目的:了解本地区解脲支原体耐药状况,指导临床合理用药。方法:应用支原体微量培养及同步药敏试剂盒,检测解脲支原体及其药敏分析。美满霉素、交沙霉素、克拉霉素三种抗生素敏感性高,不易产生耐药性,且耐药率变化不大;结论:临床治疗UU引起的非淋菌性尿道炎,本地区应推荐美满霉素、强力霉素、交沙霉素作为治疗解脲支原体的首选药物。不论是UU单项感染或是UU+MH混合感染均产生多重耐药,支原体的耐药问题严重,治疗要根据药物敏感性报告用药。提示:在进行治疗前做支原体药敏试验很有必要。
支原体(mycoplasma)是细胞外生存的最小微生物。是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物,大小一般在0.3~0.5um之间,呈高度多形性,有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态,能在无生命培养基中生长繁殖的最小原核细胞型微生物。它不同于细胞,也不同于病毒。种类繁多、分布广泛、造成的危害相当大,涉及人、动物、植物及昆虫等多个领域,给人类健康和科研工作带来不利影响。从人体分离的16种支原体中,5种对人有致病性,即肺炎支原体、解脲支原体、人型支原体、生殖支原体及发酵支原体。脲解支原体属(ureaplasma)含脲解支原体等体、脲解支原体及人型支原体等对人有致病性。肺炎支原体是呼吸道感染、肺炎的主要原因。能引起人类泌尿生殖道感染的有解脲支原体(UU)、人型支原体(MH)、生殖道支原体等,其中最常见的是UU,约有30%~40%男性的非衣原体、非淋病性尿道炎是由UU所致;此外UU可通过胎盘感梁胎儿,引起早产、死胎、低体重胎儿和新生儿呼吸道感染。由于不合理使用抗生素,支原体对常用抗生素耐药已非常普遍,对其进行培养及耐药性监测显得尤为重要。解脲支原体(M.urealyticum)为支原体属中唯一的一个种,因生长需要尿素而得名。菌落微小,直径仅有15~25um,须在低倍显微镜下观察,故旧称T株 (tiny strain)。解脲支原体与女性生殖健康关系最为密切,解脲支原体可引起泌尿生殖道感染,并被认为是非淋球菌性尿道炎中仅次于衣原体(占50%)的重要病原体。由于80%孕妇的生殖道内带有解脲支原体,因此可通过胎盘感染胎
儿而导致早产、死胎,或在分娩时感染新生儿,引起呼吸道感染。
我国近年来发病的例数不断增加。随着广谱抗生素的大量使用,耐药菌株在不断增加。本文对2009年7月~2009年12月我院门诊患者标本作解脲支原体(UU)、人型支原体(MH)培养和药物敏感性试验。现将结论报告如下:
一、材料与方法
(一)标本来源 2009年7月~2009年12月我院妇科、皮肤科患者标本共9例,男性2例,女性7例,患者均为呈贡泌尿道感染者,年龄不限。男性患者均有尿道内不适和浆液性分泌物,女性患者大多数有白带增多,白带涂片检查均有脓白细胞增多。
(二)标本采集 男性患者用无菌棉球擦干尿道口,用无菌棉拭子插入尿道2 cm~3 cm,轻轻旋转后取出;女性患者清除阴道口分泌物后,用无菌棉拭子插入宫颈1 cm~2 cm,轻轻旋转后取出。标本取出后立即接种培养。
(三)试剂与方法 采用郑州安图绿科生物工程有限公司生产的UU和MH分离鉴定、药敏试剂盒。严格按说明书操作及判读结。
(四)试剂 试剂盒采用郑州安图绿科生物工程有限公司支原体分离、鉴定、药敏检测试剂盒。测定药物包括:强力霉素、交沙霉素、司帕沙星、罗红霉素、美满霉素、克拉霉素、阿奇霉素、林可霉素、大观霉素、甲砜霉素、共10种抗生素。
(五)病原体检测方法 采用郑州安图绿科生物工程有限公司的试剂检测UU、Mh。严格按照检测试剂使用说明书无菌操作,标本采集后立即送检,室温保存不得超过2h,2~
8℃不超过5h。首先将50μl完全溶解培养基加入C-空白孔中,再将无菌拭子采集的样本插入完全溶解培养基中,挤压旋转拭子数次,使拭子中样本渗入培养基中,充分混匀接种了样本的液体培养基,用加样器分别准确量取50ul接种到试剂条各孔中(除C-),再滴加一滴无菌石蜡油(约50ul),然后盖上盖子。36 ℃恒温箱UU培养24 h,Mh培养24 h,培养基不变色为阴性,培养基由橙黄色变成红色,且清亮透明为阳性,表示有支原体生长。
(六)实验材料 采用郑州安图绿科生物工程有限公司生产的
Mycoplasma culture,identification,susceptibility kit试剂盒进行测试。该试剂盒集鉴定、药敏为一体,在同一试剂盒分别设置生长对照孔,解脲支原体(UU)、人型支原体(MH)鉴定孔及10种抗生素测试孔。操作严格按说明书进行。
二、结果
(一)支原体阳性检出率 从9例患者标本中检出支原体共7株阳性率为 78 %。其中UU单项感染5例,占阳性总数的71%,UU+MH混合感染1,占阳性总数的14 %,H单项感染4例,仅占阳性总数的57%。
(二)支原体药物敏感试验结果 分别对UU阳性、UU+MH阳性、MH阳性的标本作药物敏感性试验并进行比较分析发现,不论是UU单项感染或是UU+MH混合感染者强力霉素、美满霉素的耐药率最低,其次是克拉霉素,耐药率最高为大观霉素。MH单项感染病例相对较少,耐药情况有待进一步探讨。本次调查男性支原体感染率为0,女性支原体感染率为100%,经统计学检验P在7例女性生殖道分泌物标本中解脲人型支原体都有生长的有1例,只有解脲支原体生长的有5例,人型支原体的有1例。7例女性支原体生长的药敏结果如下表:
3 讨论
由于试剂检测原理是依据培养与生化,利用PH值的升高致基础液变色而判断结果,极少量碱性标本可能会直接导致溶液变红,出现假阳性,解脲支原体如同其他支原体一样,在人工培养基上可以生长,但营养要求较高,需要供给胆固醇和酵母。酸碱度要求低,最适PH值6.0±0.5具有尿素酶,在PH6.0含有尿素的培养基中,能分解尿素,产生NH3,因PH上升使含酚红指示剂的培养液由黄变红。如培养液过碱PH8.0以上时,其中UU会迅速死亡。解脲支原体生物学特性对PH要求较低(6.0),具有分解尿素产生氨,使酚红指示剂变色,不分解葡萄糖、精氨酸,而人型支原体可分解精氨酸,但不分解尿素和葡萄糖,人型支原体除引起人类非淋菌性尿道炎外,还可引起慢性前列腺炎、宫颈炎和盆腔炎。临床能引起性病的支原体主要包括解脲支原体和人型支原体,其发病率一直呈上升趋势,耐药性也随着抗生素的滥用日趋厉害,危害着人类的健康。治疗及防治支原体传播的关键是及时准确的诊断。
(作者单位:云南省楚雄医药高等专科学校)
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