维普资讯 http://www.cqvip.com 第２６卷第１期 河南科学 ＶｏＩ．２６ Ｎｏ．１ ２００８年１月 ＨＥＮＡＮ ＳＣＩＥＮＣＥ Ｊａｎ．２０ｏ８ 文章编号：１００４—３９１８（２００８）０１—００４２—０３ 垂柳的组织培养及植株再生体系研究 袁秀云 ， 郭利勇２ 马 杰 ， 张仙云 （１Ｉ郑州师范高等专科学校生物技术研究所，郑州４５００４４￣ ２．河南省经济林和林木种苗工作站，郑州４５０００８） 摘要：对垂柳愈伤组织和植株再生体系进行了研究，结果显示茎段比较适合诱导愈伤组织，质量浓度为１．０ ｍｇ／Ｌ 和２．０ ｍｇ／Ｌ的６一ＢＡ均能诱导垂柳茎段愈伤组织；ＭＳ＋６－ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ ０．５ ｍｇ／Ｌ的激素配比最 为适合胚状体和芽的分化；ＭＳ＋６一ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ＋Ａｃ ０．３％培养基能促使垂柳根的形成，且能促使芽生长，最终形成 幼苗． 关键词：垂柳；组织培养；植株再生 中图分类号：Ｓ ６８７．１ 文献标识码：Ａ 垂柳ＬＳａｌｉｘ ｂａｂｙｌｏｎｉｃａ Ｌ．）是杨柳科（Ｓａｌｉｃａｃｅａｅ）柳属落叶乔木．其枝条柔软下垂，树姿优美潇洒，别有风 致，具有独特的观赏价值，自古是重要的园林树种．垂柳根系发达，枝叶繁茂，发芽早，落叶迟，生长快，材质 好，适应性广，抗逆性强，抗旱，耐水湿，可作行道树、庭荫树、固岸护堤及平原造林树种；垂柳可吸收空气中 ＳＯ 和ＨＦ等有害气体，又可适用于工厂绿化【１］．但垂柳容易受柳九星叶甲、柳毒蛾、杨扇舟蛾、光肩天牛、星 天牛等病虫害，常用的防治方法是人工防治和化学药剂防治，浪费大量的人力和物力，并且造成了环境污染． 利用生物工程技术培养抗虫垂柳是很必要的．由于垂柳枝条繁殖极易成活，垂柳组织培养方面的研究很 少，而利用生物技术研究抗虫垂柳的前提是垂柳的组织培养和植物再生体系的建立．目前垂柳离体器官愈 伤组织的诱导和植株再生的研究还未见报道，因此对此方面的研究将有重要的理论意义和实际应用价值． １材料和方法 １．１供试材料 ２００６年７月从郑州师范高等专科学校校园内垂柳植株上选取当年生半木质化的枝条，切割成带１～２个 侧芽的茎段作为外植体． １．２材料处理 将采回的嫩枝带叶剪成段长２０ ｃｍ左右，放于自来水管下冲洗２～３ ｈ，去除表面污垢，然后在超净台上将 枝条剪成２～３ ｍ小段，去掉花序，在超静工作台上，用无菌水漂洗２～３次，７０％酒精浸泡４５ ｓ，用无菌水漂 洗２～３次；将叶取下用１０％的次氯酸钠灭菌 １５ ｒａｉｎ，将枝条用０．１％升汞灭菌８ ｍｉｎ，无菌 表１培养基的类型 Ｔａｂ．１ Ｔｈｅ ｔｙｐｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｄｉｕｍ 水分别冲洗３次，将叶片切割成０．５ ｃｍｘｌ ｃｍ 的小块，枝条截成１ ｃｍ的小段备用． １、ＭＳ＋６－ＢＡ １１０ ｍｇ，Ｌ＋ＮＡＡ Ｏ．２ ｍｇ／Ｌ ２、ＭＳ＋６－ＢＡ １．０ ｍｇ，Ｌ＋ＮＡＡ Ｏ．２ ｍｇ，Ｌ＋ＫＴ Ｏ．５ ｍｇ，Ｌ １．３实验方法 愈伤组织诱导 ３、Ｍｓ＋６．ＢＡ ２．０ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ ｍｇ／Ｌ １．３．１不同６－ＢＡ的质量浓度对愈伤组织诱 培养基４、ＭＳ＋６－ＢＡ ２．０ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ Ｏ．５ ｍｇ／Ｌ ５、ＭＳ＋６－ＢＡ ２．５ ｍｇ，Ｌ＋ＮＡＡ Ｏ．２ ｍｇ，Ｌ 导的影响 ６、ＭＳ＋６－ＢＡ ２．５ ｍｇ，Ｌ＋ＮＡＡ Ｏ，２ ｍｇ，Ｌ＋ＫＴ Ｏ．５ ｍｇ，Ｌ 将叶片和茎段分别接种在１，２，３，４，５，６ ７、ＭＳ＋６．ＢＡ １．０ ｎｌｇ，Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ ｎｌｇ，Ｌ 号培养基上进行愈伤组织的诱导（表１）． 胚状体分化培养基 ： １２．，ｏ０ ｍｇ／，Ｌ＋ＮＡＡＡｏ０．１２ ｍｇｇ／，ＬＬ＋ＫＴ０’５ ｍｇ儿 １．３．２ 不同激素配比对胚状体诱导和分化的 １０、ＭＳ＋６一ＢＡ ２．０ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ ０．５ ｍｇ／Ｌ 影响 植株再生培养基 ＭＳ＋６－ＢＡ １．０ｎａｇ／Ｌ＋Ａｃ０‘ 将愈伤组织切割接种于７，８，９，１０号培 ｓ＋６－ＢＡ１．０Ⅱ１ｇ，Ｌ＋ＮＡＡ收稿日期：２００７—１０—１１ 基金项目：郑州市重点科技攻关项目（０５１ｓＧＤｓ１７０１７） 作者简介：袁秀云（１９７０一），女，河南许昌人，副教授，主要从事植物学教学和植物生物技术研究工作． 维普资讯 http://www.cqvip.com ２００８年１月 袁秀云等：垂柳的组织培养及植株再生体系研究 一４３一 养基上进行胚状体诱导和分化（表１）． １．３．３植株再生 将芽分株接种于１１号和ｌ２号培养基上进行培养，用于苗和根的植株再生培养． １．３．４培养条件 所有培养基均加入蔗糖３％，琼脂７．５％．ｐＨ值５．８—６．０，培养温度（２５±２）ｏＣ，光照度２ ０００ Ｌｘ，每天 光照１２ ｈ． ２结果与分析 ２．１不同６一ＢＡ的质量浓度对愈伤组织诱导的影响 将叶片和茎段分别接种在１，２，３，４，５，６号６种培养基上进行愈伤组织的诱导，３０ ｄ后观察并记录数据 （见表２）．对于不同离体器官诱导培养而言，叶在诱导培养过程中，首先是膨大褶皱，接着从叶片边缘出现 黄白色的愈伤组织，组织疏松干燥，增生较慢，３０ ｄ时褐化死亡，随着６一ＢＡ的质量浓度的增加，叶片不产生 愈伤组织，由开始的绿色逐渐褐化干燥死亡，可见几种培养基均不适合垂柳叶片的愈伤组织诱导．在茎段 的诱导培养过程中，１０ ｄ时首先是茎段两端出现膨大，逐渐向茎端产生愈伤组织，愈伤组织致密，黄绿 色，表面有红褐色；随６一ＢＡ的质量浓度的增加，愈伤组织疏松，颜色变浅为黄白色；ＫＴ在低６－ＢＡ的质量浓 度条件下，对愈伤组织的产生没有不良的影响，但当６－ＢＡ的质量浓度增加时，ＫＴ使愈伤组织疏松，颜色发 白．说明１．０ ｍｇ／Ｌ和２．０ ｍｇ／Ｌ的６－ＢＡ的质量浓度均适合诱导垂柳茎段愈伤组织． 表２不同６－ＢＡ的质量浓度对垂柳器官愈伤组织的诱导 Ｔａｂ．２ Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｏｒｇａｉｎｓ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ６－ＢＡ ｉｎ Ｓｄｉｘ ｂａｂｙｌｏｎｉｃａ ２．２不同激素配比对胚状体诱导和芽分化的影响 将茎段产生的愈伤组织切割后分别接种在７，８，９， 表３不同培养基对垂柳愈伤组织胚状体诱导的影响 １Ｏ号培养基上进行继代培养及胚状体诱导，培养３０ ｄ时 Ｔａｂ－３ Ｅ脆ｃｔ ０ｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｅｄｉａ Ｏｉｌ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｍｂｒｙｏｉｄ ｉｎ Ｓｄｉｘ ｂｏｂｙｌｏｎｉｃａ 的结果发现，在各种培养基上，愈伤组织均出现胚状体， 胚状体的诱导率分别为４．５％，５．３％，３．４％，３．８％（表３）， ７号和８号培养基上的胚状体稍多，且４０ ｄ时８号培养基 上的胚状体已经长出丛生芽．可见ＭＳ＋６一ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ＋ ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ ０．５ ｍｇ／Ｌ的激素配比最为适合垂柳愈 伤组织的胚状体诱导和芽的分化，ＫＴ对胚状体诱导和芽 分化有促进作用． 表４不同培养基对垂柳再生植株的影响 ２．３不同培养基对植株再生的影响 Ｔａｂ．４ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｅｄｉａ ｏｎ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ ｐｌａｎｔｓ ｉｎ Ｓｏｌｉｘ ｂａｂｙｌｏｎｉｃａ 将丛生芽分株接种于１ １号和１２号培养基上进行培 养，２０ ｄ时发现在１１号培养基上的芽生根，苗高２ ＣＢ，根 长约７ ＣＢ，４０ ｄ时苗高５ ＣＢ，根数量增多，根长约１５ ＣＢ． 在１２号培养基上，芽无生根现象，且芽没有长高，生长处 维普资讯 http://www.cqvip.com 一４４一 河南科学 第２６卷第１期 于停滞状态，芽基部褐化・可见活性炭有利于垂柳的植株再生，而ＮＡＡ不利于垂柳生根和芽的生长・ ３结论 垂柳的离体器官组织培养及植株再生体系研究表明，叶片开始产生的愈伤组织疏松干燥，黄白色，最后 逐渐褐化死亡，不适合诱导愈伤组织；茎段经过诱导培养产生的愈伤组织致密湿润，黄绿色，表面有红褐色， 适合诱导愈伤组织；１．０ ｍｇ／Ｌ和２．０ ｍｇ／Ｌ的６－ＢＡ的质量浓度均能诱导垂柳茎段愈伤组织，但６－ＢＡ的质 量浓度过大，产生的愈伤组织疏松，颜色发白，不适于进行胚状体诱导和芽的分化；ＫＴ能促进愈伤组织的产 生，但与６－ＢＡ的浓度作用综合起来，使产生的愈伤组织疏松发白，不能用于胚状体的诱导，最终会褐化死 亡；６－ＢＡ的浓度和ＮＡＡ的不同配比均能诱导垂柳茎段愈伤组织胚状体的分化，最适培养基为ＭＳ＋６一ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ ０．５ ｍｇ／Ｌ，说明ｋＴ能促进垂柳芽的分化．我们知道在培养基中，生长素与细 胞素的比例决定着发育的方向、诱导愈伤组织长根还是长芽．当组织内细胞素／生长素的比值高 时，诱导愈伤组织或器官分化出不定芽；促进细胞与扩大、抑制根的分化．在垂柳植株再生体系研究 中，ＭＳ＋６一ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ＋Ａｃ ０．３％培养基不但能促使垂柳根的形成，而且能促使芽生长，进而形成幼苗．一 般情况下，培养基中加入活性炭可以减少愈伤组织的褐化［２１，此实验结果说明活性炭有利于根的生成，而幼 苗形成的关键就在于根的生成：ＮＡＡ不利于根的生成和芽的生长，不能形成幼苗． 参考文献： Ｅｌ３潘文明．观赏树木学［Ｍ］．北京：中国农业出版社，２００１：１４７—１４８． ［２］郑文静，赵海岩，杨国立．植物组织培养操作过程中的常见问题及其解决办法［Ｊ］．辽宁农业科技，２００１（２）：４９—５１． Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓａ／／ｘ ｂａｂｙｌｏｎｉｃａ ＹＵＡＮ Ｘｉｕ．ｙｕｎ ， ＧＵＯ Ｌｉ．ｙｏｎｇ２， ＭＡ Ｊｉｅ ， ＺＨＡＮＧ Ｘｉａｎ．ｙｕｎ （１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ Ｔｅａｃｈｅｒ’Ｓ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｎ ４５００４４，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｅｃｏｎｏｍｉｃ Ｆｏｒｅｓｔ ａｎｄ Ｔｒｅｅ Ｓｅｅｄｉｎｇ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏ Ｈｅｎａｎ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５０００８，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｒ：Ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓａｌｉｘ ｂａｂｙｌｏｎｉｃａ ｗａｓ ｒｅｓｅａｒｃｈｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｉｓ ｏｐｔｉｍｕｍ ｔｏ ｉｎｄｕｃｅ ｃａｌｌｕｓ；Ｔｈｅ ６－ＢＡ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ １．０ ｍｇ／Ｌ ａｎｄ ２．０ ｍｇ／Ｌ ｃａｎ ｉｍｐｒｏｖｅ ｃａｌｌｕｓ ｏｆ Ｓａｌｉ￣ｂａｂｙｌｏｎｉｃａ；ＭＳ＋６一ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ ０．５ ｍｇ／Ｌ ｉｓ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｅｍｂｒｙｏｉｄ ａｎｄ ｂｕｄ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ；ＭＳ＋６－ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ＋Ａｃ ０．３％ｃａｎ ｎｏｔ ｏｎｌｙ ｇｒｏｗ ｒｏｏｔ，ｂｕｔ ａｌｓｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｂｕｄ，ａｎｄ ｉｎ ｆｉｎａｌ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｐｌａｎｔ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｓａｌｉｘ ｂａｂｙｌｏｎｉｃａ；ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ；ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
