分离提取 ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００５－６５２１．２０１７．０７．０１１ 食品研究与开发 Ｆｏｏｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎ ２０１７年４月 第３８卷第７期 ５１ 响应面法优化灵芝孢子粉多糖提取工艺的研究 冯嫣。马文婷 （吕梁学院生命科学系，山西吕梁０３３０００） 摘要：以灵芝孢子粉多糖为研究对象，通过单因素试验考察液料比、提取温度、提取时间３个因素对提取率的影响， 确定提取灵芝孢子粉多糖的最优工艺参数，并运用响应面法对３个因素进行优化，得到优化后的提取工艺，并确定该工 艺条件的可靠性和高效性。结果表明：单因素试验确定提取灵芝孢子粉多糖的最优工艺为液料比２０：１（ｍｌｄｇ）、提取温 度８０℃、提取时间２ ｈ，在此条件下灵芝孢子粉多糖提取率为４．７８％；运用响应面法优化工艺参数，确定最佳工艺条件 为：液料比２１．２７：ｌ（ｍＩＪｇ）、提取温度８Ｏ．１Ｏ℃、提取时间２．１０ｈ，在此条件下预测多糖提取率为４．８４％；对模型进行验证， 实测结果为４．８１％．与拟合方程预测值符合良好。 关键词：灵芝孢子；多糖；响应面 Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｆｒｏｍ Ｌｕｃｉｄｕｍ Ｓｐｏｒｅｓ Ｕｓｉｎｇ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｓｕｒｆａｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ＦＥＮＧ Ｙａｎ，ＭＡ Ｗｅｎ—ｒｉｎｇ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌｕｌｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌｕｌｉａｎｇ ０３３０００，Ｓｈａｎｘｉ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ ｏｎ ＧＬＳＰｓ，ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｐｒｏｃｅｓｓ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ＧＬＳＰｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒ— ｍｉｎｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｉｎ ｗｈｉｃｈ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｔｈａｔ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ＧＬＳＰｓ （ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｗａｔｅｒ ｔｏ ｍａｔｅｒｉａｌ，ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ）ｗｅｒｅ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ａｎｄ ｔｒａｃｋｅｄ．Ａｔ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｔｉｍｅ，ｔｈｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｌｅａｄ ｔｏ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｒｅｌｉａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ｆｔｈｉｓ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｐｒｏｃｅｓｓ ｃｏｎ—— ｄｉｔｉｏｎｓ．Ｔｈｅ ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ＧＬＳＰｓ ｗａｓ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ：ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｗａｔｅｒ ｔｏ ｍａｔｅｒｉａｌ ｗａｓ ２０：１（ｍＬ／ｇ），ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ８０ ｑＣ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｗａｓ ２ ｈｏｕｒｓ．Ｕｎｄｅｒ ｓｕｃｈ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ＧＬＳＰｓ ｗａｓ ４．７８％；Ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｓｓ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ，ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ＧＬＳＰｓ ｗａｓ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ：ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｗａｔｅｒ ｔｏ ｍａｔｅｒｉａｌ ｗａｓ ２１．２７：１（ｍＬ／ｇ），ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ８０．１０ ｏＣ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｗａｓ ２．１０ ｈｏｕｒｓ．Ｕｎｄｅｒ ｓｕｃｈ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ。ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ＧＬＳＰｓ ｗａｓ ４．８４％；Ｔｏ ｖｅｒｉｆｙ ｔｈｉｓ ｍｏｄｅｌ，ｔｈｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｒｅ— ｓａｌｔ ｗａｓ ４．８１％．ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｍｏｄｅｌ ｃｏｕｌｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄａｔａ ｗｅｌｌ ａｎｄ ｗａｓ ｑｕａｌｉｆｉｅｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｌｕｃｉｄｕｍ ｓｐｏｒｅｓ；ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ 近年来，随着生活水平的日益提高，人们对于健 康的关注也越来越高。灵芝属于一种大型担子真菌， 被我国历代民族医药视为股本扶正的瑞草，而灵芝孢 分，其药理作用主要有抗肿瘤、免疫调节、调节血脂以 及对神经、心血管和呼吸系统有调节改善的作用。 随着近年来对灵芝研究的不断深入，发现灵芝多 糖是灵芝的主要活性物质之一，其重要性不言而喻。 灵芝孢子多糖具有免疫调节作用、抗肿瘤作用、降血 糖作用、抗辐射作用、抗氧化作用以及促进核酸和蛋 子作为灵芝的生殖细胞，具有灵芝的全部遗传活性物 质，它富含蛋白质（１８．５３％）及多种氨基酸（总量为 ６．１％），还含有丰富的多糖、萜类、生物碱、维生素等成 白质的合成的作用，是一种对人体十分有用的生物活 作者简介：冯嫣（１９８６＿＿），女（汉），助教，硕士，研究方向：食品营养 与安全。 性物质。灵芝多糖主要分布于灵芝孢子中，在比较栽 培灵芝与灵芝孢子粉的有效成分含量结果表明，灵芝 冯嫣，等：响应面法优化灵芝孢子粉多糖提取工艺的研究 分离提取 一＝＝ ２ 孢子粉的总多糖数是栽培灵芝总多糖的１．７９倍。大量 研究报告显示：灵芝多糖已经成为衡量灵芝产品质量 优劣的重要指标之一。 本试验运用响应面法确定水提法提取灵芝孢子 多糖的最优工艺，为灵芝包子多糖的规模化提取提供 理论依据和实践经验，为灵芝孢子多糖产品的市场化 打下基础。 １材料与方法 １．１材料、试剂与仪器 １．１．１材料 灵芝孢子粉：市售。 １．１．２试剂 苯酚、三氯乙酸、葡萄糖、氢氧化钠、盐酸、浓硫酸 （以上试剂均为分析纯）：国药集团化学试剂有限公司。 １．１．３仪器和设备 ＩＡ００一Ｐ３型抽滤器：上海领德仪器有限公司； ＨＷＳ一２６型恒温水浴锅：品相科仪（上海）有限公司； ＳＨＡ—Ｃ型振荡器：城西富威实验仪器厂；Ｅｐｐｅｎｄｏｆｆ ５８１０型离心机：德国Ｅｐｐｅｎｄｏｆｆ公司；７５２一Ｃ型紫外分 光光度计：上海光学仪器有限公司；ＦＡ分析天平：上海 方瑞仪器有限公司。 １．２方法 １．２．１工艺流程 样品烘干一称取一乙醇浸泡一抽滤一加水提 取一抽滤一浓缩一醇沉一离心分离一沉淀物加水稀 释一丙酮乙醚清洗一样品烘干一测定多糖含量 １．２．２多糖提取方法 将灵芝孢子粉在５０℃下烘干至恒重，待用。取已 烘干的灵芝粉５ ｇ，用９５％乙醇浸泡２４ ｈ，脱去其中的 脂类和低聚糖。将浸泡后的灵芝孢子粉进行真空抽 滤，得滤渣。按照液料比，向滤渣中加入适当的水，在 设定好温度的恒温水浴箱中放置一定时间，进行提 取。提取结束后，将其真空抽滤，得滤液，并浓缩至原 体积的１／４。浓缩物用９５％乙醇在４℃下醇沉１２ ｈ。用 离心机在６ ０００ ｒ／ｍｉｎ状态下离心１５ ｍｉｎ，取沉淀物，加 水５０ ｍＬ溶解稀释，在将沉淀物用丙酮乙醚反复清洗， 烘干，取１ ｍＬ进行多糖含量测定。 １．２－３多糖含量测定方法 采用苯酚一硫酸法［２４－￣Ｊ。 配置葡萄糖标准溶液，绘制标准曲线，按照苯 酚一硫酸法测定灵芝孢子多糖，计算灵芝孢子多糖 提取率。 １．２．４单因素试验 １．２．４．１不同液料比对多糖提取率的影响 分别选取液料比为１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０： １（ｍＬ／ｇ），提取温度为８０℃，提取时间为１．５ ｈ，按照 １．２．１工艺流程和１．２．２多糖提取方法进行单因素试 验，考察不同液料比对多糖提取率的影响。 １．２．４．２不同提取温度对多糖提取率的影响 分别选取提取温度为６０、７０、８０、９０、１００℃，固定 前面试验得出的液料比，提取时间为１．５ ｈ，按照１．２．１ 工艺流程和１．２．２多糖提取方法进行单因素试验，考察 不同提取温度对多糖提取率的影响。 １．２．４－３不同提取时间对多糖提取率的影响 分别选取提取时间为１、１．５、２、２．５、３ ｈ，固定前面 试验得出的液料比和提取温度，按照１．２．１工艺流程和 １．２．２多糖提取方法进行单因素试验，考察不同提取时 间对多糖提取率的影响。 １．２．５响应面优化试验 在单因素的基础上，确定液料比、提取温度、提取 时间３个因素的零水平，运用Ｍｉｎｉｔａｂ １６数据统计分 析软件，采用Ｂｏｘ—Ｂｅｈｎｋｅｎ设计，运用三因素三水平 响应面分析法，对水解条件进行优化设计。试验因素 与编码见表１。 表１ Ｂｏｘ－Ｂｅｈｎｋｅｎ设计因素及水平表 Ｔａｂｌｅ １ Ｆａｃｔｏｒ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ １．２．６模型验证试验 为检验响应面法所得结果的可靠性，采用１．２．５响 应面优化试验所得结果重复试验，并将最后结果与预 测值进行比较。 ２．１单因素试验结果 ２．１．１不同液料比对多糖提取率的影响 分别选取液料比为１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０： １（ｍＬ／ｇ），在提取温度为８０℃、提取时间为１．５ ｈ的条 件下进行多糖提取，并计算提取率，考察不同液料比 对多糖提取率的影响。结果如图１所示。 由图１可知，当液料比为２０：１（ｍＬ／ｇ）时，灵芝孢 子粉多糖提取率最高，达到４．３％。液料比为１０：ｌ（ｍＬ／ ｇ）时，灵芝孢子粉提取率最低，随着水比例的增大，提 分离提取 冯嫣，等：响应面法优化灵芝孢子粉多糖提取工艺的研究 ５ ４ ４ ３ ３ ２ ２ ０ ５ ０ ５ ０ ５ ０ １Ｕ ｌ５ ２Ｕ ２５ ３Ｕ 液料比／（ｍＵｇ） 图１不同液料比对多糖提取率的影响 Ｆｉｇ．１ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｌｉｑｕｉ—ｓｏｌｉｄｄ ｒａｔｉｏ ｏｎ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ 取率也随之增加，并于２０：１（ｍＬ／ｇ）时达到峰值。之后 继续增加水的比例，提取率趋于平稳，并略有下降。加 水比例越大，灵芝孢子粉中的多糖越易溶出，因此提 取率越高。但是加水比例过大时，会给后续的浓缩过 程带来不便，耗时耗能，因此不利于后续的醇沉。故选 择液料比为２０：ｌ（ｍＬ／ｇ）。 ２．１．２不同提取温度对多糖提取率的影响 分别选取提取温度为６Ｏ、７０、８０、９０、１００℃，在液 料比为２０：１（ｍＬ／ｇ）、提取时间为１．５ ｈ的条件下进行 多糖提取，并计算提取率，考察不同提取温度对多糖 提取率的影响。结果如图２。 ６０ ７０ ８０ ９０ １００ 提取温度／℃ 图２不同提取温度对多糖提取率的影响 Ｆｉｇ．２ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｔｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｎ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ 由图２可知，当提取温度为８Ｏ℃时，灵芝孢子粉 多糖提取率最高，达到４．３％。提取温度为６０℃时，灵 芝孢子粉提取率最低，随着提取温度的增大，提取率 明显增加，于８０℃时达到峰值。之后随着提取温度的 增加，提取率趋于平稳，并略有下降。提取温度越高， 多糖分子的活动越剧烈，多糖更易溶出，因此随提取 温度的上升，提取率也随之升高。８Ｏ℃后，随着提取温 度的增加，提取液的蒸发损耗增大，同时高温可能会 破坏糖分子的内部结构和生物活性，因此提取率稳中 略降。综上，本试验选择提取温度为８０℃。 ５３＝＝Ｉ ２．１．３不同提取时间对多糖提取率的影响 分别选取提取时间为１、１．５、２、２．５、３、斟盛 ｈ，在液料比 为２０：１（ｍＬ／ｇ）、提取温度为８Ｏ℃的条件下进行多糖 ５ ４ ４ ３ ３ ２ ２ 提取，并计算提取率，考察不同提取时间对多糖提取 率的影响。结果如图３。 薄 １．Ｕ １．， Ｚ．Ｕ ２． ３．Ｕ 提取时间，ｈ 图３不同提取时间对多糖提取率的影响 Ｆｉｇ．３ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｉｔｍｅ ｏｎ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ 由图３可知，当提取时间２ ｈ时，灵芝孢子粉多糖 提取率最高，达到４．７８％。提取时间为１ ｈ时，灵芝孢 子粉提取率最低，随着提取时间的增加，提取率明显 增加，于２ ｈ时达到峰值。之后随着提取温度的增加， 提取率趋于平稳，并略有下降。提取时间越长，多糖溶 量越大，当提取２ ｈ后，多糖提取率不再增加，说明提 取液中的多糖分子达到平衡。同时过长的浸泡时问可 能会导致多糖分子内部结构的破坏，导致提取率降 低。因此选择提取时间为２ ｈ。 ２．２响应面优化试验结果 ２．２．１试验结果及方差分析 运用Ｍｉｎｉｔａｂ １６数据统计分析软件试验数据进行 多元回归拟合，并进行方差分析，响应面法的试验设 计及结果见表２。 表２ Ｂｏｘ—Ｂｅｈｎｋｅｎ试验结果 Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｒｅｓｕｌｔｓ 试验号液料￣ｔ／（ｍＬ／ｇ）提取温度／℃提取时间／ｌ１多糖提取率 冯嫣，等：响应面法优化灵芝孢子粉多糖提取工艺的研究 分离提取 ５４ 续表２ Ｂｏｘ—Ｂｅｂｎｋｅｎ试验结果 Ｃｏｎｔｉｎｕｅ ｔａｂｌｅ ２ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｒｅｓｕｌｔｓ 通过回归分析，得到灵芝孢子粉多糖提取牢与液 料比（ ，）、提取温度（Ｘ ）、提取时问（ ，）的二次多项 模型： ｌ ＝一４５．６６＋１．０３Ｘｌ＋０．８５Ｘ：＋４．８８Ｘ３—７．００ｘｌ０。 ＹｌＸ！＋ ０．０３Ｘ ，Ｙ 一０．０２Ｘ、Ｙ —０．０３Ｘ１２－４．８９ｘｌ０一 ２２－０．８７．Ｙ １ 回归方程系数显著性检验表见表３。 表３回归方程系数显著性检验表 Ｔａｂｌｅ ３ Ｔａｂｌｅ ｏｆ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ ｏｆ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎ 由『ｎｌ『Ｊ］方稃系数 著性检验表（表３）可知．模型 的二次项 Ｘ！对响应值具有 著影响，其他项对响应 值具有极 著影响，表明各闪素对多糖提取牢的影响 有线性关系 、 回归模 方 分析表见表４ 表４回归模型方差分析表 Ｔａｂｌｅ ４ Ｔａｂｌｅ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｍｏｄｅｌ ：Ｒ：＝０．８６２ ９．峒链Ｉ｛ ＝Ｏ．９３５ ３ 对数据进行方差分析，结果（表４）显示模型的 Ｐ＜Ｏ．０００ １，表明ｌ田归模型极 著；失拟项Ｐ＝Ｏ．１８】９＞ ０．Ｏｌ，不显著；模 的调整Ｒ ＝０．９３５ ３，陔模型能够解释 ９３．５３％的响应值变化，说明陔模型拟合度较好，试验 篾较小，能够川陔模型来对灵芝孢子粉多糖的提取 牢进行分析和预测． ．２．２．２响虚而分析 根据上述模Ｊ ．每两个 素埘提取率画…响应面 线和等高线，结果 网４～ ６ 窆 簪 曩 ， 善 液料ＬＬ；／（ｍｌｄｇ） 图４液料比和提取温度对提取率影响的响应面曲线及等高线 Ｆｉｇ．４ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｃｕｒｖｅｓ ａｎｄ ｃｏｎｔｏｕｒ ｌｉｎｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｌｉｑｕｉｄ ｍａｔｅｒｉａｌ ｒａｔｉｏ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ 响应而和等离线图等高线的形状反映 交 ｉ 效 的强弱和人小， 形表示阿 索交互作』ｆｊ小 ， 而椭 形表示交｝ｆ作用 著。 分析比较３个 可知，液料比（ ，）对提收率影响 最为显著，表 为｝ｆ｛１线较陡，而提取时间（ ）干¨提取温 度（，Ｙ ）次之。＿＿二【夫】素之间交；Ｌｔ？ｆ４－Ｊｆｌ均 著。 通过软件分析，水提法提取灵芝孢于粉多槠的最 佳 ｌ 艺条件为：液料比２１．２７：ｌ（－ｎｌＪｇ）、提取 度 ８０．１０ 、提取时『ｎＪ ２．１０ ｈ，存此条件下预测多糖提取 率为４．８４％，ｒ 艺参数基本接近小研究中单 索试验 所选取的数值。 ２．２．３模型验证试验 为检验响应 法所得结果的可靠性，采ＪＨ Ｌ述优 化条件灵芝孢子多糖提取试验，存此条件Ｆ实际提取 为４．８１％， ｉ理沦值比较误 为０．６２％，相对误差 较小。因此，黎于单因素试验的响 面法优化］ 艺参 数， 法可行可 ， 有实用价值 分离提取 冯嫣，等：响应面法优化灵芝孢子粉多糖提取工艺的研究 ５ ０ ５０ １５川 液料 ｍＩ川 ２．２５｛１ ｝ ； ∞｛ 回回 回 ５０毒 一～…一一一 ｌ５．（）：１ ｌ７．５ 液料比／（『ｌｌ１．／ｇ） 图５液料比和提取时间对提取率影响的响应面曲线及等高线 Ｆｉｇ．５ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｃｕｒｖｅｓ ａｎｄ ｃｏｎｔｏｕｒ ｌｉｎｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｌｉｑｕｉｄ ｍａｔｅｒｉａｌ ｒａｔｉｏ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ９０ ８５ ８（） 提取温度ｌｆｆ＿： ２．５Ｏ ２ ２５ ２．００ ｌ ７５ １．５０ ７０ ７５ ８０ ８５ ９０ 提取 度 ： 图６提取温度和提取时间对提取率影响的响应面曲线及等高线 Ｆｉｇ．６ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｃｕｒｖｅｓ ａｎｄ ｃｏｎｔｏｕｒ ｌｉｎｅｓ ５５ ３结论 内关于怕物多糖提取的研究较为充分，但对丁 以 芝孢子粉多糖为提取对象的研究还不够系统、本 试验运用水提法提取灵芝孢子粉多糖，通过 素试 提 ． 验乖ｆｌ响应而优化确定水提醇沉法提取灵芝孢子粉多 糖的最优Ｔ艺条件， 蒋提 芝孢子粉多糖的提取 ．瑚 ＿主 牢，许确定陔方法的高效性 、 体结论如下： 、 １）通过单 素试验确定水提法提取灵芝孢子粉 多精的最佳提取条什为：液料比２０：１（ｍＬ ）、提取 度８０（℃、提取时间２ ｈ、 ｉ此条件下，灵芝孢＿了粉多糖 提取牢为４．７８％ 、 ２）运用响应向法试验对试验数据进行多元【ｕｌ Ｊｌ］拟 合，褂到灵芝孢子粉多糖提取 与液料比（ 。）、提取温 度（ ）、提取时问（ ）的二次多项回归模 ： ＝一 ４５．６６＋１．０３Ｘ】＋０．８５Ｘ ＋４．８８ Ｙ３—７．ＯＯｘ１０— Ｉ ！＋０．０３ＸＩＸ ３— ０．０２ｘ ｌｒ０．０３Ｘｉ－一－４．８９ｘ １（） ２２－０．８７Ｘ 。ｘ，Ｊ‘数据进行 蓐分析，结果表明该模型拟合度较好 ３）通过响应研『ｆｆｌ 及等 线分析可知，液料比（Ｙ。） 埘提取率影响最为 菩．表脱为曲线较陡． 提取ｌ１１ｆ 问（ ）和提取温度（ ）次之。 因素之间交互作Ｊ｛】均 ４）运用此模型进行对试验进行工艺条件优化，最 ＿１ 条件为：液料比２１．２７：１（ｍｌＪｇ）、提取温度 ８０．１０ 、提取￣，ｔｆｕｌ ２．１０ ｈ， 此条件下预测多糖提取 牢为４．８４％。 ５）采川响垃Ｉ１：１『优化条什 芝孢子粉多糖提取 验，？ｉ－：ＪｔＬ条件下实际提取率为４．８ｌ％，与理沦值比较 后为０．６２％，相对误蓐较小 凶此应『ｆｊ此模 褂ｍ 的Ｔ 参数准确可靠，具有…定的实用价值 参考文献： Ｉｌｌ张伟，曾园山．灵芝也 的研Ｊ尢进腱…．中凹医结合学报，２００４ ！ （６／：４６３—４６５ 【２】赵东旭，杨新林，术鹤孙， ．灵芝他 研究进展ＩＪ『．中 约 １９９９，３１） （４）：３０５—３０７ 智璇，欧阳蒲月．灵芝多栅降【ｎＬ栅作朋的研究【Ｊ１．、Ｉ 太传统阪 药．２００８．４（８）：２４—２５ ｌ４１ 锋，孟国梁，杨丽 等． 芝多 预防大鼠动脉粥样硬化的文 验研究ｌＪ１．南通大学学报（ 学版１．２００８，２８（４）：２５ ｌ一２５２ ｌ５ｌ陈佧强，黄际微．岁利琼．等． 芝多特渊节糖尿痫犬鼠 精、１０【Ｈ｛彳 的实验研究ｌＪ１ ．…ｑ老年学 忠．２００５，２５（８）：９５７—９５８ ｆ６『 琦珍，林树钱，千 贞，等． 芝多特肽对人肿癌细胞 发的影 “ 『ｌｌ北京大学学报ｆ医学版）．２００７ ３９（６）：６５３—６５６ ７１川佧琴．赵宏艳 诚．等． 芝多）ｌ｝Ｉｌｆ对Ｈ２２肝癌小鼠肠道黏膜免 疫功能的影ｌＩｌｈ］［Ｊ］．・｝】ｉ词［｝］ｐ ｌ爰 合杂志 ２００９，２９（４）：３３５～３３９ （下转第６３页） 研发与工艺 结构。 ３结论 于志鹏，等：基于旋转设计优化胶原蛋白ＡｃＥ抑制肽制备工艺 ６３＝＝Ｉ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ ｆｒｏｍ ｆｉｓｈ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｃｏ—ｐｒｏｄｕｃｔｓ （ＦＰＣＰ）［Ｊ］．Ｆｏｏｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，２０１３，５０：２８９—２９７ 【５】Ｙｅｓｉｍ Ａｋａｇｔｉｎｄｔｉｚ，Ｍａｎｒｉｃｉｏ Ｍｏｓｑｕｅｒａ，Ｂｅｇｏｆｉａ Ｇｉｍ６ｎｅｚ，ｅｔ ａ１．Ｓｅａ ｂｒｅａｍ ｂｏｎｅｓ ａｎｄ ｓｃａｌｅｓ ａｓ ａ ｓｏｎｒｃｅ ｏｆ ｇｅｌａｔｉｎ ａｎｄ ＡＣＥ ｉｎｈｉｂｉｔ０一 本文以鱼胶原蛋白为原料，选用Ｐｒｏｔａｍｅｘ⑧蛋白 酶进行酶解并获得最优酶解参数，即在底物浓度为 １１．８％，酶解ｐＨ值为８．７，加酶量５．４％和酶解温度 ５３．６℃条件下，酶解１ ｈ，利用高效液相色谱法对鱼胶 原蛋白肽的ＡＣＥ抑制活性进行测定结果表明其抑制 ｒｙＰｅｐｔｉｄｅｓ［Ｊ］．ＬＷＴ—Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１４，５０：５７９— ５８５ 【６］Ｌｉｕ ＬｉｊＨａ，Ｚｈｕ Ｃｈｕａｎｈｅ，Ｚｈａｏ Ｚｈｅｎｇ．Ａｎａｌｙｚｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌｒ ｗｅｉａｇｈｔ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｗｈｅｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ ａｎｄ ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ，２００８，８６（１）：１－６ 率达到４５％，且圆二色谱结果表明活性肽溶液以无规 卷曲空间构型为主。 参考文献： 【１］杨英士，陈伟，杨海燕，等．昆仑雪菊中血管紧张素转化酶活性抑 制成分的分离鉴定ＩＪ】．南京农业大学学报，２ｏ１５（１）：１４６—１５１ ｆ７］Ｗｕ ＪＰ，ＡｌｕｋｏＲＥ，ＭｕｉｒＡＤ．Ｉｍｐｒｏｖｅｄｍｅｔｈｏｄｆｏｒ ｄｉｒｅｃｔ ｈｉｇｈ＿ｐｅ ｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ａｓｓａｙ ｏｆ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ ｅｎ— ｚｙｍｅ—ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ，２００２， ９５０：１２５－１３０ ［８］Ｙｕ Ｚ Ｐ，Ｙｉｎ Ｙ Ｇ，Ｚｈａｏ Ｗ Ｚ，ｅｔ ａ１．Ａｎｔｉｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｎ— ｇｉｏｔｅｎｓｉｎ—。ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｐｅｐｔｉｄｅ ｒｖｐｓｌ ｏｎ ｓｐｏｎｔａ—— ｎｅｏｕｓｌｙ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ ｒａｔｓ ｂｙ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｎｉｎ— ［２】罗李王，杨最素，张亚茹，等．酶解青蛤制备ＡＣＥ抑制肽的工艺优 化『Ｊ］．食品工业，２０１６（６）：５６—５９ ［３］肖斌．鲍鱼内脏蛋白质酶解制备降血压多肽的研究［Ｄ］．福州：福 建农林大学，２０１３ ［４］ Ｓｈａｎ Ｈｅ，Ｃｈｒｉｓ Ｆｒａｎｃｏ，Ｗｅｉ Ｚｈａｎｇ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ，ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｊｏｕｍａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２０１４，６２：９１２—９１７ 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