麦冬多糖Md_1_Md_2化学结构的研究

・中药及天然药物・

麦冬多糖Md-1、Md-2化学结构的研究

折改梅,石阶平(中国农业大学食品学院,北京100094)

摘要:目的　研究中药麦冬中的多糖化学结构。方法　采用柱层析法进行纯化,并用红外光谱和核磁等方法阐明Md21、结果　Md22的化学结构。Md21、Md22的相对分子质量分别为270和48651。Md21、Md22多糖的糖单元基本组成是葡萄糖。其中Md21多糖中平均每8个葡萄糖单元中连有1个硫酸基,Md22多糖中平均每6个葡萄糖单元中连有1个硫酸基。构型均为Α型,单糖的连接方式为1→4连接。结论　Md21、Md22多糖的化学结构均为有一甲醚基取代的Α2D-(1→4)的葡聚糖,两种多糖的相对分子质量和硫酸基的含量不同。关键词:麦冬;多糖;化学结构

中图分类号:R28411　　　文献标识码:A　　　文章编号:100422407(2003)0220058203StudyonstructuralfeaturesoftwoneutralpolysaccharidesMd-1、Md-2fromOphiopogonjaponicus

SHEGai2Mei,SHIJie2Ping(CollegeofFoodScience,ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100094,China)

Abstract:ObjectiveTostudythechemicalfeatureofMd21、Md22,polysaccharideswhichextractedfrom

Ophiopogonjaponicus.MethodsTwoconstituentswereisolatedandpurifiedbygel2filtrationchromatogra2

phy,andphysicochemicalconstants,andspectralanalysisfurtherstudiedtheirstructuralfeatures.ResultsThemeanmolecularweightswereestimatedtobe270and48651.StructureswerecomposedofD2glu-cose.ConclusionMd21andMd22polysaccharidesareglucans,whichwerecomposedofD2glucoseunits

2(1→4)glucosidiclinkages.joinedbyΑ

Keywords:Ophiopogonjaponicus;polysaccharide;chemicalstructure

　　麦冬属于沿阶草属的植物,其味甘微苦,性微寒,

有养阴润肺益胃生津的作用。麦冬多糖对糖尿病大鼠高血糖有降低作用〔1〕。麦冬的化学成分已有报道,但其中只有1种多糖的结构。我们以麦冬为起始物经水提并经柱层析得到多个多糖组分。本文对其中两个多糖的分离纯化与化学结构进行了研究。1　仪器和材料

111　仪器　BSZ2100自动部分收集器(上海沪西生化仪器厂);UVZ21000紫外可见分光光度仪(美国热电公司);HL22恒流泵(上海沪西生化仪器厂)。112　材料　麦冬2000年购于北京药材总公司,鉴定为麦冬OphiopogonjaponicusKer2Gawl.。Dextran、SephadexG-100(Pharmacia公司),单糖标准品(Sigma公司)。2　实验方法

211　多糖提取　麦冬生药经粉碎后用乙醇作溶剂渗漉除脂。残渣中加3倍量的水在60℃水浴中放置24

〔2〕

用Sevage除去h后,用苯酚2硫酸法检测无糖反应。

蛋白,活性炭脱色〔3〕。加3倍体积的乙醇离心、沉淀,并依次用丙酮、乙醚洗涤得灰白色麦冬粗多糖。

212　分离纯化　取粗多糖(4g)溶于少量的水,用

SephadexG2100进行凝胶柱层(16mm×600mm),

用011mol・L-1氯化钠溶液洗脱,得灰白色的Md21多糖014g和白色的Md22多糖0183g两种多糖。213　纯度鉴定　①紫外分光光度法:由UVZ21000扫描(190～1100nm)进行紫外光谱测定〔4〕。②凝胶柱层析:用SephadexG2100(16mm×600mm)柱层析,011mol・L-1NaCl溶液洗脱,苯酚2硫酸法检测。③冻融分析:在-35℃低温冰箱中结冰,24h取出,迅速解冻,然后在12000r・min-1离心10min,没有沉淀现象〔5〕。

214　相对分子质量的测定　采用SephadexG2100柱层析法,取标准相对分子质量系列的Dextran,测其洗脱体积。用Bluedextran测外水体积Vo。将Ve󰃗Vo与相对分子质量对数作图的标准曲线。多糖按同样条件上柱求得相对分子质量〔6〕。215　根据文献〔7,8〕测定Md21、Md22多糖的糖含量,使用苯酚2硫酸法以葡萄糖为标准,硫酸基含量用紫外可见分光光度法进行测定。

216　多糖的酶解　多糖溶液中加入纤维素酶、果胶

西北药学杂志　2003年4月　第18卷　第2期59

-1

Md21多糖的主要的特征吸收峰有:3385cm,

酶和淀粉酶于38℃水解115h,用纸层析检验,(具体方法同单糖的组成)。

217　单糖组成的测定　多糖各20mg加入2

-1

mol・mL硫酸于100℃密封水解8h,水解液用碳酸钡中和,过滤。纸层析的展开液是正丁醇2吡啶2水(65∶40∶30),显色剂为苯胺2邻苯二甲酸,用下行法展开。显色后于80℃加热10min。

218　高碘酸氧化及Smith降解　分别取010180和010192g的Md21、Md22多糖进行氧化,用UV监测反应。反应完全后,用0101003mol・L-1氢氧化钠溶液滴定,分别用去氢氧化钠溶液012mL和011mL〔8〕。

〔8〕

Smith降解是将处理过的溶液浓缩,浓缩残留物用2mol・mL-1硫酸在80℃水解10h。水解液用碳酸钡中和,过滤。展开液是正丁醇2乙醇2水(4∶1∶5),显色剂为溴甲酚紫〔9〕。219　多糖的红外光谱分析　样品KBr压片。2110　多糖的核磁共振分析　D2O为溶剂。3　结果与讨论

311　Md21、Md22多糖纯度鉴定　紫外光谱图中无280nm和260nm的吸收峰,表明无蛋白质和核酸;Md21、Md22多糖经SephadexG2100凝胶柱洗脱后,

2900cm-1,1635cm-1,1030cm-1及1270cm-1。其

中3600～3200cm-1和1665～1635cm-1的两组

峰,表明为糖类化合物。950～1250cm-1之间有强吸收峰,而缺乏937cm-1,877cm-1和818cm-1呋喃环的特征吸收峰,表明Md21多糖的组成单糖为吡喃单体。Md21多糖在845cm-1有吸收,表明有Α2糖苷键存在。1245cm-1,1110cm-1有吸收峰说明有硫酸基。

-1

Md22多糖的主要特征吸收峰有:3400cm,

2900cm-1,1650cm-1,1050cm-1及1270cm-1。其

中3600～3200cm-1和1665～1635cm-1的两组峰,表明为糖类化合物。950～1250cm-1之间有强吸收峰,而缺乏937cm-1,877cm-1和818cm-1呋喃环的特征吸收峰,表明Md22多糖的组成单糖为吡喃单体。Md22多糖840cm-1有吸收,表明有Α2糖苷键存在。1240cm-1,1095cm-1有吸收峰说明有硫酸基。318　Md21、Md22多糖的核磁谱图有7个碳信号,其

中97ppm为C1的信号,如果C1信号在103ppm～90ppm则为Α2型,表明其构型为Α,其与红外的结果是一致的。4819ppm为葡萄糖单元上甲醚基C原子。而6915ppm表明4位碳完全糖苷化。319　Md21、Md22多糖的硫酸基比例　Md21多糖根据相对分子质量和硫酸基的含量可以计算出每8个葡萄糖单元中有1个硫酸基,Md22多糖根据相对分子质量和硫酸基含量可以计算出每6个葡萄糖单元中有1个硫酸基,具体的连接方式还有待研究。

综合以上分析结果,说明麦冬中存在几种多糖成分,其中有两个成分的化学结构为一甲醚基取代的2ΑD2(1→4)2葡聚糖,其基本结构相似,但是两糖的相对分子质量和硫酸基的含量不同。参考文献:

〔1〕　蕊1几种植物多糖对非胰岛素型糖尿病大鼠作用

的观察[A]1营养与保健食品研究及进展论文集[C]1无锡:江南大学出版社,2001.

〔2〕　张惟杰1糖复合物生化研究技术[M]1上海:上海科学

技术出版社,1997.11.

〔3〕　盛家荣,曾令辉,濯春,等1多糖的提取、分离及结构分

析[J]1广西师范学院学报(自然科学版),1999,16(4):

49255.

得到洗脱曲线,洗脱峰均匀而对称;经冻融分析无沉

淀产生。由上可以证明Md21、Md22多糖是较为均一的多糖。312　Md21、Md22多糖相对分子质量测定　根据标准曲线测Md21、Md22多糖的相对分子质量为270和48651。

313　Md21多糖含糖量(以葡萄糖计)为9417%,硫酸基含量为617%。Md22多糖含糖量(以葡萄糖计)为9613%,硫酸基含量为1818%。麦冬多糖的硫酸基含量较高,提示该多糖可能有抗病毒活性。314　多糖酶解分析表明淀粉酶、果胶酶均可水解多糖,而纤维素酶无此作用,从而说明Md21、Md22多糖均可能存在Α2糖苷键而不存在Β2糖苷键。315　多糖的单糖组成　Md21、Md22多糖经完全水解,只检测到一个斑点,Rf值与葡萄糖一致,说明它们均由单一葡萄糖组成。316　Md21、Md22多糖被高碘酸钠完全氧化需要72h和80h,根据1mol高碘酸钠消耗019234mol和11004mol糖基并生成甲酸0102mol和0101mol可以判断Md21、Md22以1→4位键合。Smith降解产物用纸层析,结果主要是赤藓醇。赤藓醇为124葡萄糖基的降解产物。317　Md21、Md22多糖的红外光谱在4000-400cm

-1

〔4〕　栗克喜,李志孝,孟延发1鬼臼多糖的分离纯化及抗肿

瘤活性[J].天然产物研究与开发,2001,13(3):23225.〔5〕　沈萍萍,付庭治,曹幼琴1红栓菌多糖的分离纯化与分

析[J]1生物化学杂志,1996,12(6):7402743.

〔6〕　HagelL.Comparisonofsomesoftgelsforthemolecu2

区间内扫描。

60

larweightdistributionanalysisofdextranatenhanceflow2rates[J].JCHromatogr,1978,160:59271.

西北药学杂志　2003年4月　第18卷　第2期技术出版社,1997.11～136.

〔9〕　邓成华,杨祥良,顾小曼,等1虎奶菌多糖的分离纯化及

成分分析[J]1中国药学杂志,2000,35(5):2962298.

(收稿日期:2002211227)

〔7〕　朱立文,郁瑞昌1黄芪多糖含量测定方法的探讨与比较

[J]1中成药研究,1987,11(6):32235.

〔8〕　张惟杰1糖复合物生化研究技术[M]1上海:上海科学

益脑心颗粒质量标准研究

徐长根1,来明玉2,郝武常1(11陕西省药品检验所,陕西西安710061;21陕西汉王药业有限公司,陕西汉中723000)摘要:目的　提高益脑心颗粒质量标准。方法　用薄层色谱法鉴别丹参、制首乌,用高效液相色谱法测定原儿茶醛的含量。结果　在TLC色谱中检出丹参、制首乌,原儿茶醛在0111～0170Λg范围内呈良好线性关系,r=019991,平均回收率97132%,RSD为1158%。结论　建立的方法简便可行,重现性好,提高了益脑心颗粒质

量控制方法。

关键词:益脑心颗粒;质量标准;高效液相色谱法;原儿茶醛中图分类号:R917　　　文献标识码:A　　　文章编号:100422407(2003)0220060203　　益脑心颗粒是陕西汉王药业有限公司汇集汉中地区名老中医40多年的经验方开发而成的中成药,全方6味中药,选药精良,组方合理,具有养血平肝,行气散瘀的功效,主用于血虚生风所致眩晕头痛,心悸失眠,胸闷气短等症。为了有效地控制其质量,对方中主要药物丹参、制首乌进行薄层色谱鉴别,同时用高效液相色谱法对丹参进行了定量测定,可有效控制制剂质量。1　仪器与试药

111　仪器　LC210AT输液泵,SPD210A紫外检测器(日本岛津);UV22100型紫外分光光度计(日本岛

黏合剂的硅胶G薄层板上,以氯仿2丙酮2甲酸(8∶1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以三氯化铁试液。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性对照液无干扰。

21112　制首乌的鉴别　取本品10g或416g(无糖型),研细,加氯仿20mL,超声30min,滤过,滤液蒸

干,残渣加氯仿1mL使溶解,作为供试品溶液。同法制成制首乌阴性对照品溶液。另取大黄素对照品,加氯仿制成1mL含015mg的溶液作为对照品溶液。

(中国药典》照薄层色谱法《2000年版一部附录VIB)试验,吸取供试品溶液10ΛL,对照品溶液5ΛL,阴性

对照品溶液10ΛL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以石油醚(30～60℃)2甲酸乙酯2甲酸(15∶5∶1)的上层液为展开剂,展开,取出,晾干,用氨气熏至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性对照液无干扰。212　原儿茶醛的含量测定

21211　色谱条件〔2,3〕　用十八烷基硅烷键合硅胶为

津)。

112　试药　甲醇为色谱纯,其余试剂均为分析纯。原

儿茶醛对照品购自中国药品生物制品检定所,批号为81029402。样品由陕西汉王药业股份有限公司提供。2　方法与结果211　薄层色谱鉴别

21111　丹参的鉴别〔1〕　称取本品5g或213g(无糖

型),加水50mL,煮沸10min,放冷,离心,精密量取上清液25mL,用稀盐酸调pH值至2,用水饱和的醋酸乙酯提取3次,每次20mL,合并醋酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1mL溶解,作为供试品溶液。同法制成丹参阴性对照品溶液。另取原儿茶醛对照品,加甲醇制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。照

(中国药典》薄层色谱法《2000年版一部附录VIB)试验,吸取供试品溶液15ΛL,对照品溶液5ΛL,阴性对

照品溶液15ΛL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为

填充剂;甲醇2012mol・L-1醋酸铵(pH212)(12∶

88)为流动相;检测波长为316nm。理论板数按原儿茶醛峰计算应不低于3000。

21212　对照品溶液的制备　精密称取原儿茶醛对照

品适量,加甲醇制成每1mL含0104mg的溶液,摇匀,即得。

21213　供试品溶液的制备　精密称取本品5g,加水50mL,称定重量,煮沸10min,放冷,用水补足失重,