整□ 如有渗漏，请描述___ _____年 ――月 ——日 ——时 _____年 ――月 ——日 ——时 _____年 ――月 ——日 ——时 完□ 不完整□ 如有渗漏，请描述___ 送样员签字： 接样员签字: 整 正常 □ 溶血 □ 浑浊 □ 凝固 □ 其它 □ 室温 □ 4℃ □ -20℃ □ _____年 ――月 ——日 ——时 整 正常 □ 溶血 □ 浑浊 □ 凝固 □ 其它 □ 室温 □ 4℃ □ -20℃ □ _____年 ――月 ——日 ——时 整 正常 □ 溶血 □ 浑浊 □ 凝固 □ 其它 □ 室温 □ 4℃ □ -20℃ □ _____年 ――月 ——日 ——时 整 正常 □ 溶血 □ 浑浊 □ 凝固 □ 其它 □ 室温 □ 4℃ □ -20℃ □ _____年 ――月 ——日 ——时 性状 整 正常 □ 溶血 □ 浑浊 □ 凝固 □ 其它 □ 样品 ID号 采集 时间 _____年 ――月 ——日 ——时 发送 时间 _____年 ――月 ——日 ——时 接收 时间 ____年 ――月 ——日 ——时 接收后存放的温度 室温 □ 4℃ □ -20℃ □ 交递检测 员的时间 ____年 ――月 ——日 ——时 艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南

附表1 CD4+Ｔ淋巴细胞检测样品发送/接收单

附表2 药物及其他生物学因素对CD4+T淋巴细胞测定结果的影响

影响因素 影响 使细胞易碎性增加 Zidovudine (AZT) 使红细胞(RBCs)对裂解试剂的敏感性降低 一些 抗菌素(如头孢菌素cephalosporins) 皮质醇类Corticosteroids 强烈的锻炼 每天的变化

使细胞的自身荧光增强 降低CD4+T淋巴细胞水平 降低淋巴细胞数 淋巴细胞绝对值的改变 结果 散射光变暗 (粒细胞和RBC污染淋巴细胞门) 增强自身荧光 降低CD4+T淋巴细胞百分率和绝对值 降低淋巴细胞亚群绝对数 淋巴细胞亚群绝对数变化（在HIV感 染中并不普遍） 艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南

附表3 CD4+Ｔ淋巴细胞检测结果报告单

单位名称： 实验室名称： 样品接收日期： 年/ 月/ 日/ 时/ 分 / 样品检测日期： 年/ 月/ 日/ 时/ 分 / 检测结果报告日期： 年/ 月/ 日/ 时/ 分 / 所用流式细胞仪： 检测员： 结果填写员： 实验室负责人： 结果报告 CD45CD3 样品ID号 百分数

参考范围

++CD4 CD3CD45百分数 ++ + CD8CD3CD45百分数 +++ CD3+ CD3CD4+ + CD3CD8 + + 绝对数绝对数 （个/µ1） 绝对数 （个/µ1） (个/µ1）

艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南

附表4 CD4+Ｔ淋巴细胞检测能力验证样品接收表

单位全名:

1．实验室名称:

2．接收人员姓名:

3．技术职称：

4．收到样品日期: 月 日 年

时 分 上午／下午

5．收到样品号 ID

6．样品包装和性状: 包装： 完整 不完整 如有渗漏请描述

样品性状： 溶血 浑浊 凝固

其它 7．样品交递检验人员的时间

日期:

月 日

时间:

时 分 上

午／下午

8．接收样品后样品存放的温度 4℃ -20℃ 室温

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附表 5 CD4+Ｔ淋巴细胞检测能力验证样品结果报告表

单位全名: 1. 检测人员姓名: 2. 实验室名称:

3. 技术职称：

4. 样品收到日期: 月 日 年

时 分 上午／下午

5．检测日期:

月 日 年

时 分 上午／下午

6. 样品准备(和 / 或染色)时间

日期:

月 日

时间:

时 分 上午／下午

7. 样品分析时间

日期:

月 日 时间:

时 分 上午／下午

8. 是使用单平台法或是双平台法， 如用双平台法，其血液分析仪的型号

9．使用抗体

两色 三色 四色

10．荧光抗体的标记物和荧光通道（如CD3+— FITC FL1）

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CD3+ CD4+ CD8+

CD45+

11. 使用绝对计数的bead

TruCount Flow- Count

Other

12. 使用裂解方法

FacsLysing Immuno Prep(Q-Prep) Optilyse

Other

13. 处理好的样品如果不是立即检测,存放温度是什么? oC

14. 你实验室所用的流式细胞仪型号?

FACSCount FACSCalibur Epics XL FACScan FACSort

Other

15. 最后一次仪器校准的时间

16. 仪器校准所用试剂名称， 厂家

17. 单克隆抗体及其制造商

18. 样品号 ID

19. 样品检测结果 :

(1) 百分数

填写你实验室常规检测的部分.

样品号 ID

CD4+ CD3+/

CD3+ 艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南

CD8+ CD3+/ CD3+

CD45+ CD3+

CD4+ CD3+ CD45+

CD8+ CD3+ CD45+

CD19+ CD45+

CD16+ CD3-

(CD56 &CD16) CD45+

(2) 绝对计数 (cells/ul)

样品号ID

CD3+ CD4+ CD8+

（如果你实验室有两台或更多的仪器， 请用不同的仪器进行检测。复印此表格以填写不 同仪器的结果） 20. 问题和建议

实验室负责人:

艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴细胞检测质量保证指南

参考文献

1. 《医务人员艾滋病病毒职业暴露防护工作指导原则（试行）》中华人民共和国卫生部，

2004年5月31日颁布，2004年6月1日起实施。

2. 《实验室生物安全通用要求》GB 194-2004，2004年10月1日起实施。

3. 《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（WS 233-2002）》中华人民共和国卫生

行业标准，2002-12-03发布，2003-08-01实施。

4. Guidelines for the Safe Transport of Infectious Substances and Diagnostic

Specimens .WHO 1997.

5. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, CDC/NIH, Fourth

Edition, 1999.

6. Update: Provisional recommendations for chemoprophylaxis after occupational

exposure to Human Immunodeficiency Virus MMWR. 1996;45:468-472, and from B Schoub. Virus SA . 1997. Guidelines to the Management of Occupational Exposure to HIV. National Institute of Virology.

7. 《消毒技术规范（2002年版）》中华人民共和国卫生部2002年11月15日发布，2003

年04月01日起实施。

8. 《全国艾滋病检测技术规范(2004版)》中国疾病预防控制中心 2004年11月 9. Canadian Guidelines for Flow Cytometic Immunophenotyping 2001 Edition. 10. Guidelines for Performing Single-Platform Absolute CD4+T-Cell Determinations

with CD45 Gating for Persons Infected with Human Immunodeficiency Virus USCDC, MMWR January 31, 2003 / Vol. 52 / No. RR-2.

11. Recommended Guideline Standards for Lymphocyte Immunophenotyping,

Australasian Flow Cytometry Group,July 1997.