维生素B1及其制剂及其制剂常采用的方法有非水滴定法，紫外分光光度法和硫色素荧光法。中国药典用非水溶液滴定法测定原料药，片剂和注射剂采用紫外分光光度法，USP采用硫色素荧光法。采用非水溶液滴定法可能受到氢卤酸盐的干扰，对操作人员要求较高，采用硫色素滴定法不受氧化破坏产物的干扰，测定准确但操作繁琐，且荧光测定受干扰因素较多，本实验采用紫外分光光度法进行含量测定。
1 实验装置及试剂
1.1 仪器 BS210S型天平，UV751GD型紫外/可见分光光度计。
1.2 实验材料 维生素B1片（来源：成都第一制药，规格：1--00片*10mg，批号：061204），维生素B1标准品（分析纯），维生素B1对照品（200ug/ml，2.0mg/ml），维生素B1标准溶液（0.250mg/ml），空白辅料，盐酸溶液（9→1000）。
2 实验方法 处方分析：
组成 维生素B1 淀粉 糊精 硬脂酸镁 生产
处方量(g)
10 20 30 1.0 1000片
比例(%) 16.39 32.78 49.18 1.639
根据处方量分析，维生素B1含16.39%，辅料含83.61%。平均片重约61mg，取相当于25mg维生素B1的片粉约0.15g。 1、测定方法：
取供试品20片，精密称定，研细，称取片粉适量（约相当于维生素B125mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇15min使维生素B1溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系数（E11%cm）为421计算，即得。 2、方法验证 2.1.线性和范围
精密称取维生素B1对照品约25mg，置100 ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶解并稀释至刻度，制备成含维生素B1 250μg/ml的对照溶液。分别精密量取该溶液3、4、5、6、7ml置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，即得系列浓度的对照品溶液，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，以吸收度（A）对浓度（C）回归处理，得标准曲线和回归方程。 2.2. 回收试验（准确度试验）
对照品溶液的制备：对照品溶液的制备，同2.1项下。
供试品溶液的制备：精密称取维生素B1精制原料约0.25g，置50ml量瓶中，加入盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，制成5.0mg/m维生素B1溶液储备液；分别精密量取该溶液4、5、6ml置已加入比例量辅料（0.15g，1/100天平）的100ml量瓶中（一式三份），加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇使之溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，摇匀，得高、中、低三种浓度的试验溶液，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，用对照品比较法计算含
量。
2.3、精密度试验
取供试品20片，精密称定，研细，称取片粉适量（约相当于维生素B125mg），一式5份，置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）适量，振摇15min，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，即得约含维生素B112.5ug/ml的供试品溶液。
另取维生素B1对照品适量，用盐酸溶液（9→1000）稀释制成12.5μg/ml的对照品溶液。照分光光度法（ChP2005二部附录IVA）在246nm处分别测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度，用百分吸光度和对照品比较法分别进行计算，即得。 表1 维生素B1标准曲线的制备
编号 1 2 3 4 5 对照液浓度 7.50 10.00 12.50 15.00 17.50 （ug/ml）
吸光度A 0.312 0.391 0.480 0.559 0.640
图2 维生素B1标准曲线图
由图2可得，采用此法进行维生素B1含量的测定，在浓度为8.00-16.00ug/ml
范围内线性关系较好（R2=0.9997）。
表2 维生素B1片回收率实验结果
编加入对照液吸光测得对回收率号 量
浓
度度A 照液浓（%）
度（ug/ml）
1 10.00 10.00 2 10.00 10.00 3 10.00 10.00 4 12.50 12.50 5 12.50 12.50 6 12.50 12.50 7 15.00 15.00 8 15.00 15.00 9 15.00 15.00
0.370 0.370 0.370 0.455 0.456 0.455 0.539 0.539 0.541
14.44
96.3
14.38
95.9
14.38
95.9
11.84
94.7
11.87
95.0
11.84
94.7
9.26
92.6
9.26
92.6
9.26
92.6
（mg） （ug/ml
）
1 95.9% 2 3 X 96% RSD 0.24% RSD 1.6% 高 95.9% 96.3% 中 94.7% 95.0% 94.7% 94.8% 0.18% 低 92.6% 92.6% 92.6% 92.6% 0 回收率平均值(%)=94.48% RSD=1.6%
由表2可得，采用此法进行维生素B1含量的测定，加入量在10.00-15.00mg范围内，对照液浓度在10.00-15.00ug/ml范围内时，回收率较高。 表3 维生素B1片精密度考察实验结果
编号 加入片粉量吸光度浓（g） 1 2 3 4 5 对照品
0.1724 0.1730 0.1723 0.1716 0.1723
度百分吸光对照品比较法（%） 标准
曲线%
95.88 94.69 94.91 95.00 96.40
88.38 87.14 87.38 87.35 89.03
A 0.431 0.427 0.428 0.425 0.433 0.447
（ug/ml） 度法（%） 12.57 12.61 12.61 12.51 12.56 12.50
81.44 80.43 80.62 80.70 81.89
当m=0.1715g 维B1浓度 12.50ug/ml RSD1（百分吸光度法）=0.8% RSD2（对照品比较法）=0.8% RSD3（标准曲线法）=0.9%
表4 维生素B1片含量测定结果
测定方法 含量为标示量的百分数范围 含量为标示量的百分数均值
81.02% 95.38% 87.86%
百分吸光度法 84.43%-81.89% 对照品比较法 94.69%-96.40% 标准曲线法
87.14%-89.03%
百分吸光度法：含量不符合规定标准。 对照品比较法：含量符合规定标准。 标准曲线法：含量符合规定标准。
高效液相色谱法测定维生素B1的含量
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