一种可调节肠道菌群平衡的副干酪乳杆菌ET-22[发明专利]

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 CN 1109653 A(43)申请公布日 2020.04.07

(21)申请号 2018111472.4(22)申请日 2018.09.30

(83)生物保藏信息

CGMCC No.15077 2017.12.18

(71)申请人 内蒙古伊利实业集团股份有限公司

地址 010000 内蒙古自治区呼和浩特市金

山开发区金山大街1号(72)发明人 洪维鍊　刘伟贤　赵雯　孙婷　

司徒文佑　(74)专利代理机构 中科专利商标代理有限责任

公司 11021

代理人 张国梁(51)Int.Cl.

C12N 1/20(2006.01)A23L 33/135(2016.01)

()发明名称

一种可调节肠道菌群平衡的副干酪乳杆菌ET-22(57)摘要

本发明涉及一种可调节肠道菌群平衡的副干酪乳杆菌ET-22。本发明提供副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株以及其用于促进双歧杆菌和/或乳酸菌的生长和/或调节受试者菌群平衡的用途和相关使用方法。本发明还提供制备含有所述菌株的用于促进双歧杆菌和/或乳酸菌的生长和/或调节受试者菌群平衡的组合物的方法。本发明的菌株能够促进双歧杆菌和/或乳酸菌的生长和/或调节受试者菌群平衡，具备良好的效果。

C12R 1/225(2006.01)

权利要求书1页 说明书10页 附图2页

CN 1109653 ACN 1109653 A

权　利　要　求　书

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1.副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏日期为2017年12月18日，保藏编号为CGMCC No.15077。

2.副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株用于调节受试者菌群平衡的用途。

3.副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株用于促进双歧杆菌和/或乳酸菌的生长的用途。

4.一种用于调节受试者菌群平衡的方法，所述方法包括将副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株施用给所述受试者以调节其菌群平衡。

5.权利要求4所述的方法，其中所述菌株通过胃肠道途径施用给所述受试者。6.权利要求4或5所述的方法，其中所述受试者为哺乳动物。7.一种促进双歧杆菌和/或乳酸菌的生长的方法，所述方法包括将副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株施用给所述受试者以促进双歧杆菌和/或乳酸菌的生长。

8.权利要求7所述的方法，其中肠杆菌的生长不受影响。9.副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株用于制备促进双歧杆菌和/或乳酸菌的生长和/或调节受试者菌群平衡的组合物的用途。

10.一种制备用于促进双歧杆菌和/或乳酸菌的生长和/或调节受试者菌群平衡的组合物的方法，所述方法包括将副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株加入到组合物中。

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一种可调节肠道菌群平衡的副干酪乳杆菌ET-22

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技术领域

[0001]本发明涉及微生物技术领域，尤其是涉及一种能显著促进双歧杆菌和乳酸菌的生长的副干酪乳杆菌及其用途。

背景技术

[0002]1.肠道菌群失调对健康的危害

[0003]肠道菌群的平衡与人体健康息息相关。肠道菌群包括有益菌、中性菌和有害菌。健康的人体肠道中有益菌占据优势地位，并且与有害菌不断相互作用，维护人体健康。如果由于各种因素影响使肠道中有益菌减少，有害菌便会大量繁殖，肠内微生态平衡被打破，引起肠炎、腹泻等多种临床症状。同时，临床上通常使用大量的抗生素，虽然能有效的杀害有害菌，但同时杀灭有益菌，造成肠道菌群失调，引起疾病。[0004]对于肠道菌群失调者，经口补充益生菌是调节肠道菌群直接有效的办法。经口补充益生菌制剂或含益生菌产品可以直接或间接调节肠道菌群组成，激活宿主内源性微生物群或者免疫系统活性来实现益生作用。[0005]2.益生菌的安全性及其应用

[0006]世界卫生组织对益生菌产品的定义为食品中含有充足数量的活的微生物，经过食品加工的各个过程，以及进入人体肠道以后，仍能保持适当的活菌数量和菌活性。因此菌株在菌粉的制作、产品的生产加工以及经人体胃肠道的胃酸、胆盐胁迫后，菌株应能够保持较为稳定的活菌数量。此外，即便乳酸菌是公认的安全菌株，但近年来的研究表明，很多乳酸菌，尤其是食源性乳酸菌和肠道乳酸菌，也出现了毒性因子与抗生素抗性，对人类的健康造成了潜在风险。因此，在评价菌株益生特性的同时，也应全面考量其在食用过程的安全性与生产加工过程中的稳定性。

发明内容

[0007]针对现有技术存在的上述问题，本申请提供了一种副干酪乳杆菌及其用途。本菌株单菌即具有显著促进肠道双歧杆菌和乳酸菌增长的能力，可以耐受体外模拟胃肠液胁迫环境，实验表明该菌株无口服急性毒性，无抗生素耐受，安全可以用于食品加工。[0008]在一些实施方案中，本发明提供副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株，保藏于中国普通微生物菌种保藏中心(保藏编号CGMCC No.15077)。[0009]在一些实施方案中，本发明提供一种培养物，其包括所述的副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株。在一些实施方案中，所述培养物还可以包括适当的乳酸菌培养基。在一些实施方案中，所述乳酸菌培养基包括固体培养基和液体培养基，例如MRS培养基。在一些实施方案中，所述培养物包括副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株的冷冻干燥培养物。[0010]在一些实施方案中，本发明提供副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株用于调节受试者菌群平衡的用途。

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在一些实施方案中，本发明提供副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株用于促进双歧杆菌和/或乳酸菌的生长的用途。

[0012]在一些实施方案中，本发明提供一种用于调节受试者菌群平衡的方法，所述方法包括将副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株施用给所述受试者以调节其菌群平衡。

[0013]在一些实施方案中，所述菌株为具有活性的菌株。在一些实施方案中，所述菌株可以通过胃肠道途径施用给所述受试者。在一些实施方案中，所述菌株可以通过口服施用给所述受试者。在一些实施方案中，所述菌株通过其它适合肠道吸收的方式施用给受试者，例如通过不经过口腔、咽喉和食道的方式如饲管施用给受试者。[0014]在一些实施方案中，所述受试者可以为哺乳动物。在一些实施方案中，所述受试者可以为哺乳动物，例如人、猴、马、牛、犬、猫、小鼠、大鼠和猪等。[0015]在一些实施方案中，本发明的方法和组合物促进双歧杆菌和乳酸菌的生长。[0016]在一些实施方案中，本发明的方法和组合物使用后肠杆菌等肠道细菌的生长不受影响。

[0017]在一些实施方案中，本发明提供一种促进双歧杆菌和/或乳酸菌的生长的方法，所述方法包括将副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株施用给所述受试者以促进双歧杆菌和/或乳酸菌的生长。[0018]在一些实施方案中，本发明的方法和组合物使用后肠杆菌等肠道细菌的生长不受影响。

[0019]在一些实施方案中，本发明提供副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株用于促进双歧杆菌和/或乳酸菌的生长和/或调节受试者菌群平衡的用途。[0020]在一些实施方案中，本发明提供副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株用于制备促进双歧杆菌和/或乳酸菌的生长和/或调节受试者菌群平衡的组合物的用途。在一些实施方案中，所述组合物包括适合受试者肠道吸收的组合物。在一些实施方案中，所述组合物包括食品组合物。在一些实施方案中，所述副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株可以制成适当的食品组合物，包括保健食品、营养补充食品、功能食品等。在一些实施方案中，所述组合物中可以包括例如缓冲剂、赋形剂、稀释剂、载体、稳定剂和/或防腐剂。在一些实施方案中，所述食品可以包括饮品如粮食制品、油、肉制品、乳制品、水产品、罐头、含糖食品、冷食、酒品、宠物食品等。在一些实施方案中，所述食品可以包括饮品如乳制饮品、茶、咖啡、口香糖及洁牙糖、宠物用肉干或以上的组合。在一些实施方案中，本发明的菌株可以制备成食品组合物，例如乳制饮品、茶、咖啡，其中乳制饮品可包含发酵乳、酸奶、奶酪或乳粉。在组合物中，所述菌株可以以有效量存在。例如在食品组合物或医药组合物中，乳酸菌菌株的数量为106CFU以上，例如107CFU以上，108CFU以上，109CFU以上，1010CFU以上，1011CFU以上；较佳者，乳酸菌菌株的数量为109CFU以上。[0021]在本文中，益生菌可以指活的微生物，其能够添加到组合物如食品等中，保持活性并且对摄取含有所述益生菌的组合物的对象发挥其生理学作用。益生元可以指这样的物质，所述物质被添加到组合物如食品中，其对微生物群的组分发挥作用，有利于建立对健康有利的细菌和/或阻碍致病细菌建立。在一些实施方案中，本发明的菌株可以制备成益生菌或益生元组合物。

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在一些实施方案中，已经发现益生菌促进双歧杆菌和/或乳酸菌的生长和/或调节

菌群平衡的作用是菌株特异性的。已经发现副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株与不含所述菌株的对照或对照菌株如其它乳杆菌菌株(如普通副干酪乳酸杆菌菌株)相比具有优异的促进双歧杆菌和/或乳酸菌的生长和/或调节菌群平衡的作用。在一些实施方案中，副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株与不含所述菌株的对照或对照菌株如其它乳杆菌菌株(如普通副干酪乳酸杆菌菌株)相比具备提高的促进双歧杆菌和/或乳酸菌的生长和/或调节菌群平衡的作用。在一些实施方案中，副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株与不含所述菌株的对照或对照菌株如其它乳杆菌菌株(如普通副干酪乳酸杆菌菌株)相比能够促进双歧杆菌和/或乳酸菌的生长和/或提高受试者的菌群平衡(例如提高10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多倍)。在一些实施方案中，促进双歧杆菌和/或乳酸菌的生长和/或调节受试者菌群平衡可以通过本领域已知的方法测量。在一些实施方案中，促进双歧杆菌和/或乳酸菌的生长和/或调节受试者菌群平衡可以通过例如比较实验前后自身及组间双歧杆菌、乳酸菌、肠球菌、肠杆菌的变化情况进行。在一些实施方案中，副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株可以制备用于促进双歧杆菌和/或乳酸菌的生长和/或调节受试者菌群平衡的组合物和/或试剂盒。在一些实施方案中，所述促进双歧杆菌和/或乳酸菌的生长和/或调节受试者菌群平衡的组合物和/或试剂盒还可以包括其它适当的促进双歧杆菌和/或乳酸菌的生长和/或调节受试者菌群平衡的物质。

[0023]在一些实施方案中，本发明提供一种生产用于制备促进双歧杆菌和/或乳酸菌的生长和/或调节受试者菌群平衡的组合物的方法，所述方法包括将副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株加入到组合物中。附图说明

[0024]图1.副干酪乳杆菌ET-22耐酸、耐胆盐特性评价结果。[0025]图2.副干酪乳杆菌ET-22肠道黏附性评价结果。[0026]图3.副干酪乳杆菌ET-22调节肠道菌群结果。

[0027]图4.副干酪乳杆菌ET-22与干酪乳杆菌LC-01调节肠道菌落变化的比较结果。[0028]【生物材料保藏】

[0029]本发明的副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)ET-22菌株保藏于：

[0030]中国典型培养物保藏中心/中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期为2017年12月18日、保藏编号CGMCC No.15077；该保藏单位的地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。具体实施方式

[0031]除非另外专门定义，本文使用的所有技术和科学术语都与相关领域普通技术人员的通常理解具有相同的含义。

[0032]本发明所述的乳酸菌菌株的冷冻干燥培养物已保藏于中国典型培养物保藏中心以及中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。保藏的详细资料如下表所示：

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乳酸菌菌株的保藏资料

[0035]

乳酸菌菌株的形态学以及一般性质

[0037]根据16S rDNA序列分析以及API细菌鉴定系统分析结果来确认菌株在分类学上的特征。上述菌株在形态学及一般性质上的特征详细列于下表：[0038]乳酸菌菌株的形态学及一般性质特征

[0039]

[0036]

本菌株的发酵条件为：

[0041]MRS液体培养基：蛋白胨，10.0g；牛肉膏，10.0g；酵母浸粉，5.0g；葡萄糖，20.0g；磷酸氢二钾，5.0g；柠檬酸氢二铵，2.0g；乙酸钠，5.0g；七水合硫酸镁，0.5g；四水合硫酸锰，0.2g；吐温80，1.0g；琼脂15.0g；蒸馏水1000mL。调整pH至6.2～6.4之间，121℃灭菌15分钟。[0042]L.paracasei ET-22为微好氧菌，兼性厌氧环境生长较佳，产乳酸，具有耐酸性，可耐受pH值2.5的酸性环境及耐0.4％的胆盐环境4小时，嗜中温菌，生长温度范围在15～45℃，最适生长温度在37℃左右。[0043]实施例1：人工胃液、肠液耐受性、人工胆汁耐受性[0044]L.paracasei ET-22活化三次后分装8支，取一支进行菌落计数，计算初始活菌数。其余七只，以4000rpm离心10min，除去上清液后置于pH2.5培养基中培养，37℃，培养1～3小时，每小时取一管混合液，以4000rpm离心10min，除上清液后，用5mL RO water清洗两次后计算活菌数。另外4支3小时候以4000rpm离心10min，去除上清液(pH 2.5MRS broth)后，以含1.5％牛胆汁MRS broth将4管充分混匀，在平均分配至4管，37℃培养1～4小时。每小时取1管混合液，以4000rpm离心10min，去除上清液后，用5mL RO Water清洗两次后计算存活菌数。统计不同时间测得活菌数的变化，进行比较分析，菌株的存活率见图1。[0045]结果显示，总菌数经由酸性培养基及胆盐环境连续处理，L.paracasei ET-22经模

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拟消化环境连续7小时之胃酸、胆碱处理仍维持5次方菌数，证明L.paracasei ET-22是可以通过人体消化系统环境的严格考验。[0046]实施例2.肠道细胞吸附效果[0047]将载玻片以镊子夹取盖玻片，酒精灯杀菌后，放入6孔盘中备用。将Caco-2细胞从保藏管中取出，调整细胞后，移至6孔盘中培养，待满盘后，再进行实验。试验时，移除盘中液体，以PBS缓冲液清洗两次后，每孔加入1.5mL菌液(1×109CFU/mL)及1.5mL细胞培养液(含有10％PBS及1％penicilin-streptomycin)混匀，于恒温培养箱中培养(37℃，5％CO2)4小时后，无菌PBS清洗两次，甲醇固定细胞，革兰氏染色，显微镜下计算活菌数。[0048]通过黏附实验对菌株对Caco-2细胞的黏附性进行检测，结果如图2，L.paracasei ET-22对Caco-2细胞具有较强的黏附性。[0049]实施例3：肠道菌群调节效果

[0050]本实施例意图证实本发明的副干酪乳杆菌在肠道调节方面的效果。[0051]取36只健康SPF级BABL/c小鼠，体重18-22g(由北京华阜康生物科技有限责任公司提供)。适应性饲养3天后，将其随机分为3组，每组12只，即空白对照组，样品组。向每组动物分别灌胃溶解了乳双歧杆菌BL-99菌粉的无菌水(灌胃体积0.2mL/10g)，空白对照组灌胃相同体积的无菌水。每天1次，连续饲喂或灌胃14天。灌胃计量：1.3×107CFU/ml(按人体需要量为2×109CFU/天，人体和小鼠换算系数0.0026进行换算)。取灭菌离心管，编号，适应性喂养后于无菌条件下采集小鼠粪便，每只2-3粒，约100mg，低温条件转移至无菌操作间进行菌群的检测。实验结束时，再次采集小鼠粪便。使用苦味酸对小鼠进行分组编号后，分别于给予受试物第8天、第14天称重，计算小鼠灌胃量，实验结束时称重1次。菌落计数：根据待鉴定菌种配制选择性培养基，待测菌种及相应培养基如表3，灭菌，摇匀，冷至45℃-50℃倾注平板，备用。

[0052]表1待测菌种及对应选择性培养基

[0053]

将采集的小鼠粪便，置于装有0.5mL生理盐水的灭菌管中，配制成菌悬液，使用前

震荡1min。使用0.1mL微量移液器吸取0.1mL菌悬液，缓慢注于0.9mL灭菌生理盐水中，震荡或反复吹打使其混匀，制成1∶10的菌悬液。另取0.1mL微量移液器吸头，依此方法，进行10倍梯度稀释，直至10-7g/ml。根据待鉴定菌种的活菌数，选择两个连续的适宜稀释度，每个稀释度使用10μL微量移液器吸取10μL菌悬液，在选择性琼脂平板上进行表面涂布，按表2所示培养条件进行培养。菌落计数方法参考《GB 47.2-2010食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》进行。

[0055]表2肠道菌群检验用培养基及鉴定方法

[00]

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采用SPSS17.0进行数据统计。比较实验前后自身及组间双歧杆菌、乳酸菌、肠杆菌

的变化情况。

[0058]实验期间动物的体重变化结果如表3所示。在实验期内，动物表征正常，给予受试物后未出现任何不良反应，实验周期内，两组动物体重并未出现显著差异。从表4～6可以看出，副干酪乳杆菌ET-22能显著促进双歧杆菌和乳杆菌的生长，对于肠杆菌无显著影响。通过自身组别干预前后的比较来看，ET-22的增幅明显高于业内知名菌株干酪乳杆菌LC-01(DSM 19465)，具有优异的效果。[0059]因此，本研究中副干酪乳杆菌ET-22具有调节肠道菌群的功效(图3)。[0060]表3动物的体重变化

[0061]

[0057]

[0062][0063]

表4受试前后动物肠道双歧杆菌的变化(LgCFU/g)

结果显示，ET-22组别自身干预后的增幅比起业内知名菌株LC-01的增幅显著提

高：ET-22增加了1.24个数量级，LC-01只增加了0.76个数量级(图4)。ET-22为乳酸杆菌属，却能够显著增加双歧杆菌属超过一个数量级，且增加的量高于LC-01，显示其增加肠道好菌的调节能力极强。

[0065]表5受试前后动物肠道乳杆菌的变化(LgCFU/g)

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结果显示ET-22组别自身干预后的增幅比起业内知名菌株LC-01的增幅高：ET-22

增加了0.77个数量级，LC-01增加了0.61个数量级(图4)。[0069]表6受试前后动物肠道肠杆菌的变化(LgCFU/g)

[0070]

实施例4：肠道菌群调节效果(测序结果)

[0072]本实施例意图证实本发明的副干酪乳杆菌在肠道调节方面的效果，其原理和步骤参见“保健食品检验与评价技术规范-调节肠道菌群功能判定标准”。与实施例3不同之处在于本实验采用16S rDNA测序结果。[0073]实验样品：菌粉样品(活菌数见包装规格)由内蒙古乳业技术研究院有限责任公司提供。

[0074]实验材料：6周龄健康成年BABL/c小鼠182只，体重约18-20g。[0075]实验步骤[0076]1.样品准备

[0077]活菌样品(ET-22)：依据样品规格，各称取1g活菌样品，分别使用PBS溶液悬浮至40ml，即活菌浓度均为2.5x109CFU/ml。[0078]高剂量组：按照小鼠0.2ml/10g灌胃量计算，20g小鼠灌胃量为0.4ml，高剂量组小鼠灌胃剂量为109CFU/20g。[0079]中剂量组：分别取5ml高剂量悬浮液加入PBS定容至50ml，按照小鼠0.2ml/10g灌胃量计算，20g小鼠灌胃量为0.4ml，中剂量组小鼠灌胃剂量为108CFU/20g。[0080]低剂量组：分别取5ml中剂量组悬浮液加入PBS定容至50ml，按照小鼠0.2ml/10g灌胃量计算，20g小鼠灌胃量为0.4ml，低剂量组小鼠灌胃剂量为107CFU/20g。[0081]2.调节肠道菌群实验[0082](1)6周龄BABL/c小鼠饲养于清洁级动物房，温度22℃，湿度10-60％，12小时明暗

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[0071]

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交替照明，标准饲料喂养，自由饮水。[0083](2)适应性喂养5天，182只小鼠随机分为13组，每组14只，分组情况见表7。[0084]表7调节肠道菌群实验分组

[0085]

(3)开始灌胃前，无菌条件下采集每只小鼠粪便，标记，-20℃保存，检测肠道菌群。

[0087](4))实验按照0.2ml/10g灌胃量给予各受试物，对照组1-14天给予PBS，实验组分别依据表7灌胃给予相应剂量的受试物。小鼠每周称重一次，根据体重调整灌胃量。[0088](5)14天后无菌条件下采集每只小鼠粪便，标记，-20℃保存，检测肠道菌群。[00]3小鼠肠道微生物多样性变化[0090]微生物多样性是基于Illumina HiSeq测序平台，利用双末端测序(Paired-End)的方法，构建小片段文库进行测序。通过对Reads拼接过滤，OTUs(Operational Taxonomic Units)聚类，并进行物种注释及丰度分析，可以揭示样品的物种构成；将优化序列进行聚类，划分OTU，并根据OTU的序列组成得到其物种分类。基于OTU分析结果，对样品在各个分类水平上进行分类学分析，获得各样品在菌属水平上的群落结构。[0091]通过Alpha多样性分析研究单个样品内部的物种多样性，统计了各样品在97％相似度水平下的Ace、Chao1、Shannon及Simpson指数，绘制了样品稀释曲线及等级丰度曲线；进一步进行α多样性分析(Alpha Diversity)、β多样性分析(Beta Diversity)和显著物种差异分析等等，可以挖掘样品之间的差异。肠道菌群α多样性指数比较：Chao1和ACE指衡量物种丰度即物种数量的多少；Shannon和Simpson指数用于衡量物种多样性，受样品群落中物种丰度和物种均匀度的影响。相同物种丰度情况下，群落中各物种具有越大的均匀度，则认为群落具有越大的多样性，Shannon指数值越大，Simpson指数值越小，说明样品的物种多样性越高。在属的水平与对照组相比，ET-22干预后可显著增加小鼠肠道中的相对丰度。其中低剂量组的OTU、ACE、Chao1指数显著上升，显示ET-22低剂量最能够明显增加肠道微生物多样性。

[0086]

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[0092]

[0093][0094]

黄色(下划线)标示：与对照组相比有统计上显著差异(p＜0.05)。在致病菌属的水平，控制组相比，ET-22低剂量与中剂量两组小鼠肠道中的脱硫弧

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菌(Desulfovibrio)均显著下降；中剂量与高剂量两组的幽门螺杆菌(Helicobacter)数量显著下降；低剂量与中剂量三组的高埃希氏菌-志贺氏菌属(Escherichia-Shigella)均显著下降。BL-99可显著增加小鼠肠道中的乳酸杆菌属(Lactobacillus)相对丰度，且BL-99低剂量组对乳酸杆菌(Lactobacillus)的增加程度最为显著。[0095]因此，补充不同剂量的ET-22可以调节肠道菌群平衡，抑制有害菌甚至是致病菌数量，起到潜在的健康之功效。[0096]除非另有说明，本说明书(包括权利要求书)中使用的所有表示成分、细胞培养、处理条件等的量的数字应当理解为在所有条件下受到术语“约”的修饰。因此，除非另有相反的说明，数值参数为近似值，并且可以根据通过本发明试图获得的期望特性而变化。除非另有说明，一系列元素之前的术语“至少”应当理解为指该系列中的每个元素。本领域技术人员会认识到或者能够利用不超过常规实验确定本文所述的本发明的具体实施方案的许多等同物。所附权利要求书意图涵盖这类等同物。[0097]本领域技术人员会清楚，可以进行本发明的许多修改和变化而不背离其精神和范围。本文所述的具体实施方案仅通过实例的方式提供，并不意味着以任何方式。本发明的真正范围和精神通过所附权利要求书示出，说明书和实施例仅是示例性的。

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图1

图2

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图3

图4

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