保健食品功效成分及卫生指标检验规范

成效成分与卫生指标检验规X

成效成分与卫生指标检验规X

1 主题内容和适用X围

1.1 本规X规定了保健食品和原料的卫生要求、成效成分和卫生指标的检验项目和方法。

1.2 本规X适用于保健食品的检验受理、项目确实定和方法的选择。

2 根本要求

2.1 凡保健食品，必须符合\"保健食品通用卫生要求\"，该\"要求\"所列的各项目必须按规定执行。附表1所列检测项目是对\"保健食品通用卫生要求\"补充规定。

2.2 保健食品中使用的添加剂必须符合＂GB2760食品添加剂使用卫生标准＂规定的品种。检测机构根据产品配方检测合成色素、防腐剂、甜味剂与抗氧化剂的含量。

2.3 凡使用有机溶剂提取物为原料的产品，其使用的有机溶剂要符合GB2760附录D食品工业用加工助剂推荐要求。

2.4 保健食品应具有与产品配方和申报的保健功能相适应的成效成分或特征成分，申报时须检测配方中主要原料所含的成效成分或特征成分。附表2所列原料为主的产品须检测表中规定的项目。 2.5 保健食品评审专家委员会可根据产品的具体配方、工艺等相关资料，要求申报单位检测指定的项目。

2.6 成效成分、特征成分、营养成分与卫生学指标的检测方法应根据其产品适用的方法学X围选择国家标准、卫生部部颁标准、行业标

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准以与国际上权威分析方法进展测定。

2.7 在没有相应的标准方法之前，其产品中所声称〔具有〕的成效成分或特征成分的检测方法与检测所需的标准品对照品与特殊试剂均由申报单位提供，并说明其产品中成效成分或特征成分分析方法的来源。如属自主开发研究的分析方法，需提供方法学研究的相关资料，同时将方法学研究的资料报卫生部保健食品成效成分检测协作组〔中国疾病预防控制中心营养与食品安全所〕备案，必要时卫生部将组织方法学验证，其费用由申报单位承当。

2.8 检验机构受理保健食品检测时，申报单位应提供该产品的配方、工艺与企业标准等相关资料。

2.9 卫生部对保健食品的成效成分的检测机构进展认定，检测机构的由卫生部门公布。保健食品的成效成分检测工作应在卫生部认定的检测机构进展。违禁成分的检测由卫生部指定的检验机构进展检测。

附表1：以下类型的产品、或以下原料为主的产品指标检测项目表 1 2 3 4

检测项目 水分、灰分

可溶性固形物、ｐＨ 镉

酸价、过氧化值〔降血脂类产品需检测胆固醇〕

5 茶叶 有机氯农药残留〔六六六、滴滴涕〕 6 红曲 黄曲霉毒素Ｂ1、桔青霉素 7 中药材 汞、六六六、滴滴涕 8 苹果、山楂 展青霉毒素 9 片剂和胶囊 崩解时限 10 抗疲劳、减肥和 违禁药物

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产品类型 固体 口服液 海产品 鱼油类

改善生长发育的产品

附表2：成效成分和特征成分检测项目表 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 营养素补充剂

产品中标识的营养素(包括维生素和矿物质)

五加科参类 皂甙 蕈类〔灵芝、蘑膳食纤维 菇等〕

冬虫夏草菌丝腺苷 体

红景天类 红景天甙 芦荟类 芦荟甙 大蒜类 大蒜素 螺旋藻类 蛋白质、胡萝卜素、维生素B1、维生

素B2

茶叶类 茶多酚 魔芋类 膳食纤维 纤维素类 膳食纤维 磷脂类 丙酮不溶物、乙醚不溶物〔原料〕 红曲类 洛伐它丁 植物油类 脂肪酸、维生素E 动物油类 脂肪酸 初乳类 免疫球蛋白 鹿血类 蛋白质、氨基酸 蚂蚁类 锰、蛋白质 蚯蚓类 蚓激酶〔溶纤酶〕、蛋白质 蛇、蝎等 蛋白质、氨基酸 角鲨烯 角鲨烯 蜂皇浆 10-羟基癸烯酸 蜂花粉、蜂胶 总黄酮 甲壳质产品 脱乙酰度，产品如为复方应检测原料

的脱乙酰度

蛋白质、氨基酸蛋白质、氨基酸 制品

褪黑素产品 褪黑素 产品原料〔褪黑素〕需提供DOC

原料纯度证明并检测 3 保健食品中成效成分的检验方法

见附件1

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附件1

录DOC

目

1. 保健食品中红景天甙的测定 2. 保健食品中大蒜素的测定 3. 保健食品中芦荟甙的测定

4. 保健食品中脱氢表雄甾酮〔DHEA〕的测定 5. 保健食品中吡啶甲酸铬的测定

6. 保健食品中盐酸硫胺、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的测定 7. 保健食品中肌醇的测定 8. 保健食品中肉碱的测定

9. 保健食品中α—亚麻酸、γ—亚麻酸的测定 10. 保健食品中免疫球蛋白IgG的测定 11. 保健食品中水溶性粗多糖的测定

12. 保健食品中人参皂甙的高效液相色谱测定 13. 保健食品中原花青素的测定 14. 保健食品中核苷酸的测定 15. 保健食品中洛伐他丁的测定 16. 保健食品中中药成效成分的鉴别方法

17. 保健食品中银杏叶总黄酮的高效液相色谱测定

18. 保健食品中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定 19. 保健食品中金雀异黄素的测定

20. 保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定

21. 五味子类保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的高效液相色谱测定

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22. 保健食品中腺苷的测定 23. 保健食品中褪黑素的测定

附：保健食品成效成分检验方法协作组提供的检验方法 1. 保健食品中人参总皂甙的测定 2. 保健食品中总黄酮的测定

3. 壳聚糖的游离氨基测定与脱乙酰度的计算 4. 蚓激酶活性的测定

5. 乙醚不溶物、丙酮不溶物的测定 6. 角鲨烯的测定

1.保健食品中红景天甙的测定

Determination of salidroside in health food

第一法 高效液相色谱法

1 X围

本方法规定了保健食品中红景天甙的测定方法。

本方法适用于以红景天为主要原料的保健食品中红景天甙的测定。 本方法的检出限：0.02μg。

本方法的线性X围：0.01～0.50μg/mL。 2 原理

将混匀的试样使用甲醇进展提取，根据高效液相色谱紫外检测器定性定量检测。

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3 试剂

除非另有说明，在分析中仅使用双蒸水。 3.1 乙酸钠 分析纯。 3.2 甲醇 优级纯。 3.3 石油醚 分析纯。

3.4 红景天甙标准溶液准确称量红景天甙标准品0.0200g，参加甲醇溶解并定容至10mL。此溶液每mL含2.0mg红景天甙。

4仪器

4.1 高效液相色谱仪：附紫外检测器〔UV〕。 4.2 超声波清洗器。 4.3 离心机。

5分析步骤 5.1 试样处理

5.1.1 液体试样：准确量取摇匀后的液体试样20mL于50mL容量瓶中，先参加25mL甲醇，超声10min后用甲醇定容至刻度，混匀，经0.45m滤膜过滤后供液相色谱分析用。

5.1.2 固体试样：取20粒以上片剂或胶囊试样进展粉碎混匀，准确称取适量试样〔准确至0.001g〕于50mL容量瓶中，参加甲醇, 超声提取10min。取出后参加甲醇定容至刻度，混匀后以3000rpm/min离心3min。经0.45m滤膜过滤后供液相色谱分析用。

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5.2 液相色谱参考条件

5.2.1 色谱柱: C18柱 4.6×250mm,5μm。 5.2.2 柱温：室温。

5.2.3 紫外检测器：检测波长215nm。

5.2.4 流动相：甲醇:0.02mol/L乙酸钠溶液＝9:91。 5.2.5 流速：1.0mL/min。 5.2.6 进样量：10L。

5.2.7色谱分析：取10μL标准溶液与试样溶液注入色谱仪中，以保存时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比拟定量。

5.3 标准曲线制备 分别配制浓度为0.0、0.01、0.02、0.05、0.20、0.50μg/mL红景天甙标准溶液,在给定的仪器条件下进展液相色谱分析,以峰高或峰面积对浓度作标准曲线。 5.4 分析结果的表示 5.4.1 计算 h1× C ×V

X =——————————— h2×m×1000

式中： X － 试样中红景天甙的含量，mg/g； h1－ 试样峰高或峰面积； C － 标准溶液浓度，μg/mL； V － 试样定容体积，mL； h2－ 标准溶液峰高或峰面积；

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m － 试样质量，g。 计算结果保存三位有效数字。 6 技术参数

准确度 方法的回收率在91.7％～98.6％之间。

允许差 在重复性条件下获得的2次测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的±10%。

第二法 极谱法

1 X围

本方法规定了保健食品中红景天甙的测定方法。

本方法适用于以红景天甙为主要成效成分的保健食品中红景天甙的含量测定。

本方法的最低检出量为0.05μg。假设取1.00mL液体类试样，其最低检出浓度为0.05mg/L；假设取0.25g固体类试样、那么最低检出浓度为0.2mg/kg。

本方法的最正确线性X围为0.1μg/mL～1.0μg/mL。 2 原理

保健食品中红景天甙用甲醇提取，D—101型大孔吸附树脂净化处理，经亚硝基化后，其衍生物在硼砂溶液中具有电活性，在滴汞电极上复原产生极谱波。用峰电位定性，以试样与标准的峰电流〔I\"p〕比拟定量。 3 试剂

除注明外，试剂为分析纯，实验用水为重蒸馏水。 3.1 甲醇。

3.2 D—101型大孔吸附树脂。 3.3 饱和硼砂溶液。 3.4 0.2%盐酸溶液。

3.5 2mol/L亚钠溶液。

3.6 1.0mg/mL红景天甙标准贮备溶液：准确称取0.1000g红景天甙对照品〔中国药品生物制品检定所〕于烧杯中，加水溶解并定容至100mL容量瓶。此溶液每

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毫升含红景天甙1.0mg，冰箱保存。

3.7 10.0μg/mL红景天甙标准使用溶液：准确吸取红景天标准贮备溶液1.00mL于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度。此溶液每毫升含红景天甙10.0μg。 4 仪器与设备

4.1 极谱分析仪。 4.2 超声波清洗机。

4.3 Φ10mm×150mm玻璃层析柱。 5 分析步骤

5.1 试样的制备与予处理

5.1.1 液体类试样〔如保健酒、口服液、饮料等〕

准确吸取摇匀的试样液1.00mL于50mL容量瓶中，加水稀释至刻度、摇匀，供测定用。

5.1.2 一般固体类试样〔如保健茶、蜜片、胶囊等〕

准确称取经粉碎并过20目筛的试样0.25g，置50mL三角瓶中，参加10mL甲醇，于超声波清洗机超声提取10min、过滤，滤液收集于50mL容量瓶中。再参加10mL甲醇于三角瓶中，重复超声提取一次，合并滤液于上述容量瓶中，用水稀释至刻度，供测定用。 5.1.3 个别组分复杂的固体类试样

个别组分复杂的固体类试样需经柱层析净化处理。

层析柱制备。取适量D—101型非极性大孔吸附树脂于烧杯中，加水洗涤数次，缓缓倾入Φ10mm ×150mm玻璃层析柱内，湿法装柱、树脂约高50mm，10mL甲醇注入层析柱上端进展淋洗，弃淋洗液。

净化。按5.1.2节处理、提取试样，准确吸取10.0mL提取试液，缓缓注入层析柱上端，用玻璃蒸发皿收集流出液。再吸取10mL甲醇分两次注入层析柱进展淋洗、合并流出液于蒸发皿中，置70℃恒温水浴挥干，用水溶解移入10mL容量瓶中，水稀释至刻度，供测定用。 5.2 极谱分析参考条件

单扫描极谱法〔SSP法〕。选择起始电位为— 400mV，终止电位— 900mV，扫描速度250mV/S，三电极，二次导数，静置时间5s与适当量程。于峰电位〔Ep〕

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— 600mV〔vs.SCE〕处，记录红景天甙的峰电流〔I\"p〕nA。 5.3 标准曲线的绘制

准确吸取10.0μg/mL红景天甙标准使用溶液0，0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00mL于7支10mL比色管中〔相当于含0，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0μg红景天甙〕。各管参加2.0mL 2mol/L亚钠溶液与1.0mL 0.2%盐酸溶液置沸水浴10min，取出冷却至室温后各管再参加1.0mL饱和硼砂溶液，加水稀释至刻度，摇匀。

将各管溶液依次移入电解池，置三电极系统。按上述极谱分析参考条件〔5.2〕下测定，记录各管红景天甙的峰电流〔I\"p〕。以红景天甙含量为横座标，其对应的峰电流为纵座标，绘制标准曲线。 5.4 试样测定 5.4.1 标准曲线法

准确吸取上述待测液0.1mL～0.5mL于10mL比色管中，〔视其含量高、低而定〕参加2mL 2.0mol/L亚钠溶液，以下操作同5.3节标准曲线绘制项下测定试液中红景天甙的峰电流〔I\"p〕。 5.4.2 标准参加法

分别吸取上述待测液0.1～0.5mL于2支10mL比色管中〔视其含量高、低而定〕。其中一管参加所吸取待测液中红景天甙含量大致相当的红景天甙标准使用溶液〔可先予测一次〕，各管再参加2mLL2.0mol/L亚硝液钠溶液，以下操作步骤同5.3节标准曲线绘制项下。测定两管溶液中红景天甙的峰电流〔Ip\"〕。 6 结果 6.1 计算

6.1.1 标准曲线法

X= m×

A V1

×1000 V

………………………〔1〕

式中：X——试样中红景天甙含量，mg/g〔或mg/mL〕；

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A——从标准曲线上查得的含量，μg； V——试样的定容体积，mL； V1——测定用试样溶液体积，mL； m——试样的质量〔或体积〕，g〔或mL〕。 6.1.2 标准参加法

X= 〔h2－h1〕×ｍ×

B×h1

V1 V

×1000

…………………〔2〕

式中：B——参加红景天甙标准含量，μg；

h1——未加红景天甙标准管中溶液的峰电流，nA； h2——加红景天甙标准管中溶液的峰电流，nA； X，m，V1，V与〔1〕式中表述含义一样。 6.1.3 结果表示：计算结果保存3位有效数字。 6.2 技术参数

准确度：本方法的平均添加回收率为92.5%。 精细度：相对标准偏差〔RSD〕<7.0%

干扰因素：假设试样存黄酮甙，有正干扰，测定时参加１%铝溶液0.5mL，即可消除此干扰。

2. 保健食品中大蒜素的测定

Determination of allitridum in health food

1 X围

本方法规定了保健食品中大蒜素(三硫二丙烯，C6H10S3)的测定方法。

本方法适用于以大蒜〔油〕为主要原料，制成的酒、胶囊、片剂中大蒜素的含量测定。

本方法最低检出浓度为0.0430mg/mL；取100mg试样，提取定容5.0mL时，

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试样中大蒜素最低检出质量浓度为0.20g/100g。 本方法最正确线性X围： 0.320-3.00μg。 2 原理

根据大蒜素为挥发性油成分，经有机溶剂提取，用气相色谱仪分析，采用外标法定量。 3 试剂

3.1 无水乙醇(分析纯)。 3.2 正己烷(分析纯)。

3.3 标准溶液配制 称取0.1000g标准，置于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，该溶液中含大蒜素浓度为10.0mg/mL。此溶液可在冰箱中保存七天。取该溶液1.0mL，置于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，此溶液含大蒜素浓度为1.0mg/mL。 4 仪器

4.1 气相色谱仪，附氢火焰〔FID〕检测器。 4.2 数据处理机，或积分仪。 4.3 分析天平：万分之一。 4.4 超声清洗机。 4.5 离心机，3000r/min。

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5 分析方法 5.1 试样提取

5.1.1固体试样精细称取试样0.100g，加无水乙醇2.5mL ,密塞，超声70min，取出冷却，加正己烷2.5-25.0mL定容〔调节大蒜素含量约为1.0mg/mL左右〕，振摇，静置分层后，取上层液进样。

5.1.2 液体试样精细吸取20.0mL 试样，于分液漏斗中，加5mL 正己烷振摇提取1min，静置〔或离心〕分层后，取上层液进样。 5.2 气相色谱参考条件

5.2.1 色谱柱 玻璃色谱柱长：2米，内装担体：硅藻土〔 Chromosorb W(AW)〕,60-80目；固定相：0.5%己二酸乙二醇酯〔Ethylene Glycol Adipate〕;。 5.2.2 柱箱温度：90℃。 5.2.3 进样口温度：150℃。 5.2.4 鉴定器温度：150℃。 5.2.5 载气：氮气〔55mL/min〕。

5.2.6 氢气：50mL/min ；空气：500mL/min。 5.2.7 鉴定器灵敏度：2；记录仪衰减：3。 5.2.8 进样量1μL。

5.3 定性分析 在参考操作条件下，以对照品与试样比拟保存时间定性。 5.4 定量分析 试样中大蒜素色谱峰面积或峰高与标准的色谱峰面积或峰高比拟定量。

5.5 分析结果表述 试样中大蒜素的含量按式〔5.5.1〕计算。 5.5.1 计算

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W=

A1CV100

A2m1000 式中：W——大蒜素的含量，%；

A1——试样使用液色谱峰面积或峰高； A2——标准使用液峰面积或峰高； C——标准使用液浓度，mg/mL； V——试样定容体积，mL； m——试样的质量，g。

5.5.2 结果表示

计算结果保存三位有效数字。

6 技术参数

6.1 回收率：在不同的试样中不同浓度加标回收率为97.8-116%。 6.2 精细度：同一试样6次测定结果的RSD为2.10%。 6.3 两次测定结果相对误差：≤10% 6.4干扰因素：在超声时,注意密塞。

7 参考色谱图

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图A 标准品气相色谱图 图B 片剂试样气相色谱图 图中 tr=0.588 溶剂, 图中 tr=0.6 溶剂，

tr=3.045大蒜辣素 tr=3.062大蒜辣素tr=10.912大蒜素

tr=11.011大蒜素

3. 保健食品中芦荟甙的测定 Determination of Aloin in health food

1．X围

本方法规定了芦荟胶囊、芦荟片剂、芦荟汁等保健食品中芦荟甙含量的测定方法。

本方法适用于芦荟胶囊、芦荟片剂、芦荟汁等保健食品中芦荟甙含量的测定。 本方法的最低检出量10ng

本方法的最正确线性X围：0~100μg/mL y=1124194x+3215；线性关系r=0.9999

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2．原理

用甲醇+水〔55+45〕作为溶剂，提取试样中的芦荟甙，经高效液相色谱仪C18柱别离，紫外检测器293nm条件下检测，以芦荟甙保存时间定性，峰面积定量。 3．试剂

3．1甲醇 色谱纯； 3．2水 重蒸水；

3．3芦荟甙标准品 纯度≥98%

3．4芦荟甙标准溶液的制备 准确称取芦荟甙标准品10mg，加流动相甲醇+水〔55+45〕溶解并移入100mL容量瓶中，定容至刻度。

4．仪器设备

4．1高效液相色谱仪 附紫外检测器

4．2色谱柱 C18〔以十八烷基键合硅胶填料为填充剂〕或具同等性能的色谱柱，150mm×6mm，5μm； 4．3超声波清洗器；

4．4C18净化富集柱 C18预柱 装量0.5g，分配型； 4．5离心机 3000r/min。

5色谱别离条件

5．1流动相 甲醇+水=55+45 5．2流速 1mL/min； 5．3柱温 40℃； 5．4检测波长 293nm； 5．5灵敏度 0.016AUFS； 5．6进样量 10μL。

6．分析步骤

6．1试样制备 将固体试样粉碎成粉末状，混匀。准确称取上述经处理后的试样1.00g于50mL容量瓶中，加检测用流动相30mL溶解，经超声振提5min加流动相定容50mL，离心沉淀，上清液经滤膜〔0.45μm〕过滤，芦荟汁饮料直接经0.45μm滤膜过滤。

6．2测定步骤 分别精细吸取标准溶液和试样溶液10μL注入高效液相色谱仪，

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依上述色谱条件，以保存时间定性，用外标法计算试样中芦荟甙的含量。

7．计算公式

A1×C×V x= A2×m

式中：X 试样中芦荟甙含量，mg/g〔mg/mL〕； A1 试样中芦荟甙的峰面积； C 标准液的质量浓度，mg/mL； A2 标准液中芦荟甙的峰面积； V 试样定容体积，mL； m 试样的质量，g〔mL〕。

计算结果保存三位有效数字。

8.允许误差

同一试样两次测定值之差不得超过两次测定平均值的10%。

4. 保健食品中脱氢表雄甾酮〔DHEA〕的测定

Determination of dehydroepiandrosterone in heath food

1 X围

本方法规定了保健食品中脱氢表雄甾酮〔DHEA〕含量的测定方法。 本方法适用于添加在片剂、胶囊等试样类型中成效成分脱氢表雄甾酮〔DHEA〕含量的测定。

本方法的最低检出量6.00mg/kg。

本方法的最正确线性X围：0.0400～10.0mg/mL。

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2 原理

将粉碎的胶囊和片剂试样使用流动相进展提取和稀释，根据高压液相色谱紫外检测器定性定量检测。

3 试剂

3.1 甲醇 优级纯。

3.2 脱氢表雄甾酮〔DHEA〕标准溶液准确称量脱氢表雄甾酮〔DHEA〕标准品〔Sigma公司，纯度99%〕0.0100g，参加检测用流动相并定容至10mL。此溶液每mL含1mg脱氢表雄甾酮〔DHEA〕。

4仪器设备

4.1 高效液相色谱仪：附紫外检测器〔UV〕。 4.2 超声波清洗器。 4.3 离心机。

5分析步骤

5.1 试样处理：取20粒以上片剂或胶囊试样进展粉碎混匀，准确称取试样〔准确至0.001g〕于容量瓶中，参加流动相定容至10.0mL, 使浓度大约为每mL中含脱氢表雄甾酮〔DHEA〕1mg。超声提取5min后以3000rpm/min离心3min。准确取2.0mL试样溶液于试管中，参加流动相定容至5.0mL，摇匀。经0.45m滤膜过滤后，备用。

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5.2 液相色谱参考条件

5.2.1 色谱柱: C18柱 4.6×250mm。 5.2.2 柱温：室温。

5.2.3 紫外检测器：检测波长 215nm。 5.2.4 流动相：甲醇：水＝80：20。 5.2.5 流速：0.6mL/min。 5.2.6 进样量：10L。

5.2.7色谱分析：取10μL标准溶液与试样溶液注入色谱仪中，以保存时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比拟定量。 5.2.7色谱图

在上述色谱条件下，脱氢表雄甾酮〔DHEA〕的保存时间为7.40。 5.3 标准曲线制备 分别配制浓度为0.0、0.0400、0.200、1.00、5.00、10.0mg/mL脱氢表雄甾酮〔DHEA〕标准溶液,在给定的仪器条件下进展液相色谱分析,以峰高对浓度作标准曲线。 5.4 分析结果表示 5.4.1计算

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h1× C ×V ×5 X = ───────── h2×m×2

式中： X－试样中脱氢表雄甾酮〔DHEA〕的含量，mg/g； h1－试样峰高或峰面积； C －标准溶液浓度，mg/mL； V－试样定容体积，mL； h2－标准溶液峰高或峰面积；

m－试样质量，g。

5.4.2 结果表示 保存三位有效数字。

6 技术参数

准确度 方法的回收率在91.5%～96.0%之间 允许差 平行样相对误差±5%。

5.保健食品中吡啶甲酸铬的测定

Determination of chromium picolinate in heath food

1 X围

本方法规定了保健食品中吡啶甲酸铬含量的测定方法。

本方法适用于吡啶甲酸铬作为成效成分添加于片剂、胶囊等试样类型中含量的测定。

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本方法的最低检出量10.0mg/kg。

本方法的最正确线性X围：2.00～100μg/mL。 2 原理

将粉碎的胶囊和片剂试样使用甲醇：水=1：1进展提取和稀释，根据高压液相色谱紫外检测器外标法定性定量检测。

3 试剂

3.1 甲醇 优级纯。

3.2 磷酸氢二钾、磷酸二氢钾 分析纯。

3.3 吡啶甲酸铬标准溶液准确称量吡啶甲酸铬标准品0.0100g，参加甲醇:水=1:1并定容至100.0mL, 如有少量残渣,可使用超声波加速溶解。此溶液每mL含100μg吡啶甲酸铬。

4仪器设备

4.1 高效液相色谱仪：附紫外检测器〔UV〕。 4.2 超声波清洗器。 4.3 离心机。

5分析步骤

5.1 试样处理：取20粒片剂或胶囊试样进展粉碎或混匀，准确称取一定量试样于刻度试管中，参加甲醇：水=1：1并定容至20.0mL,超声提取5min后以

DOC

3000rpm/min离心3min。经0.45m滤膜过滤后，备用。 5.2 液相色谱参考条件

5.2.1 色谱柱: C18柱 4.6×250mm。 5.2.2 柱温：室温。

5.2.3 紫外检测器：检测波长 2nm。

5.2.4 流动相：0.125mol/L磷酸盐缓冲溶液：乙腈＝425：75。 5.2.5 流速：0.5mL/min。 5.2.6 进样量：10L。

5.2.7色谱分析：量取10μL标准溶液与试样溶液注入色谱仪中，以保存时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比拟定量。 5.3 色谱图

在上述色谱条件下，吡啶甲酸铬的保存时间为7.023。

DOC

5.4 标准曲线制备 配制浓度为0.0、2.00、5.00、10.0、50.0、100μg/mL吡啶甲酸铬标准溶液,在给定的仪器条件下进展液相色谱分析,以峰高对浓度作标准曲线。 5.5分析结果表示 5.5.1计算 h1× C ×V

X = ───────── h2×m×1000

式中： X－试样中吡啶甲酸铬的含量，mg/g； h1－试样峰高或峰面积； C －标准溶液浓度，μg/mL； V－试样定容体积，mL； h2－标准溶液峰高或峰面积；

m－试样量，g。

5.5.2 结果表示 检测结果保存三位有效数字。

6 技术参数

准确度 方法的回收率在91.5%～98.4%之间 允许差 平行样测定相对误差±5%。

6．保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、

烟酸、烟酰胺和咖啡因的测定

Determination of thiamine hydrochloride,pyridoxine

DOC

hydrochloride,niacin,niacinamide and coffeine content in

health food

1 X围

本方法规定了保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因含量的高压液相色谱测定方法。

本方法适用于盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因作为膳食补充剂添加于片剂、胶囊、口服液、饮料等试样类型中含量的高压液相色谱测定。

本方法的最低检出量为盐酸硫胺素0.4mg/kg、盐酸吡哆醇0.4mg/kg、烟酸2.0mg/kg、烟酰胺1.2mg/kg、咖啡因1.0mg/kg。

本方法的最正确线性X围：盐酸硫胺素0.500～50.0μg/mL

盐酸吡哆醇0.500～50.0μg/mL 烟酸1.00～100μg/mL 烟酰胺1.00～100μg/mL 咖啡因5.00～500μg/mL

2 原理

将粉碎混匀的片剂、胶囊或液体试样使用甲醇：水：磷酸=100：400：0.5进展提取和稀释，根据高压液相色谱紫外检测器外标法定性定量检测。

3 试剂

DOC

3.1 甲醇 优级纯。 3.2 乙腈 色谱纯。 3.3 磷酸 分析纯。

3.4 硫酸月桂酯钠〔Sodium Dodecylsulfate〕 高压液相色谱用离子对试剂。 3.5 1-癸烷磺酸钠〔Sodium 1-Decanesulfonate〕高压液相色谱用离子对试剂。3.6 标准储藏液A准确称量已扣除水分的盐酸硫胺素和盐酸吡哆醇标准品各0.0500g，溶于水中并定容至50mL。

3.7 标准储藏液B准确称量已扣除水分的烟酰胺和烟酸标准品各0.0400g，溶于水中并定容至20mL。

3.8 混合标准使用液 准确称量经80℃枯燥4h的咖啡因0.0500g，准确参加标准储藏液A5mL, 标准储藏液B10mL，再参加甲醇：水：磷酸=100：400：0.5混合溶液

4仪器和设备

4.1 高效液相色谱仪：附紫外检测器〔UV〕。 4.2 超声波清洗器。 4.3 离心机。

5分析步骤 5.1 试样处理

5.1.1 取20粒以上片剂或胶囊试样研磨或混匀，称取一定量试样于试管中〔准确至0.001g〕，参加甲醇：水：磷酸＝100：400：0.5混合溶液,使浓度为每毫升中大约含盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇0.25mg，烟酸、烟酰胺1mg。超声提取5min后以3000rpm/min离心5min，上清液经0.45m滤膜过滤后待进样。

5.1.2 液体试样直接以甲醇：水：磷酸＝100：400：0.5混合溶液稀释，充分

DOC

混匀后经0.45m滤膜过滤后待进样。 5.2 色谱条件

5.2.1 色谱柱: 液体试样TSK C18 4.6×150mm 5.2.3 柱温：室温

5.2.4 检测波长：盐酸硫胺素 260nm

咖啡因、烟酸、烟酰胺、盐酸吡哆醇 280nm

5.2.5 流动相：盐酸硫胺素: 硫酸月桂酯钠溶液〔5→530〕:乙腈:磷酸＝

530:470:1

咖啡因、烟酸、烟酰胺、盐酸吡哆醇: 1-癸烷磺酸钠溶液〔1.22→850〕: 乙

腈:磷酸＝850:150:1

5.2.6 流速：1mL/min 5.2.7 进样量：10L

5.3 保存时间： 1

图1 图2 在该色谱条件下，盐酸硫胺素〔图1－1〕保存时间14.305

咖啡因〔图2－1〕保存时间4.986、烟酸〔图2－2〕保存时间8.728、烟酰胺〔图2－3〕保存时间9.341、盐酸吡哆醇〔图2－4〕保存时间18.512。 5.4分析结果表示 5.4.1计算 h1× C ×V

X = ───────── h2×m×1000

式中： X－试样中单一成分的含量，mg/g〔mL〕； h1－试样峰高或峰面积；

DOC

C －标准溶液浓度，μg/mL； V－试样定容体积，mL； h2－标准溶液峰高或峰面积； m－试样量，g〔mL〕。

5.4.2 结果表示 检测结果保存三位有效数字。

6 技术参数

准确度 方法的回收率在91.2%～102.5%之间 允许差 平行测定相对误差±10%。

7.保健食品中肌醇的测定

Determination of inositol in health food

1 X围

本方法规定了保健食品中肌醇含量的测定方法。

本方法适用于肌醇作为成效成分添加于片剂、胶囊、饮料等试样类型中含量的测定。

本方法的最低检出量为2mg/kg。

本方法的最正确线性X围是0.1～10mg/mL。 2 原理

将固体试样提取液或液体试样稀释液浓缩至干，经硅烷化处理，以正己烷提取，

DOC

气相色谱氢火焰检测器定性定量检测。 3 试剂

3.1 无水乙醇 分析纯。 3.2 正己烷 分析纯。 3.3 无水硫酸钠 分析纯。 3.4 三甲基氯硅烷 分析纯。 3.5 六甲基二硅氨烷 分析纯。 3.6 二甲基甲酰胺 分析纯。

3.7 肌醇标准溶液将肌醇标准品〔纯度99%〕在100±5℃枯燥4h，准确称量0.0500g，溶于乙醇溶液〔3→10〕，准确配成100.0mL溶液。此溶液每mL含0.500mg肌醇。

3.8硅烷化试剂将三甲基氯硅烷、六甲基二硅氨烷、二甲基甲酰胺以1：2：8的体积比混合制成，临用时现配。

4仪器和设备

4.1 气相色谱仪：附氢火焰检测器〔FID〕 4.2 旋转蒸发仪。 4.3 超声波清洗器。

5分析步骤 5.1 试样预处理

DOC

5.1.1 取20粒片剂或胶囊试样研磨或混匀，称取一定量〔准确至0.001g〕于试管中，参加乙醇溶液〔3→10〕,使浓度为每毫升中大约含肌醇0.5mg，超声提取10min, 在转速为3000r.p.m / min下离心5min,上清液待用。液体试样如浓度过高可用乙醇溶液〔3→10〕稀释至每毫升含肌醇0.5mg。

5.1.2准确量取1.0mL试样溶液于旋转蒸发仪浓缩瓶中，参加5mL无水乙醇，于60℃旋转蒸发仪上浓缩至剩有少量液体，之后再每次参加5mL无水乙醇直至浓缩瓶中液体完全除去。

5.1.3向浓缩瓶中准确参加硅烷化试剂5.0mL，使用超声波振超至瓶中内容物完全分散。在70℃水浴中加热10min。冷却后参加10mL水， 再准确参加3.0mL正己烷，混摇后放置10min，在转速为3000r.p.m / min下离心5min，取出正己烷层，参加少量无水硫酸钠，轻轻混摇后放置，取上清液进样。

准确量取3.7中肌醇标准溶液1.0mL，并按试样5.1.2起操作，可得肌醇标准衍生溶液。

5.2 气相色谱参考条件 5.2.1 检测器: FID

5.2.2 色谱柱 BP5 25m×0.32mmi.d.石英弹性毛细管柱 5.2.3 气体流速载气〔N2〕 50mL/min 尾吹气〔N2〕 50mL/min 氢气40mL/min 空气500mL/min 分流比 1：50 5.2.4 柱温：190℃

DOC

5.2.5 进样口温度：245℃ 5.2.6 衰减：4 5.2.7 纸速：2

5.2.8 色谱分析：量取1μL标准与试样衍生液注入色谱仪中，以保存时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比拟定量。

5.2.9 色谱图 在上述色谱条件下，肌醇的保存时间为5.220。

标准色谱图 试样色谱图

5.3 标准曲线制备 配制浓度为0.0、0.1、0.5、2.5、5.0、10.0mg/mL肌醇标准溶液，在给定的仪器条件下进展气相色谱分析，以峰面积对浓度作校正曲线。 5.4 分析结果表示 5.4.1 计算公式

h1× C ×V ×100 X = ────────── h2×m

式中： X－试样中肌醇的含量，mg/100g〔mL〕； h1－试样峰高或峰面积； C －标准溶液浓度，mg/mL； V－试样定容体积，mL； h2－标准溶液峰高或峰面积；

DOC

m－试样量，g或mL。

5.4.2 结果表示 检测结果保存三位有效数字。 6 技术参数

准确度 方法的添加回收率在91.0%～97.2%之间 允许差 平行样测定相对误差±10%。

8. 保健食品中肉碱的测定

Determination of carnite in health food

1．X围

本方法规定了片剂、胶囊保健食品中肉碱的测定方法。 本方法适用于以肉碱为主要原料的片剂、胶囊中肉碱的测定。 本方法最低检出量为0.27ug。

本方法最正确线性X围：0.050mg/mL—2.0mg/mL。 2. 原理

试样中的肉碱以0.5mmol/L的盐酸超声提取，反相色谱别离，与标准品的保存时间比拟定性，以峰面积外标法定量。 3. 试剂

除特殊说明，所用试剂均为分析纯。实验用水为去离子水或同等纯度的蒸馏水。

3．1 磷酸氢二钾

DOC

3．2 辛烷磺酸钠 3．3 0.50mmol/L盐酸

3．4 肉碱标准溶液：精细称取枯燥至恒重的肉碱标准品(含量98%)0.0200g，

用0.50mmol/L盐酸溶解并定容为10.0mL，此溶液浓度为2.0mg/mL。 4. 仪器

4．1 HPLC系统，配有紫外检测器和色谱工作站； 4．2 超声波提取器；

4．3 溶剂微孔过滤器带0.45um水相滤膜。

5. 分析步骤

5．1 试样预处理：准确称取粉碎并混合均匀的式样0.50g〔含肉碱约40毫克〕；液体试样取5.0mL，于50mL容量瓶中，参加0.50mmol/L盐酸约35mL，超声提取10min，用0.50mmol/L盐酸定容，混匀，过滤，弃初滤液数毫升，收集滤液，过0.45um水相滤膜，为试样处理液。供HPLC分析。 5．2 试样分析

5．2．1 色谱条件：Shim—pakCLC ODS 柱；4.6×200mm,10um；

5．2．2 流动相：0.05mol/L(3.4g) 磷酸氢二钾溶液，0.002mol/L辛烷磺酸钠;

10%乙腈；PH2.5。

5．2．3 流速：0.8mL/min；

5．2．4 检测器：紫外检测器；检测波长： 210nm；

5．3 标准曲线：分别取标准溶液0.0,0.25,0.50,1.0,2.0,2.5,5.0mL标准溶

DOC

液〔3.4〕于5mL比色管中；用0.50mmol/L盐酸稀释并定容为5.0mL，分别进样20uL进展色谱分析。用标准浓度—峰面积绘制标准曲线。

5．4 试样测定：取20uL试样处理液〔5.1〕注入色谱仪中，以保存时间定性， 面积定量。 5. 5 色谱图

5. 6分析结果表述

试样中肉碱的含量按5.5.1式计算 5．6．1 计算 C×V X= m

式中： X— 为试样中肉碱的含量，mg/g；

m—为试样质量，g；

C—为试样处理液中肉碱的浓度，mg/mL；

V—为试样处理液体积，mL。 5.6.2 结果表示

结果保存三位有效数字。 6 . 技术参数

DOC

重复测定值的RSD小于6.0%。 回收率：90.3~101.1%

9. 保健食品中α-亚麻酸、γ-亚麻酸的测定

Determination of α、β-linolenic acids in health food

1. X围

本方法规定了保健食品中α-与γ-亚麻酸的测定方法。

本方法适用于油脂保健食品中α-与γ-亚麻酸含量的测定。 本标准还适用于油脂保健食品中C16～C22不饱和脂肪酸含量的测定。 本方法最低检出量：γ-亚麻酸为0.050μg、α-亚麻酸为0.030μg。 本方法最正确线性X围：0～0.50mg/mL 2. 原理

将油脂试样〔或试样提取的脂肪〕，经氢氧化钾皂化，在三氟化硼存在下甲醇酯化，然后用气相色谱仪分析，采用外标法定量。 3. 试剂

所用试剂除注明外均为分析纯 3.1 正己烷：沸点68.7℃。

3.2 氢氧化钾甲醇溶液：C(KOH)为0.5mol/L。称取28gKOH容于1000mL纯水。 3.3 三氟化硼甲醇溶液〔1＋4〕：取40%三氟化硼乙醚溶液1份，加甲醇4份，混匀即可。

3.4 α-亚麻酸甲酯 >99.0% 3.5 γ-亚麻酸甲酯 >99.0%

DOC

3.6 标准储藏液 称0.0250g的α-亚麻酸甲酯与0.0250mg的γ-亚麻酸甲酯标准品，分别用正己烷溶解，并定容于25mL容量瓶中，混均，浓度分别为1.0mg/mL。 3.7 标准使用液 分别取α-亚麻酸甲酯与γ-亚麻酸甲酯标准储藏液各5.0mL置于10mL的容量瓶中，混均，α-亚麻酸甲酯和γ-亚麻酸甲酯的含量为0.5mg/mL。 4. 仪器与设备

4.1 气相色谱仪，附氢火焰〔FID〕检测器。 4.2 数据处理机，或积分仪。 4.3 分析天平：1/10000。 4.4 分析天平：1/1000。 4.5加热式磁力搅拌器。

4.6标准磨口烧瓶(50mL)和直形冷凝管。 5. 分析步骤 5.1试样制备

5.1.1 脂肪的提取 按GB/T 5009.6中规定的方法提取。 5.1.2皂化

称取0.100g油脂〔或脂肪〕和磁力搅拌子一并放入50mL磨口烧瓶中〔见图1〕，参加4mL0.5mol/L氢氧化钾甲醇溶液，上部连接回流冷凝管，并固定于磁力搅拌器上，由冷凝管上口向溶液中导入氮气；使反响瓶中始终充满氮气。开启磁力搅拌器，并加热使反响液保持65±5℃，搅拌回流约15min。 5.1.3甲脂化

从冷凝管上部参加4mL三氟化硼甲醇溶液，搅拌(65±5℃)，回流约2min，冷

DOC

至室温，从冷凝管上部参加5mL正己烷继续搅拌5min，移去冷凝管，参加5mL饱和氯化钠水溶液，摇动数分钟，转移至25mL分液漏斗中别离水与有机相，再加3mL正己烷洗水相，别离，弃水相，合并有机相并定容至10mL(浓度低时吹氮浓缩至1.0mL)。供测定用。 5.2 气相色谱参考条件

5.2.1 色谱柱：FFAP〔改性聚乙二醇20M，30m×0.25mm i.d. 0.25μm〕。 5.2.2 柱箱温度：215℃。 5.2.3 进样口温度：250℃。 5.2.4 检测器温度：260℃。

5.2.5 氮气：50mL/min，30∶1分流；氢气：45mL/min；空气：500mL/min。 5.3定性分析

在上述仪器条件下，分析取标准使用液和试样测定液1.0μL，注入气相色谱仪，以保存时间来确定α-与γ-亚麻酸甲酯。 5.4定量分析

试样中α或γ-亚麻酸甲酯色谱峰面积或峰高与标准的比拟定量。 6. 分析结果

试样中α或γ-亚麻酸测定结果按〔1〕式计算 6.1 计算

A1A2×ρ×νm×1000×0.952×100%χ(%) =------〔1〕

式中：

χ──α或γ-亚麻酸含量，%；

DOC

A1──试样中α或γ-亚麻酸甲酯色谱峰面积或峰高；

A2──标准使用液色谱峰面积或峰高； ρ ──标准使用液浓度, mg/mL； ν──正己烷定容体积, mL； m──试样质量, g； 0. 952──亚麻酸换算系数。

脂肪试样再换算原保健食品试样中γ-亚麻酸和α-亚麻酸的量。 6.2 结果表述

计算结果保存三位有效数字。 7. 技术参数

相对标准偏差：<10%.。 回收率：93.0%～101.7%

8. 色谱参考图

图1 标准色谱图 图2 试样色谱图

DOC

气相色谱参考条件 色谱柱：FFAP〔改性聚乙二醇20M，30m×0.25mm i.d. 0.25μm〕。

柱箱温度：215℃。进样口温度：250℃。检测器温度：260℃。 氮气：50mL/min，30∶1分流；氢气：45mL/min；空气：500mL/min。

10.保健食品中免疫球蛋白IgG的测定

Determination of immunoglobulin content in health food

━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 1

适用X围

本方法规定了初乳粉中免疫球蛋白IgG的测定。 本方法适用于初乳粉中免疫球蛋白IgG的测定。 本方法最小检出量：2.0μg。

本方法最小检出浓度：当取样量0.1g，稀释至25mL，进样量20μL时，最小检出浓度为0.5mg/mL。

本方法最正确线性X围：0.2~1.0mg/mL。

2 方法原理

根据高效亲和色谱的原理，在磷酸盐缓冲液条件下免疫球蛋白IgG与配基连接，在pH2.5的盐酸甘氨酸条件下洗脱免疫球蛋白IgG。

3 试剂

3.1 pH6.5 0.05mol/L 磷酸盐缓冲液 ·A液

DOC

3.2 pH2.5 0.05mol/L 甘氨酸盐酸缓冲液··B液

3.3 IgG标准贮备液：称取IgG标准品〔Sigma化学公司〕0.0100g,用pH6.5 0.05mol/L磷酸盐缓冲液溶解并定容至10.0mL,摇匀，浓度为1.0mg/mL。 3.4 IgG标准系列溶液：以IgG标准贮备液，用pH6.5 0.05mol/L磷酸盐缓冲液稀释成含IgG 0.2mg/mL, 0.4mg/mL, 0.6mg/mL, 0.8mg/mL, 1.0mg/mL的标准系列。临用时配制。

4 仪器和设备

HPLC仪具紫外检测器和梯度洗脱装置。

5 分析步骤

5.1 试样处理：称取0.1g〔准确至0.001g〕试样，用A液稀释至25.0mL,摇匀，通过0.45μm微孔滤膜后进样。

5.2.1 先用5倍柱体积的重蒸水洗柱，再用10倍柱体积的A液平衡柱，进样，按洗脱程序进展洗脱。 5.2.2 HPLC参考条件

色谱柱：Pharmacia HI-Trap Protein G柱，1mL。 波长：280nm 移动相：A液

B液 进展梯度洗脱，见下表。

梯度洗脱表：

Time

0

Flow mL/min

0.4

A% 100

DOC

B% 0 Gradient

※

4.5 5.5 15.0 15.5 22.0

6 分析结果表示 6.1 计算

xCV100 m10000.4

0.4 0.4 0.4 0.4 100 0 0 100 100 0 100 100 0 0 6 6 6 6 6

式中 x：试样中IgG的含量，g/100g； m：试样的质量，g；

C：被测液中IgG的含量，mg/mL；

V：试样定容的体积，mL。

6.2 结果表示：计算结果保存三位有效数字。

7

技术参数 允许差:≤5% 回收率:94.4~95.1% 8

色谱图

DOC

IgG峰

IgG峰

11.保健食品中水溶性粗多糖的测定方法

Determination of water-soluble crude polysaccharide in

health food

1. X围

本方法规定了保健食品中以葡聚糖为主要结构分子量在10000以上的水溶性粗多糖的测定方法。

本方法适用于保健食品中以葡聚糖为主要结构分子量在10000以上的水溶性粗多糖的测定。

本方法最低检出浓度：5.0mg/L。

本方法最正确线性X围：5.0ug/mL—200ug/mL。 2. 原理

食品中分子量>10000的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单和

DOC

低聚糖别离，用碱性二价铜试剂选择性的从其它高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的水溶性多糖 ，用苯酚-硫酸反响以碳水化合物形式比色测定其含量，其颜色强度与水溶性粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以葡萄糖为标准参照物并以此计算食品中水溶性粗多糖含量。 3．试剂

本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。

3.1乙醇溶液(80%):20mL水中参加无水乙醇80mL,混匀。

3.2氢氧化钠溶液(100g/L):称取100g氢氧化钠,加水溶解并稀释至1L,参加固体

无水硫酸钠至饱和,备用。

3.3铜试剂储藏液:称取3.0gCuSO4.5H2O,30.0g柠檬酸钠,加水溶解并稀释至1L,

混匀备用。

3.4铜试剂溶液：取铜储藏液50mL，加水50mL，混匀后参加固体无水硫酸钠12.5g

并使其溶解。临用新配。

3.5洗涤剂：取水50mL，参加10mL铜试剂溶液，10mL氢氧化钠溶液，混匀，临用新配。

3.6硫酸溶液〔10%〕：取100mL浓硫酸参加到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。

3.7苯酚溶液〔50g/L〕：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。溶液置冰箱中可保存一月。

3.8葡萄糖标准储藏溶液:精细称在硫酸枯燥器中枯燥至恒重的葡萄糖标准0.5000g,加溶解,并定容至50mL,混匀,置冰箱中保存。此溶液每毫升含10.0mg

DOC

葡萄糖。

3.9葡萄糖标准使用液:吸取葡萄糖标准储藏液1.00mL,置于100mL容量瓶中,加水至刻度,混匀,置冰箱中保存。此溶液每毫升含葡萄糖0.10mg。 4．仪器 4.1分光光度计 4.2离心机 4.3旋转混匀器 5. 分析步骤 5.1标准曲线制备:

精细吸取葡萄糖标准使用液0.00,0.10,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00 mL(相当于葡萄糖,0.010,0.020,0.040,0.060,0.080,0.10mg)分别置于25mL比色管中,准确补充水至2.0mL,参加50g/L苯酚溶液1.0mL,在旋转混匀器上混匀,小心参加浓硫酸10.0mL,于旋转混匀器上小心混匀,置沸水浴中煮沸2min.,冷却后用分光光度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比,1cm比色皿测定吸光度值。以葡萄糖浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。 5.2试样处理

5.2.1试样提取:称取混合均匀的固体试样2.0g,置于100mL容量瓶中,加水80mL左右,于水浴上加热2h,冷却至室温后补加水至刻度,混匀,过滤,弃去初滤液,收集余下滤液供沉淀多糖。

5.2.2沉淀粗多糖:精细取5.2.1滤液5.0mL或液体试样5.0mL,置于50mL离心管中,参加无水乙醇20mL,混匀5min.,以3000rpm离心5min.,弃去上清液。残渣用80%乙醇溶液数毫升洗涤,离心后弃上清液,反复3—4次操作。残渣用水溶解并定

DOC

容至5.0mL,混匀,供沉淀葡聚糖。

5.2.3沉淀葡聚糖:精细取5.2.2溶液2mL置于20mL离心管中,参加100g/L氢氧化钠溶液2.0mL，铜试剂溶液2.0mL,沸水浴中煮沸2min.,冷却后以3000rpm离心5min.,弃去上清液。残渣用洗涤液数毫升洗涤,离心，弃去上清液,反复3次操作,残渣用100mL/L硫酸溶液2.0 mL溶解并转移至50mL容量中,加水稀释至刻度,混匀。此溶液为试样测定液。

5.3试样测定:精细吸取试样测定液2.0 mL置于25 mL比色管中,参加50g/L苯酚溶液1.0 mL,在旋转混匀器上混匀后,小心参加浓硫酸10.0mL后于旋转混匀器上小心混匀,置沸水浴中煮沸2min.,冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处,以试剂空白为参比,1cm比色皿测定吸光度值。从标准曲线上查出葡萄糖含量,计算试样中水溶性粗多糖含量。同时作试样空白实验。 5．4 分析结果表述

试样中水溶性粗多糖的含量按式〔5.4.1〕计算。 5．4．1计算

X(m1m2)V1V3V5mV2V4V6

式中:x—试样中水溶性粗多糖含量(以葡萄糖计),mg/g; m1---试样测定液中葡萄糖的质量,mg; m2---试样空白液中葡萄糖质量,mg; m---试样质量,g;

V1---试样提取液总体积,mL;

V2---沉淀粗多糖所用试样提取液体积,mL; V3---粗多糖溶液体积,mL;

DOC

V4---沉淀葡聚糖所用粗多糖溶液体积,mL; V5 --试样测定液总体积, mL; V6---测定用试样测定溶液体积,mL。

5．4．2 结果表示

计算结果保存两位有效数字。 6. 技术参数

回收率：不同食品中不同浓度加标回收的回收率为87.8～110.8%。

精细度：同一试样10次测定结果的RSD为5.8%。 干扰因素：测定过程中防止碳水化合物的玷污干扰。

12.保健食品中人参皂甙高效液相色谱测定 Determination of ginsenosides in health food by

high-performance liquid chromatography

1. 适用X围

本方法规定了人参含片、人参冲剂、人参茶、人参胶囊等以人参为主要原料的保健食品中人参皂甙的含量的HPLC的测定方法。

本方法适用于人参含片、人参冲剂、人参茶、人参胶囊等以人参为主要原料的保健食品中人参皂甙的含量的HPLC的测定方法。

本方法的六种皂甙的最低检出量为 10 mg/kg。

本方法的六种皂甙的最正确线性X围：0.1mg/mL～1mg/mL。

2. 原理

将试样中的人参皂甙溶解、提取，经净化处理后，使用梯度洗脱反相高效液

DOC

相色谱进展别离，紫外检测器〔UV〕检测，根据色谱峰的保存时间定性，外标法定量，适用于保健食品中人参皂甙Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd的同时定量分析。

3. 试剂

实验用水为去离子水。

3.1 乙腈：色谱纯，200nm吸光度值为0.021。 3.2 甲醇：分析纯。 3.3 101大孔吸附树脂。

3.4 高效液相色谱流动相：梯度淋洗A液为乙腈，B液为水。

3.5人参皂甙Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd标准品：含量大于98％〔HPLC〕。 3.6人参皂甙Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd标准溶液的配制：

配制人参皂甙Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd标准储藏液，浓度分别为10mg/mL；再以此储藏液配制成混合标准系列溶液，浓度X围为0.1mg/mL～1mg/mL；所有标准溶液均用甲醇配制。

4. 仪器设备

4.1 高效液相色谱仪：双高压输液泵，附紫外检测器。 4.2 超声波清洗器。 4.3 离心机。 4.4 水浴锅。

5. 分析步骤

5.1 固体试样处理：取片剂或胶囊内容物研成粉末，并过20目筛；准确称取该粉末样适量于50mL具塞试管中，加水50ml于超声波清洗器中超声提取30分钟，

DOC

取出，待溶液恢复常温后，准确取出10ml，通过D－101大孔吸附树脂净化柱〔大孔吸附树脂使用前先经甲醇浸泡，水洗，装成10cm长小柱〕，小柱先用10ml水冲洗，弃去水液之后，用70%甲醇25 mL洗脱皂甙，收集甲醇溶液，水浴上蒸干，残渣以甲醇溶解并定容至5mL，该样液离心后过0.5μm膜，滤液进展色谱分析。 5.2 液体试样处理：

含的液体试样：取一定量的试样于水浴上蒸干，残渣以50mL水超声提取30分钟，余下步骤与5.1一样。 5.3 测定：

5.3.1 液相色谱参考条件

5.3.1.1 色谱柱：反相C18柱, 4.6 x 250 mm，5μm 5.3.1.2 紫外检测器：检测波长 203nm 5.3.1.3 梯度淋洗条件：

时间〔分

乙腈〔％〕

钟

0 20 55 65 75 80

16 18 40 40 100 16

水〔％〕 84 82 60 60 0 84

流速 (mL./min)

1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0

梯度曲线

1 6 6 6 1 1

5.3.1.4 柱温：35°C 5.3.2 色谱分析

5.3.2.1 标准曲线的制备

将混合标准系列溶液均取5μL进HPLC分析，用峰面积对浓度作各皂甙的标

DOC

准回归曲线。 5.3.2.2 试样测定

取5μL试样净化液进高效液相色谱分析，以绝对保存时间定性，用峰面积通过各皂甙的标准曲线定量计算试样中人参皂甙Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd的含量。

6. 分析结果表述 6.1 计算

C × 5× 5 × 100

试样中各人参皂甙的含量〔g/100g〕＝

m × 1000

式中：C 试样溶液中各人参皂甙的含量，mg/mL； m 试样质量，g；

试样中总人参皂甙的含量〔g/100g〕＝ CRe ＋ CRg1 ＋ CRb1 ＋ CRc ＋ CRb2 ＋ CRd

式中：CRe (g/100g)：试样中Re的含量

CRg1 (g/100g)：试样中Rg1的含量 CRb1 (g/100g)：试样中Rb1的含量 CRc (g/100g)： 试样中Rc的含量 CRb2 (g/100g)：试样中Rb2的含量 CRd (g/100g)： 试样中Rd的含量

DOC

6.2 结果表示： 计算结果保存三位有效数字

7. 色谱图

白参 Rb1 Rc Rb2 Rd

Re

Rg1 Rf

Re

茎叶皂甙 Rd

Rg1 Rb1 Rb2 Rc

西洋参 Re Rd

Rg1 Rb1 Rc Rb2

红参 Rg1 Rb1

Re Rc Rb2 Rd Rf

13.保健食品中原花青素的测定

Determination of procyanidins in health food

1 X围

本方法规定了保健食品中原花青素的测定方法。 本方法适用于保健食品中原花青素的含量测定。 本方法最低检出量为3μg，最低检出浓度为3μg/mL。

DOC

本方法最正确线性X围：3～150μg/mL。

2 原理

原花青素是含有儿茶素和表儿茶素单元的聚合物。原花青素本身无色，但经过用热酸处理后，可以生成深红色的花青素离子。本法用分光光度法测定原花青素在水解过程中生成的花青素离子。计算试样中原花青素含量。

3 试剂

3.1 甲醇 分析纯。 3.2 正丁醇 分析纯。 3.3 盐酸 分析纯。

3.4 硫酸铁铵 NH4Fe〔SO4〕2·12H2O溶液：用浓度为2mol/L盐酸配成2%〔w/v〕

的溶液。

3.5 原花青素标准品 葡萄籽提取物，纯度95%。

4 仪器 4.1 分光光度计 4.2 回流装置

5 分析步骤 5.1 试样的制备

5.1.1 片剂 取20片试样，研磨成粉状。

5.1.2 胶囊 挤出20粒胶囊内容物，研磨或搅拌均匀，如内容物含油，应将内容物尽可能挤出。

DOC

5.1.3 口服液 摇匀后取样。 5.2 提取

5.2.1 粉状试样 称取50—100mg试样置于50mL容量瓶中，参加30mL甲醇，超声处理20min，放冷至室温后，加甲醇至刻度，摇匀，离心或放置至澄清后取上清液备用。

5.2.2 含油试样 称取50mg试样置于小烧杯中，用20mL甲醇分数次搅拌，将原花青素洗入50mL容量瓶中，直至甲醇提取液无色，加甲醇至刻度，摇匀。 5.2.3 口服液 吸取适量样液〔取样量不超过1mL〕置于50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。 5.3 测定

5.3.1 标准曲线 称取原花青素标准品10.0mg溶于10mL甲醇中，吸取该溶液0、 0.1、 0.25、0.5、 1.0、 1.5mL置于10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。各取1mL测定。与试样测定方法一样。

5.3.2 试样测定 将正丁醇与盐酸按95:5的体积比混合后，取出6mL置于具塞锥瓶中，再参加0.2mL硫酸铁铵溶液和1mL试样溶液，混匀，置沸水浴回流，准确加热40min后，立即置冰水中冷却，在加热完毕15min后，于6nm波长处测吸光度，由标准曲线计算试样中原花青素的含量。显色在1小时内稳定。

6 分析结果表述

试样中原花青素测定结果按〔1〕式计算 6.1 计算：

m1×v×1000

X〔%〕= ———————————×100

DOC

m×1000×1000

式中： X—试样中原花青素的百分含量 g/100g； m1—反响混合物中原花青素的量 μg； v—待测样液的总体积； m—试样的质量 mg。 6.2 结果表示

计算结果保存三位有效数字。

7 技术参数

相对标准偏差：＜10%

回收率：84.6~94.4% 。

14.保健食品中核苷酸的测定

Determination of nucleotide in health food

1 X围

本方法规定了以液相色谱法测定保健食品中的核苷酸。

本方法适用于作为成效成分添加于婴幼儿配方奶粉中核苷酸的测定。 本方法检出限：胞嘧啶核苷〔CMP〕0.04μg/ mL、脲嘧啶核苷〔UMP〕0.05μg/ mL、腺嘌呤核苷〔AMP〕0.05μg/ mL、鸟嘌呤核苷〔GMP〕0.06μg/ mL、次黄嘌呤核苷〔IMP〕0.04μg/ mL。

本方法线性X围：胞嘧啶核苷〔CMP〕0.992～12.4μg/ mL，脲嘧啶核苷〔UMP〕1.17～14.6μg/ mL、腺嘌呤核苷〔AMP〕1.01～12.6μg/ mL、鸟嘌呤核苷〔GMP〕

DOC

0.948～12.3μg/ mL、次黄嘌呤核苷〔IMP〕1.30～16.3μg/ mL。

2 原理

将试样溶解、去除蛋白后, 使用氨基固相萃取柱对核苷酸进展净化富集，根据高效液相色谱紫外检测器在2nm处的响应进展定性定量。

3试剂

除非另有说明, 在分析中仅使用确定为分析纯的试剂和双蒸水。 3.1甲醇优级纯。 3.2 乙酸。 3.3 磷酸二氢钾。 3.4 磷酸氢二钾。 3.5 季铵盐固相萃取柱。

3.6 核苷酸标准储藏溶液：准确称量经100℃，4h枯燥处理的标准品胞嘧啶核苷〔CMP〕100mg，脲嘧啶核苷〔UMP〕、腺嘌呤核苷〔AMP〕、鸟嘌呤核苷〔GMP〕、次黄嘌呤核苷〔IMP〕各40mg，加水定容至100mL。

3.7 核苷酸标准使用液：将核苷酸标准储藏溶液用0.25mol/L,pH=3的磷酸二氢钾稀释100倍。

4 仪器设备

4.1 高效液相色谱仪：附紫外检测器〔UV〕。

5 分析步骤 5.1 试样处理

DOC

5.1.1 准确称取10g试样于100mL容量瓶中，参加约50℃热水80mL，彻底混匀。当试样液达到室温后用水定容至刻度。

5.1.2 准确吸取10mL试样溶液至100mL容量瓶中，参加0.5％乙酸5mL、水10mL，混匀后静置5min以沉淀蛋白。用水定容至刻度，混匀后过滤，弃去数mL初滤液后收集约30mL滤液。

5.1.3 将季铵盐固相萃取柱先用10mL甲醇、10mL水活化后，再将20mL试样滤液过滤,以1mL水清洗萃取柱，用0.25mol/L,pH=3.5磷酸二氢钾溶液洗脱出5mL滤液。全部过程需要控制流速1滴/秒。 5.2 液相色谱参考条件

5.2.1 色谱柱: C18柱 3.9×150mm。 5.2.2 柱温：25℃。

5.2.3 紫外检测器：检测波长 2nm。

5.2.4 流动相：0.01mol/L磷酸二氢钾：0.1mol/L磷酸氢二钾＝480：20。 5.2.5 流速：0.6mL/min。 5.2.6 进样量：10L。

5.2.7色谱分析：量取10μL标准溶液与试样溶液注入色谱仪中，以保存时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比拟定量。 5.2.8 保存时间

DOC

在上述色谱条件下, 5种核苷酸的保存时间见色谱图, 浓度分别为胞嘧啶核苷〔CMP〕12.4μg/mL，脲嘧啶核苷〔UMP〕14.6μg/mL、腺嘌呤核苷〔AMP〕16.3μg/mL、鸟嘌呤核苷〔GMP〕12.6μg/mL、次黄嘌呤核苷〔IMP〕12.3μg/mL。 5.3 分别配制浓度为1.0、2.0、5.0、10.0、16.0μg/mL的4种核苷酸标准溶液, 在给定的仪器条件下进展液相色谱分析, 以峰面积对浓度作标准曲线。 6 分析结果表述 6.1 计算

Xh1CK5100

h2m1000式中：X － 试样中核苷酸的含量，mg/100g； h1－ 试样峰高或峰面积； C － 标准溶液浓度，g/mL； K － 稀释倍数；

h2－ 标准溶液峰高或峰面积； m － 试样量，g。

6.2 结果表示：检测结果保存三位有效数字。 8 技术参数

DOC

回收率：回收率在85.0％～96.7％之间。

使用一样方法对同一试样平行测定的绝对差值在10%X围内。

15.保健食品中洛伐他丁含量测定

Determination of lovastatin in health food

1 X围

本方法规定了保健食品中洛伐他丁含量的测定方法。

本方法适用于洛伐他丁作为成效成分添加于片剂、胶囊以与红曲发酵原料等试样类型中含量的测定。

本方法的最低检出量2.0mg/kg。

本方法的最正确线性X围2.00～300 μg/mL。

2 原理

将酸性介质中的试样使用三氯甲烷进展提取，挥干提取溶剂，以流动相定容，根据高效液相色谱紫外检测器在238nm处的响应进展定性定量。

3 试剂

3.1 甲醇色谱纯。 3.2 三氯甲烷分析纯。 3.3 磷酸分析纯。

3.4 洛伐他丁标准储藏液准确称量洛伐他丁标准品0.0400g，参加检测用流动相并定容至100mL。此溶液每mL含0.4mg洛伐他丁。

3.4 洛伐他丁标准使用液将洛伐他丁标准储藏溶液用流动相稀释10倍。此溶液

DOC

每mL含40g洛伐他丁。

4 仪器设备

4.1 高效液相色谱仪：附紫外检测器〔UV〕 4.2 超声波清洗器 4.3 涡旋混匀器 4.4 离心机 4.4 真空泵

5 分析步骤 5.1 试样处理：

5.1.1 将片剂、胶囊或红曲发酵产物试样粉碎并混合均匀, 根据试样中洛伐他丁含量准确称取一定量试样于50mL试管中，参加10.0mLpH=3磷酸水溶液。超声提取10min后再参加10.0mL三氯甲烷，置于涡旋混匀器3min。静置后去掉上层水相， 将三氯甲烷层以3000rpm/min离心3min。

5.1.2 准确吸取上清液1.0mL至5mL试管中，将试管置于50℃左右水浴中使用真空泵减压枯燥至挥去全部溶剂。

5.1.3 向试管中参加流动相并定容至5.0mL，彻底混匀,经0.45m滤膜过滤后待进样。

5.2 液相色谱参考条件

5.2.1 色谱柱: C18柱 4.6×250mm 5.2.2 柱温：室温

5.2.3 紫外检测器：检测波长 238nm

DOC

5.2.4 流动相：甲醇：水: 磷酸＝385：115：0.14 5.2.5 流速：1.0mL/min。 5.2.6 进样量：10L。

5.2.7 色谱分析：量取10μL标准溶液系列与试样溶液注入色谱仪中，以保存时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比拟定量。 5.2.8 色谱图

色谱图中洛伐他丁浓度为25μg/mL

5.3标准曲线制备: 配制浓度为2.0、10、50、100、300μg/mL洛伐他丁标准溶液, 在给定的仪器条件下进展液相色谱分析, 以峰高对浓度作标准曲线。 5.4分析结果表示 5.4.1计算

Xh1c50100

h2m1000式中： X－试样中洛伐他丁的含量，g/100g； h1－试样峰高或峰面积； c－标准溶液浓度，mg/mL； 50－试样稀释倍数； h2－标准溶液峰高或峰面积；

m－试样量，g。

5.4.2 结果表示: 检测结果保存三位有效数字。

DOC

6 技术参数

准确度 方法的回收率在93.3%～108.4%之间 允许差 平行样测定相对误差±5%。

16.保健食品中植物类成效成分鉴别试验方法

Distinguish method of plant function ponent in health food

1 X围

1 本方法适用于保健食品中人参、西洋参、陈皮、甘草、大黄、银杏叶、芦荟、葛根等植物中的成效成分的鉴别。

2 本方法规定了保健食品中人参、西洋参、陈皮、甘草、大黄、银杏叶、芦荟、葛根等植物中的成效成分的鉴别方法。

一. 陈皮

1. 供试液制备

1.1 片剂或胶囊 称取研细的试样2g，加甲醇20mL，水浴上回流20min或超声处理15min，过滤，取滤液10mL，浓缩至干，加甲醇1mL溶解残渣作为供试品溶液。

1.2 糖块：取本品30g，加30mL水使溶解，用稀盐酸调节PH至5—6，以水饱和的正丁醇提取3次〔25、25、20mL〕合并正丁醇液，用水洗两次〔30mL、30mL〕取正丁醇液的1/3量置水浴上蒸干，残留物用甲醇1mL溶解制成供试品溶液。

DOC

2. 对照液制备 称取陈皮对照药材0.3g，同上处理。另取橙皮甙对照品加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。

3. 薄层板 硅胶G加5%氢氧化钠溶液的自制板5×20cm，厚300μm。

4. 点样 供试液点样2—4μL，对照液点样2μL。

5. 展开剂 S-1乙酸乙酯—甲醇—水〔100:17:13〕

S-2甲苯—乙酸乙酯—甲酸—水〔20:10:1:1〕上层溶液

6. 展开方式 上行展开两次展开：展距：第一次3cm，第二次8cm。

7. 显色 喷以3%三氯化铝乙醇溶液后略加热吹干，置紫外光灯365nm下检视。

8. 色谱识别 供试品色谱除观察到橙皮甙荧光斑点外，供试品与对照药材在

一样的位置上显一样颜色的荧光点。在色谱的中部有明显的3个兰-兰白色荧光主斑点，为主要鉴别特征。

DOC

10. 艾得康牌立即俏胶囊 11. 陈皮对照药材 12. 陈皮甙

二. 大黄

1. 供试液制备 取研细的片剂或胶囊粉末0.1g，加甲醇20mL浸渍1h，过滤，取滤液5mL蒸干，加水10mL使溶解，再加盐酸1mL置沸水浴上加热30min，立即冷却，用乙醚提取两次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷溶解使成1mL作为供试品溶液。

2. 对照液制备 取大黄对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液，另取大黄酸对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液作为对照品溶液。

3. 薄层板 硅胶H加0.3%羧甲基纤维素钠自制板，5×20cm，厚度300μm。

DOC

4.点样 分别点样4μL。

5.展开剂 正己烷—乙酸乙酯—甲酸〔30:10:0.5〕

6.展开方式 上行8cm。

7.显色 紫外光灯〔365nm〕下检视，再置氨蒸气中熏数分钟后，日光下检视。

8.色谱识别 紫外光灯〔365nm〕下，供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上显一样的5个橙黄色主斑点，在与大黄酸对照品色谱相应的位置上显一样的橙黄色荧光斑点。经氨蒸气熏后，置日光下检视斑点变为红色。

1. 金多靶减肥降脂素

DOC

2. 大黄对照药材

三. 甘草

1 供试液制备 1.1 固体试样

1.1.1 片剂与不含油的胶囊 称取研细的试样2g置于具塞锥瓶中，加乙醚40mL置水浴上加热回流1h，过滤，药渣加甲醇30mL置水浴上加热回流1h，过滤，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20mL合并正丁醇提取液，用水洗涤3次后置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解作为供试品溶液。

1.1.2 含油胶囊 称取试样2g置于折叠滤纸上，用石油醚分数次洗去油脂，再将滤纸上的试样转入具塞锥瓶中，按1.1.1项下自“加乙醚40mL〞起依法操作。

1.2 液体试样 取样10mL，加水稀释至40mL。 糖块 取适量试样加水40mL溶解。

按1.1.1项下自“用水饱和的正丁醇提取3次〞起依法操作。

2 对照液制备 取甘草对照药材同法制成对照药材溶液。再取甘草酸铵对照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液。

3 薄层板 硅胶G加1%氢氧化钠溶液的自制板，5×20cm，厚度300μm。

DOC

4 点样 供试液与对照液分别点样1—2μL。

5 展开剂 乙酸乙酯—甲酸—冰乙酸—水〔30:2:2:4〕

6 展开方式 展开箱用展开剂预平衡15min，上行展开，展距8cm。

7 显色 喷以硫酸乙醇(1→10),105℃加热数分钟至斑点显色清晰, 置紫外光灯〔365nm〕下检视。

8 色谱识别 供试品色谱与对照药材色谱根本相符，甘草酸位于色谱的下部。

1. 鹰牌川贝枇把糖

DOC

2. 甘草对照药材 3. 甘草酸

四. 人参 、西洋参

1 供试液制备 1.1 固体试样

1.1.1 片剂与不含油的胶囊 称取研细的试样2g置于具塞锥瓶中，加三氯甲烷40mL，置水浴上加热回流1h，弃去三氯甲烷液，药渣挥干残留溶剂，加水0.5mL搅匀湿润后，加水饱和的正丁醇10mL，超声处理30min，吸取上清液，加氨试液〔400→1000〕3倍量，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，加甲醇溶解使成1mL，作为供试品溶液。

1.1.2 含油胶囊 称取试样2g置于折叠滤纸上，用石油醚分数次洗去油脂，再将滤纸上的试样转入具塞锥瓶中，自“加三氯甲烷40mL〞起同上操作。 1.2 液体试样 取样液10mL，加水饱和正丁醇20mL，振摇提取，分取正丁醇层，加氨试液〔400→1000〕3倍量，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，加甲醇溶解使成1mL，作为供试品溶液。

2 对照液制备 取人参或西洋参对照药材约1g，依上法同样处理，为药材对照液。另取人参皂甙Rb1 Re Rg1 F11对照品，加甲醇溶解，使成每1mL各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。

DOC

3 薄层板 硅胶G自制板，5×20cm，厚度300—500μm。

4 点样 供试液2—10μL，对照液2μL，点样后的薄层板置硅胶枯燥器中过夜。

5 展开剂 三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—水〔15:40:22:10〕置于100mL具塞量筒中混匀，置4℃冰箱中放置，待分层至上层体积为5mL时，将上层液体吸出，弃去，摇匀后使用。

6 展开方式 展开槽内参加展开剂10mL，槽内用硫酸控制相对湿度为42%〔硫酸57mL+水100mL〕。室温25℃，平衡15min后，上行展开12—14cm，取出挥干溶剂。

7 显色 硫酸乙醇溶液〔1→10〕105℃加热数分钟至斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯〔365nm〕下观察

8 色谱识别 供试品的可见光色谱与荧光色谱与对照药材色谱根本相符，主斑点自下而上为Rb1 Re Rg1 。西洋参用与人参一样方法制备供试液，在薄层色谱上，西洋参含有的人参皂甙F11，人参不含，而人参含有的人参皂甙Rf ，西洋参不含，可作为人参与西洋参鉴别的依据，人参皂甙Rf位于Rg1的上方，F11位于人参皂甙Rf的上方。

DOC

1. 二参含片〔含人参、西洋参〕 1. 虎哥牌生力胶囊〔含人参〕 2. 人参对照药材 2. 人参对照药材

3. 西洋参对照药材 3. 人参皂甙Rb1、Re、Rg1、F11

五. 银杏叶

1 供试液制备

1.1.1 片剂与不含油的胶囊 称取研细成粉末的试样4g置于250mL具塞锥瓶中，加50%的丙酮100mL，加热回流2.5h，放冷。用滤纸过滤，滤液蒸去丙酮，放冷，残液用乙酸乙酯提取2次，每次50mL，合并提取液，蒸干。残渣用2mL15%

DOC

乙醇溶解，加于聚酰胺柱上〔30—60目2.5g，柱内径1.5cm，干法装柱〕，用5%乙醇洗脱，收集洗脱液200mL，浓缩至50mL，放冷。浓缩液用乙酸乙酯提取2次，每次50mL，合并提取液，蒸干，用丙酮5mL溶解残渣，作为供试品溶液。 1.12 含油胶囊 称取胶囊内容物4g置于折叠滤纸上，用石油醚分数次洗去油脂后，挥干溶剂，将滤纸上的试样转入250mL具塞锥瓶中按1.1.1项下自“加50%的丙酮100mL〞起，依法操作。

1.1.3 冲剂 称取研细成粉末的试样4g，加50%丙酮100mL使溶解，用滤纸过滤，滤液蒸去丙酮，放冷，残渣用乙酸乙酯提取2次，每次50mL，合并提取液，蒸干，用丙酮5mL溶解残渣，作为供试品溶液。

2 对照液制备 取银杏内酯A﹑B﹑C与白果内酯对照品加丙酮制成每1mL含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液。

3 薄层板 用含4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液制备的硅胶H板，5×20cm，厚度300μm。

4 点样 供试品溶液和对照品溶液各点样5μL，可增加供试品溶液的点样量以确定试样中是否含有银杏。

5 展开剂 甲苯—乙酸乙酯—丙酮—甲醇〔10:5:5:0.6〕

6 展开 在15℃以下展开，上行12cm，取出晾干。

DOC

7 显色 在140—160℃加热30min，置紫外灯〔365nm〕下检视。

8 色谱识别 供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显一样颜色的荧光斑点。

1. 试样Gincosan 4. 西洋参银杏叶茶 6. 日和素未检出银杏叶4μL 2. 益智灵 5. 银杏内酯A、B、C 7. 日和素 8μL 3. GIMKGO POWER 8. 日和素 12μL 4. 银杏内酯A、B、C、白果内酯 9. 银杏内酯A、B、C、白果内酯

六. 葛根

DOC

1 供试液制备 1.1 片剂或胶囊

1.1.1 称取研细的试样2g加甲醇30mL，放置2h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解使成1mL，作为供试品溶液。

1.1.2 按1.1.1制备的供试品溶液如果含有较多杂质,影响薄层色谱别离,可改用下述方法制备供试品液:称取研细的试样2g,加乙醇40mL加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加0.3%氢氧化钠溶液20mL溶解后移入分液漏斗中，用稀盐酸〔234→1000〕调节pH5—6后用乙酸乙酯20mL振摇提取，分取乙酸乙酯层，用无水硫酸钠脱水，过滤，再用乙酸乙酯20mL提取一次，合并滤液，蒸干，残渣加2mL乙酸乙酯溶解，离心后取上清液作为供试品溶液。

1.2 液体试样 取摇匀的试样20mL置分液漏斗中，加乙酸乙酯20mL振摇提取，分取乙酸乙酯层，用无水硫酸钠脱水，滤过，再用乙酸乙酯20mL提取一次，合并两次滤液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1mL溶解，作为供试品溶液。

2 对照液制备 取葛根素对照品加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。

3 薄层板 硅胶G加0.5%羧甲基纤维素钠为粘和剂的自制板，5×20cm，厚度300μm。

4 点样 供试液5—10μL，对照液5μL，使成条状。如果试样中葛根素含量较低可增加点样量。

DOC

5 展开剂 三氯甲烷—甲醇—水〔28+7+1〕

6 展开方式 上行12cm，取出，晾干。

7 显色 将展开后的薄层板置氨蒸气中熏15min，置紫外灯〔365nm〕下检视。

8 色谱识别 供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显一样颜色的荧光条斑。

1. 喜悦血燕美肌较囊 2. 葛根素

七. 芦荟

DOC

1 供试液制备

固体试样或胶囊 取本品粉末2g,加甲醇30mL至水浴上加热至沸,振摇数分钟,滤过,滤液作为供试品溶液.

2 对照液制备

取芦荟甙对照品,加甲醇制成每1mL含5mg的溶液,作为对照品溶液.

3 薄层板 硅胶G自制板 厚度500μm。

4 点样 供试品溶液与对照品溶液分别点样1—2μL。

5 展开剂 乙酸乙酯—甲醇—水〔100∶17∶13〕。

6 展开方式 上行10cm。

7 显色 喷10%氢氧化钾甲醇溶液，置紫外灯365nm下检视。

8 色谱识别 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显一样颜色的荧光斑点。

DOC

1. 金正方芦荟健康1号胶囊 1. 芦荟甙

2. 芦荟甙 2. 十八宝牌爱索菲胶囊

17. 保健食品中槲皮素、山柰素、异鼠李素的

高效液相色谱测定

Determineation of quercetin、keampferol、isorhamnetin by high - performance liquidchromatogramphy in health food

1． 适应X围

本方法规定了以银杏叶或银杏叶提取物为主要原料生产的保健食品中槲皮素、山柰素、异鼠李素含量的HPLC测定方法。

本方法适用于以银杏叶或银杏叶提取物为主要原料生产的保健食品中槲皮

DOC

素、山柰素、异鼠李素含量的HPLC测定方法。

本方法的检测限分别为：槲皮素0.002μg、山柰素0.003μg、异鼠李素0.005μg。

本方法的最正确线性X围为0.1－1.0μg。

2. 方法原理

试样经提取、水解等前处理后，使用等度洗脱反相高效液相色谱进展别离，紫外检测器〔UV〕检测，根据色谱峰的保存时间定性，外标法定量，测定试样中甙元槲皮素、山柰素、异鼠李素含量。

3. 试剂

实验用水为去离子水。 3.1 甲醇：色谱纯。

3.2 高效液相色谱流动相：甲醇＋水(50＋50)〔以磷酸调节pH＝2.5〕。 3.3 槲皮素、山柰素、异鼠李素标准品：含量大于98％〔HPLC〕。 3.4 槲皮素、山柰素、异鼠李素标准溶液的配制

分别准确称取100mg槲皮素、山柰素、异鼠李素标准品于100mL容量瓶中，参加甲醇溶解后，定容至刻度，此溶液浓度为1.0mg/mL，将该液稀释成10 ~ 100mg/L的标准系列溶液.

4. 仪器设备

4.1 高效液相色谱仪：附紫外检测器。 4.2 水浴锅。 4.3 超声波清洗器。

DOC

4.4 离心机。

5. 分析步骤

5.1 试样处理：取试样适量，用20mL甲醇于超声波浴中提取30分钟，过滤后滤液参加20mL 1.5mol/L盐酸于水浴上回流水解3小时，冷却后用甲醇定容至50mL，该样液过0.5μm膜，滤液进HPLC分析。 5.2 测定：

5.2.1 液相色谱参考条件

5.2.1.1 色谱柱：反相C18柱，5µm, 100Å, 3.9mm ID × 150mm 5.2.1.2 紫外检测器：检测波长 360nm 5.2.1.3 流速：1.0mL/min 5.2.1.4 柱温：室温 5.3.1 色谱分析

取10μL标准溶液与试样提取液进高效液相色谱分析，以保存时间定性，用峰面积以外标法定量计算试样中槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量。

7. 分析结果的表述 7.1 计算

试样中槲皮素、山柰素、异鼠李素的总含量：

X％ ＝ Q％ + K% + I%

式中：Q% 试样中槲皮素含量； K% 试样##柰素含量； I％ 试样中异鼠李素含量；

DOC

7.2 结果表示：分析结果保存三位有效数字。

7． 色谱图

18.保健食品中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定

Determinatioan of isomaltooligosaccharide fructooligosaccharide soyabean-oligosaccharide

in health food

1.X围

本方法规定了保健食品中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定方法。 本方法适用于保健食品〔糖浆、糖粉、饮料、奶粉〕中异麦芽低聚糖、低聚果糖、大豆低聚糖的测定。

本方法最低检出量：异麦芽糖2g； 潘糖5g；异麦芽三糖10g；蔗果三糖(GF2)5g蔗果四糖(GF3)5g；蔗果五糖(GF5)10g ；棉籽糖20g；水苏糖30g。

2.原理

试样除去蛋白后，离心、脱色，用液相色谱分析，用NH2柱别离，示差检测器测定，外标法定量。

3 试剂

除特殊说明，所用试剂均为分析纯。实验用水为去离子水或同等纯度的蒸馏水。

3.1 乙腈〔色谱纯〕。

DOC

3.2 无水乙醇。

3.3麦芽糖、异麦芽糖、潘糖、麦芽三糖、异麦芽三糖、棉籽糖、水苏糖(含量≥98%) ，

3.4 低聚果糖〔总含量96%，其中GF238 %,GF3 51%, GF4 7%〕。

3.5 麦芽糖、异麦芽糖混合标准溶液: 分别称取麦芽糖10.0mg, 异麦芽糖15.0mg, 潘糖9.0mg, 麦芽三糖15.0mg, 异麦芽三糖12.0mg，用水溶解，并定容至1.0mL。将此溶液逐级稀释成以下浓度：

标准溶液名称：麦芽糖、异麦芽糖、潘糖、麦芽三糖、异麦芽三糖 〔mg/mL〕

1 0.500.75 0.450.75 0.60

2 1.00 1.50 0.90 1.50 1.20 3 2.00 3.00 1.80 3.00 2.40 4 10.00 15.00 9.00 15.00 12.00

3.6低聚果糖标准溶液：精细称取含 GF238%、GF3 51%、GF4 7%的低聚果糖标准品0.0500g,用水溶解并定容至2.50mL。将此液逐级稀释成以下浓度： 标准溶液名称： GF2、 GF3、 GF4〔mg/mL〕 1 1.50 2.00 0.30 2 3.00 4.00 0.60 3 4.50 6.00 0.90 4 6.00 8.00 1.20 5 7.50 10.00 1.40

3.7 棉籽糖、水苏糖标准溶液：精细称取棉籽糖0.0400g，水苏糖0.0600g，用水溶解并定容至4.0mL。将此液逐级稀释成以下浓度：

DOC

标准溶液名称： 棉籽糖 水苏糖〔mg/mL〕 1 2.0 3.0 2 4.0 6.0

3 6.0 9.0 4 8.0 12.0

5 10.0 15.0

由于试样中程度不同的含有葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖，所以在配制标准应用液时可参加适量的葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖，主要是用于定性。

将各标准系列注入高效液相色谱仪进展测定，绘制标准工作曲线。

4 仪器

4.1 高效液相色谱仪〔附带示差检测器〕。 4.2 离心机： 10 000r/min 。 4.3 分析天平：1/10 000。 4.4 分析天平：1/1 000。

5 分析步骤 5.1试样制备

5.1.1 糖浆和糖粉：称取1.0000g 糖浆或0.2000g糖粉，用水稀释或溶解，并定容置10.0mL，摇匀，溶液过0.45m滤膜，滤液用于HPLC测定。

5.1.2 不含乳液体饮料：饮料直接离心，上清液过0.45m滤膜, 滤液用于HPLC测定。

5.1.3含乳液体饮料: 取10.0mL试样放入烧杯中，加无水乙醇30mL，搅拌混匀，

DOC

放置5min，离心，取上清液20 mL在沸水浴上挥发近干。残液用水溶解并定容至5-10 mL，溶液过0.45m滤膜，滤液用于HPLC测定。

5.1.4 奶粉：称取 2.000g试样，放入200mL烧杯中，加水15.0mL溶解，再加45.0mL无水乙醇，搅匀，放置5min，离心，取上清液30.0mL在沸水浴上挥发近干，残液用水溶解并定容至一定体积，溶液过0.45m滤膜，滤液用于HPLC测定。 5.2高效液相色谱参考条件

5.1.1 色谱柱: 不锈钢柱，内径4.6mm×300mm反相氨基柱,粒径 5m ; 5.1.2 柱温 45℃，检测室40℃。 5.1.3 流动相：乙腈+水=76+24 5.1.4 流量：1.5mL/min。 5.1.5 灵敏度： 。 5.1.6 进样量：20L

5.1.7 在上述色谱条件下注入标准溶液和试样溶液，以保存时间定性，外标法

定量。

5.1.8

6. 分析结果的表述

6.1 计算

A Ci  V

X=

Ai m  1 / 2

式中： X： 试样中某低聚糖的含量, g/kg ( g/L)。

A： 试样的峰面积或峰高。

Ci ： 单一低聚糖标准溶液的浓度, mg/mL 。 Ai ： 标准溶液的峰面积或峰高 。

DOC

ｍ： 试样质量, g〔mL〕 。 V： 试样定容体积，mL。

6.2 结果表示：结果保存两位有效数字。

注：功能性异麦芽低聚糖的含量以异麦芽糖、潘糖、异麦芽三糖计。

7. 允许差

同一实验室，平行测定两次结果的相对偏差不得超过10%。 8.准确度

准确度以回收率表示。

将某种低聚糖参加糖浆、饮料或奶粉中，做回收率实验，回收率应在90%~104%X围内。

9．正相氨基色谱柱转换为反相氨基色谱柱的步骤以产品说明书为准。

19. 保健食品中金雀异黄素的测定 Determination of genistein in health food

1. X围

本方法规定了用高效液相色谱法测定保健食品和普通食品中金雀异黄素的含量。

本方法适用于保健食品和普通食品中金雀异黄素的测定。 最低检出限量为：0.1g；

DOC

本方法最正确线性X围：1.00～125 g/mL。

2.方法提要

试样经乙醚脱脂，弃取乙醚后用甲醇水〔80+20，v/v〕超声提取30分钟，过0.45m滤膜、定容后进展液相色谱分析。试样中的金雀异黄素用C18柱别离，二极管阵列检测器或紫外检测器〔260 nm〕测定，峰面积定量，外标法计算结果。

3. 试剂

本标准所用试剂未经指定者，均为分析纯〔A.R〕，水为石英亚沸蒸馏水。 3.1 甲醇〔色谱纯〕 3.2 无水乙醚 3.3甲醇+水〔80+20〕

3.4 金雀异黄素(Genistein)标准品

3.5 0.050 mol/L 醋酸铵，pH 4.6：准确称取3.85 g 醋酸铵于小烧杯中，适量水溶解，转移至1000 mL 容量瓶中，加水500 mL，参加3.00 mL 冰醋酸，摇匀，加水至容量瓶刻度，摇匀即可。

4.仪器

4.1 高效液相色谱仪〔二极管阵列检测器或紫外检测器〕。20.0L定量管 4.2 超声波清洗器 4.3 离心机 4000r/min

5.分析步骤

5.1 高效液相色谱参考条件

DOC

5.1.1 色谱柱: 不锈钢柱，内径4.6mm, 长250mm C18柱，填料粒径10m。 5.1.2 流动相：甲醇+0.05 mol/L乙酸铵, pH 4.6〔46+，v/v 〕 5.1.3流量：1.2mL/min。 5.1.4进样量：20.0L 5.2 试样制备

5.2.1 保健食品：准确称取1g试样，加50mL甲醇水〔3.3〕超声提取30min，上清液抽滤，残渣用〔3.3〕甲醇水洗，洗液一并抽滤，定容至100.0mL，过0.45m滤膜，测定。

5.2.2 豆奶粉类食品：准确称取磨碎的豆粉或奶粉类试样5-10 g，用60mL-100 mL乙醚分三次脱脂，弃取乙醚层，加50mL甲醇水〔3.3〕超声提取30min，上清液抽滤，残渣用〔3.3〕甲醇水洗，洗涤液一并抽滤，定容后过0.45滤膜，测定。

5.2.3 各种豆腐：准确称取试样10g，用玻棒搅匀后用60mL乙醚分三次脱脂，加50mL甲醇水〔3.3〕超声提取30 min，过滤，测量体积后过0.45m滤膜，测定。

5.2.4 豆腐丝、豆腐干：准确称取试样10g，加无水硫酸钠研磨，转入具塞三角瓶中，加50mL甲醇水〔3.3〕超声提取30 min，过滤，定容后过0.45m滤膜，测定。

5.2.5 金雀异黄素储藏液：精细称取金雀异黄素标准品10.00mg，用甲醇溶解并定容至10.00mL。此液为1.000mg/mL。

5.2.6 金雀异黄素应用液：分别取金雀异黄素储藏液0.0100、0.0500、0.100、0.300、0.500、1.25mL，用甲醇定容至10.0 mL〔浓度各为1.00、5.00、10.0、

DOC

30.0、50.0、125g/mL〕。 在上述色谱条件下注入标准溶液和试样溶液，以保存时间定性，峰面积定量，外标法计算。

6. 分析结果的表述 6.1 计算

A  Ci  V × K

X=

Ai m

式中： X： 试样中金雀异黄素的含量mg/kg A： 试样的峰面积或峰高

Ci ： 金雀异黄素标准溶液的浓度, µg/mL Ai ： 标准溶液的峰面积或峰高 ｍ： 试样质量, g

V：试样定容体积，mL K: 稀释因子

6.2 结果表示：报告算术平均值的两位有效数。

7. 允许差

同一实验室，同时测定或重复测定结果的相对偏差不得超过10%。

8.准确度

将试样中参加不同浓度的金雀异黄素，做回收率实验，回收率应在

85%~110%X围内。

DOC

9. 其它

1.使用二极管阵列检测器波长设定X围210-400 nm;

2.可以建立金雀异黄素标准的吸收光谱谱库，测定试样时试样吸收光谱与标准的吸收光谱进展比拟，可以克制单靠保存时间定性的不足，增加定性的准确性； 3.根据色谱峰的峰纯度可以判定是否有干扰物质存在。

4.在标准储藏液可同时参加黄豆苷(Daidzin),染料木苷(Genistin),黄豆苷原(Daidzein)标准品，黄豆苷,染料木苷,黄豆苷原不干扰金雀异黄素的测定。

20.保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定 Determination of theanine in health food by high-performance liquid chromatography

1. 适用X围

本方法规定了红茶、绿茶与以茶氨酸为主要原料生产的保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定方法。

本方法适用于红茶、绿茶与以茶氨酸为主要原料生产的保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定方法。

本方法的最低检出量 1ng。

本方法的最正确线性X围：0.1mg/mL～4.2mg/mL。

2．方法原理

DOC

. 将试样中的茶氨酸用水提取，使用等度洗脱反相高效液相色谱进展别离，紫外检测器〔UV〕检测，根据色谱峰的保存时间定性，外标法定量，适用于红茶、绿茶与以茶为原料生产的保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定方法。 3. 试剂

实验用水为去离子水。 3.1 三氟乙酸：分析纯。

3.2 高效液相色谱流动相：等度淋洗。 3.3茶氨酸标准品：含量大于98％〔HPLC〕。 3.4茶氨酸标准溶液的配制：

准确称取3.5 mg茶氨酸对照品，溶于水中，用10 mL容量瓶定容，摇匀, 此标准溶液浓度为0.35 mg/mL。

4. 仪器设备

4.1 高效液相色谱仪：双高压输液泵，附紫外检测器。 4.2 水浴锅。

5. 分析步骤

5.1固体试样的处理：准确称取1.0克粉碎试样，参加30 mLH2O，在80℃的水浴锅上加热40 min，冷却，离心，过滤后，滤液加水定容至50 ml，试样溶液过0.45 μm水膜，滤液进展色谱分析。

5.2液体试样的处理： 取一定量的试样在水浴锅上蒸干，残渣以10ml 水溶解，

DOC

溶液过0.45 μm水膜，滤液进展色谱分析。 5.3 液相色谱参考条件

5.3.1 色谱柱：反相C18柱，5µm, 100Å, 4.6 × 250 mm 5.3.2 紫外检测器：检测波长 203nm

5.3.3 等度淋洗条件：pH=3.0的三氟乙酸水溶液；流速：1 mL/min 5.3.4 柱温：35°C 5.4 色谱分析

5.4.1 标准曲线的制备

分别取标准溶液2，4，6，10，12µL进展HPLC分析，用峰面积对进样体积绘制茶氨酸的标准回归曲线。 5.4.2 试样测定

取10μL试样净化液进展高效液相色谱分析，以绝对保存时间定性，用峰面积通过茶氨酸的标准曲线定量计算试样中茶氨酸的含量。

6. 分析结果的表述 6.1 计算

C × 5 0

试样中茶氨酸的含量〔g/g〕＝

m × 1000

式中：C 试样溶液中茶氨酸的含量，mg/mL； m 试样质量，g；

DOC

6.2 结果表示：分析结果保存三位有效数字。

7. 色谱图

100Atheanine%-6100Btheanine%-13100Ctheanine%-81.002.003.004.005.006.007.008.009.00Time10.00

21. 保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和乙素

的高效液相色谱测定

Determination of schisandrin、deoxyschisandrin、Schisandrin B in health food by high-performance liquid

chromatography

1. X围

本方法规定了以五味子为主要原料生产的保健食品中五味子醇甲、五味子甲

DOC

素和乙素含量的HPLC测定方法。

本方法适用于以五味子为主要原料生产的保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和乙素含量的HPLC测定方法。

本方法的检测限分别为五味子醇甲0.02μg，五味子甲素 0.03μg，五味子甲素0.02μg。

本方法的最正确线性X围为0.2－10μg。 2. 原理

将试样中的木脂素提取后，使用等度洗脱反相高效液相色谱进展别离，紫外检测器〔UV〕检测，根据色谱峰的保存时间定性，外标法定量，适用于以北五味子为主要原料生产的保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和乙素定量分析。 3. 试剂

3.1 水为双重蒸馏水 3.2 甲醇：色谱纯。

3.3 高效液相色谱流动相：等度淋洗。

3.4五味子醇甲、五味子甲素和乙素标准品：含量均大于98％〔HPLC〕。 3.5五味子醇甲、五味子甲素和乙素标准溶液的配制：

配制五味子醇甲、五味子甲素和乙素标准储藏液，浓度分别为3 mg/mL, 再以此储藏液配制成混合标准系列溶液，浓度X围为0.02mg/mL～1mg/mL；所有标准溶液均用甲醇配制。

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4. 仪器设备

4.1 高效液相色谱仪：双高压输液泵，附紫外检测器。 4.2 超声波清洗器。 4.3 离心机。

5. 分析步骤

5.1试样处理：精细称取粉碎后的五味子0.25g,置20mL具塞锥形瓶中,参加甲醇约18ml, 超声提取20分钟,取出，静置待冷, 加甲醇至刻度。试样溶液过0.45 μm油膜，滤液进展色谱分析。 5.2 测定：

5.2.1 液相色谱参考条件

5.2.1.1 色谱柱：反相C18柱，5µm, 100Å, 4.6 x 250 mm 5.2.1.2 紫外检测器：检测波长 2 nm

5.2.1.3 等度淋洗条件：甲醇/水=77/23〔v/v〕 流速：1 mL/min 5.2.1.4 柱温：35°C 5.2.2 色谱分析

5.3.2.1 标准曲线的制备

将标准混合系列溶液均取10μL进HPLC分析，用峰面积对浓度计算五味子醇甲、五味子甲素和乙素的标准回归曲线。

DOC

5.3.2.2 试样测定

取10μL试样净化液进展高效液相色谱分析，以绝对保存时间定性，用峰面积通过五味子醇甲、五味子甲素和乙素的标准曲线定量计算试样中的含量。

6. 分析结果的表述 6.1 计算 C ×20

试样中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的含量〔mg/g〕＝ m

式中：C 试样溶液中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的含量，mg/mL；

m 试样质量，g； 6.2 结果表示：分析结果保存三位有效数字。

7. 色谱图

1001%2-05.0010.0015.0020.003Time40.0025.0030.0035.00

*：1为五味子醇甲，2为五味子甲素， 3为五味子乙素。

DOC

22. 保健食品中腺苷的测定

Determination of adenosine in health food

1 X围

本方法规定了保健食品中腺苷的测定方法。

本方法适用于以冬虫夏草为主要原料的保健食品中腺苷的测定。 本方法的检出限：0.04μg。

本方法的线性X围：0.40～60.0μg/mL。 2 原理

将粉碎的胶囊、片剂试样使用乙醇—水进展提取，根据高效液相色谱紫外检测器定性定量检测。

3 试剂

除非另有说明，在分析中仅使用双蒸水。 3.1 磷酸二氢钾 分析纯。 3.2 无水乙醇 优级纯。 3.3 甲醇 优级纯。 3.4 提取液 乙醇：水＝3：2

3.5腺苷标准溶液准确称量腺苷标准品0.0100g，参加水溶解并定容至25mL。此溶液每mL含0.4mg腺苷。

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4仪器

4.1 高效液相色谱仪：附紫外检测器〔UV〕。 4.2 超声波清洗器。 4.3 离心机。

5分析步骤

5.1 试样处理：取20粒以上片剂或胶囊试样进展粉碎混匀，准确称取适量试样〔准确至0.001g〕于25mL容量瓶中，参加约20mL提取液, 超声提取10min。取出后参加提取液定容至刻度，混匀后以3000rpm/min离心3min。经0.45m滤膜过滤后供液相色谱分析用。 5.2 液相色谱参考条件

5.2.1 色谱柱: C18柱 4.6×150mm,5μm。 5.2.2 柱温：室温。

5.2.3 紫外检测器：检测波长 2nm。

5.2.4 流动相：甲醇:0.01mol/L磷酸二氢钾溶液＝10:90。 5.2.5 流速：1.0mL/min。 5.2.6 进样量：10L。

5.2.7色谱分析：取10μL标准溶液与试样溶液注入色谱仪中，以保存时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比拟定量。

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腺苷标准溶液色谱图

5.3 标准曲线制备 分别配制浓度为0.400、2.00、4.00、20.0、60.0μg/mL腺苷标准溶液,在给定的仪器条件下进展液相色谱分析,以峰高或峰面积对浓度作标准曲线。 5.4 分析结果的表示 5.4.1 计算 h1× C ×V

X =——————————— h2×m×1000

式中： X － 试样中腺苷的含量，mg/g； h1－ 试样峰高或峰面积； C － 标准溶液浓度，μg/mL； V － 试样定容体积，mL； h2－ 标准溶液峰高或峰面积；

m － 试样质量，g。

5.4.2 结果表示 计算结果保存三位有效数字。

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7 技术参数

准确度 方法的回收率在92.7％～98.3％之间。

允许差 在重复性条件下获得的2次测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的±10%。

23. 保健食品中褪黑素的测定

Determination of melatonin in health food

1X围

本方法规定了以褪黑素为有效成分的胶囊或片剂包装的保健食品中褪黑素的测定方法。

本方法适用于以褪黑素为有效成分的胶囊或片剂包装的保健食品中褪黑素的测定。

本方法高效液相色谱-紫外检测法的检出限为0.5ng；取样量0.5g时，检出浓度为0.07mg/kg。本方法高效液相色谱-荧光法的检出限为30pg，线性X围为0.05～0.50ng。

第一篇 高效液相色谱-紫外检测法

2 原理

试样中的褪黑素经溶解、稀释、过滤后,使用具有紫外检测器的高效液相色谱仪检测,根据色谱峰的保存时间定性,外标法定量。

3试剂

除非另有说明，在分析中仅使用确定为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或

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相当纯度的水。 3.1甲醇:色谱纯。 3.2无水乙醇：优级纯。 3.3三氟乙酸：优级纯。

3.4高效液相色谱流动相：甲醇：水：三氟乙酸=45：55：0.05。 3.5褪黑素〔Melatonin〕标准品：Sigma公司产品。 3.6褪黑素标准溶液的配制

准确称量30mg褪黑素标准品于100mL容量瓶中，参加70%乙醇溶解后定容至刻度。准确吸取2mL上述溶液于10mL容量瓶中，参加流动相〔3.4〕定容至刻度，此溶液浓度为0.060mg/mL。

4仪器设备

4.1高效液相色谱仪：附紫外检测器。 4.2超声波清洗器。 4. 3离心机。

5. 分析步骤

5.1试样处理：使用研钵将片剂或胶囊研成粉末并使之混合均匀。

5.2准确称量约一粒片剂或胶囊的重量于10mL容量瓶中，以70%乙醇定容至刻度，使用超声波清洗器提取10min。将提取液离心至澄清。准确量取上清液2mL于10mL容量瓶中，以流动相定容至刻度，混匀后经0.45μm滤膜过滤后进展色谱分析。 5.3测定

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5.3.1液相色谱参考条件

5.3.1.1色谱柱： C18，4.6mm×250mm。 5.3.1.2紫外检测器：检测波长：222nm。 5.3.1.3流速：0.8mL/min。 5.3.1.4柱温：室温 5.3.

2色谱分析

量取10μL标准溶液与试样净化液注入高效液相色谱仪中，以保存时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比拟定量。 5.3.3 色谱图

0.1400.1300.1200.1100.1000.0900.0800.0700.0600.0500.0400.0300.0200.0100.000AU0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.00Minutes5.506.006.507.007.508.008.509.009.5010.00 褪黑素标准色谱图

6．分析结果的表述 6.1 计算 h 10

————×c×10×————×1000

hs 2

X= ———————————————…………………〔1〕 m

DOC

式中：X-试样中褪黑素的含量，mg/kg； h-试样的峰高或峰面积； hs-标准的峰高或峰面积；

c-褪黑素标准溶液的浓度，mg/mL；

m-试样质量，g。

6.2 结果表示：计算结果保存二位有效数字。

7. 技术参数

准确度：本方法的回收率在92.7％～102.6％之间。

精细度：在重复性条件下获得的两次测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5％ 。

第二篇 高效液相色谱荧光法

8 原理

试样中褪黑素经甲醇反复提取，制成甲醇溶液，按一定比例进展稀释后，注入高效液相色谱仪，经反相色谱别离，以荧光检测器进展检测，根据保存时间定性和与标准品峰面积比拟进展定量。 9 试剂

9．1 甲醇：重蒸。

9．2 褪黑素标准品：纯度为99.7％。

DOC

9．2．1 储藏溶液：精细称取褪黑素标准品0.0100g，用甲醇溶解并配成1g/L的储藏

溶液，于-20℃保存。

9．2．2 使用溶液：使用前精细量取一定量标准品储藏溶液，根据褪黑素在仪器上的响应情况，用甲醇稀释成标准使用溶液。 10 仪器

10．1高效液相色谱仪：附荧光检测器和微处理机。 10．2离心机 10．3超声波清洗机

11 试样制备

片剂研细备用；胶囊内容物混合均匀备用。

12 分析步骤 12．1提取

精细称取试样0.2000g于5mL的刻度试管中，加甲醇约3mL，超声振荡10min，离

心，取上清液于10mL容量瓶中，再加甲醇约3mL于残渣中，按前述方法重复提取2次，合并上清液，加甲醇至刻度，摇匀。取此溶液适量，用甲醇稀释并定容，制成试样溶液待测。 12．2测定

DOC

12．2．1高效液相色谱条件

12．2．1．1色谱柱：Cl8 4.6mm×250mm不锈钢柱。 12．2．1．2流动相：甲醇。 12．2．1．3流速：1mL／min。 12．2．1．4进样量：10L

12．2．1．5检测器：荧光检测器，激发光波长286nm，发射光波长352nm。 12．2．2色谱分析

将仪器调至最正确状态后，分别将10L标准溶液与净化后试样液注入色谱仪中，以保存时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比拟定量．本方法线X性围为0.05-0.50ng。

13 分析结果的表述 13.1 计算

m1×V2×1000

X＝---------------× n…………………………………………〔2〕 m×V1×1000

式中：X - 试样中褪黑素的含量，mg/kg； m1- 被测样液中褪黑素的含量，ng； m - 试样重量，g； V1- 样液进样体积，L； V2- 试样稀释液总体积，mL

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n - 稀释倍数

13.2 结果表示：计算结果保存二位有效数字。

14 技术参数

准确度：本方法的回收率在93.4％～103.7％之间。

精细度：在重复性条件下获得的两次测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%.

附：保健食品成效成分检验方法协作组提供的检验方法

1. 保健食品中人参总皂甙的测定

Determination of total ginsenosides in health food

1试剂 1.1Amberlite-XAD-2大孔树脂，Sigma化学公司、U. S. A.。

1.2正丁醇分析纯。 1.3乙醇分析纯。

1.4中性氧化铝层析用，100-200目。

1.5人参皂甙Re购自中国药品生物制品检定所。

1.6香草醛溶液 称取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100mL。 1.7高氯酸分析纯 1.8冰乙酸分析纯

1.9人参皂甙Re标准溶液：准确称取人参皂甙Re标准品0.020g，用甲醇溶解并定容至10.0mL，即每毫升含人参皂甙Re2.0mg。

2仪器 2.1比色计

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2.2层析柱

3实验步骤 3.1试样处理

3.1.1固体试样：称取1.000g左右的试样〔根据试样含人参量定〕，放100mL容量瓶中，加少量水，超声30min，再用水定容至100mL，摇匀，放置，吸取上清液1.0mL进展柱层析。

3.1.2液体试样：含乙醇的补酒类保健食品，吸取1.0mL试样放水浴挥干，用水浴溶解残渣，用此液进展柱层析。

非乙醇类的液体试样：吸取1.0mL试样〔假设浓度高、或颜色深，需稀释一定体积后再取1.0mL〕进展柱层析。

3.2柱层析：用10mL注射器作层析管，内装3cmAmberlite-XAD-2大孔树脂，上加1cm中性氧化铝。先用25mL70%乙醇洗柱，弃去洗脱液，再用25mL水洗柱，弃去洗脱液，准确参加1.0mL已处理好的试样溶液〔见3.1〕，用25mL的水洗柱，以洗去糖份等水溶性杂质，弃去洗脱液，用25mL70%乙醇洗脱人参皂甙，收集洗脱液于蒸发皿中，放水浴挥干。以此作显色用。

3.3显色：在上述已挥干的蒸发皿中准确参加0.2mL5%香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣都溶解，再加0.8mL高氯酸，混匀后移入5mL带塞刻度离心管中，放在60°C以下的水浴上加温10min，取出，冰浴冷却后，准确参加冰乙酸5.0mL，摇匀后，以1cm比色池于560nm波长处与标准管一起进展比色测定。

3.4标准管：吸取人参皂甙Re标准溶液〔2.0mg/mL〕100l放蒸发皿中，放在水浴挥干〔低于60C〕，或热风吹干〔勿使过热〕，以下操作从“3.2柱层析…〞起，与试样一样。测定吸光度值。

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4计算：

A1V100 1

X=———×C×——×————×————

A2m 10001000

式中：

X：试样中人参总皂甙量〔以人参皂甙Re计〕，g/100g; A1：被测液的吸光度值， A2：标准液的吸光度值， C：标准管人参皂甙Re的量，g V：试样稀释体积，mL

m：试样质量，g。

计算结果保存二位有效数字。

2. 保健食品中总黄酮的测定

Determination of total flavonoid in health food

1试剂 1.1 聚酰胺粉 1.2 芦丁标准溶液：

称取5.0mg芦丁，加甲醇溶解并定容至100mL，即得50g/mL。 1.3 乙醇:分析纯。 1.4 甲醇:分析纯。

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2 分析步骤

2.1 试样处理：称取一定量的试样，加乙醇定容至25mL，摇匀后，超声提取20min，放置，吸取上清液1.0mL，于蒸发皿中，加1g聚酰胺粉吸附，于水浴上挥去乙醇，然后转入层析柱。先用20mL苯洗，苯液弃去，然后用甲醇洗脱黄酮，定容至25mL。此液于波长360nm测定吸收值。同时以芦丁为标准品，测定标准曲线，求回归方程，计算试样中总黄酮含量。 2.2 芦丁标准曲线：

吸取芦丁标准溶液：0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于10mL比色管中，加甲醇至刻度，摇匀，于波长360nm比色。求回归方程，计算试样中总黄酮含量。 3 计算和结果表示：

A ×V2 X = _____________________________ V1× M× 1000 式中：

X ___ 试样中总黄酮的含量, mg/100g ； A ___ 由标准曲线算得被测液中黄酮量,g ； M ___ 试样质量 , g； V1____ 测定用试样体积, mL； V2 ___ 试样定容总体积, mL 。 计算结果保存二位有效数字。

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3. 壳聚糖的游离氨基测定与脱乙酰度的计算

取壳聚糖0.5g加0.3mol的盐酸标准溶液20mL搅拌使其完全溶解。加甲基橙作指示剂，用0.1mol的氢氧化钠标准溶液滴定，滴定使试液由红色变为桔黄色止。

计算公式〔1〕： M1V1—M2V2

氨基含量 = ———————× 16 ×100% W×1000 式中：M1：盐酸浓度，mol/L

V1：盐酸用量，mL M2：氢氧化钠浓度，mol/L V2：氢氧化钠滴定用量，mL W：壳聚糖质量，g 16：氨基〔NH2〕摩尔质量

计算公式〔2〕：

脱乙酰度 = 100%—氨基含量

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4. 蚓激酶活性的测定方法

由于蚓激酶粉既具有激活纤维蛋白溶酶原变为纤维蛋白溶酶，从而溶解血栓，同时又能直接溶解血纤维蛋白，尿激酶只起激酶性质，目前还无法找到一个适宜的试样作为标准对照品，故参照尿激酶琼脂糖—纤维蛋白平板法，制定了纤维蛋白平板法,采用直接测定纤维蛋白板中溶解纤维蛋白圈的大小来衡量蚓激酶粉的质量好坏。

a. 试剂配制：

（1）0. 06M pH7.8磷酸盐缓冲液〔PBS〕

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称取Na2HPO4·12H2O21.4g，NaCl5.26g，加水900mL，用1N HCl调至pH7.8后，补水至1000mL。

〔2〕〔牛〕纤维蛋白原〔70μ/瓶〕

取70μ纤维蛋白原，溶于20mL PBS〔3.5μ/mL〕中，水浴微热使溶。 〔3〕〔牛〕纤维蛋白溶酶原〔12μ/瓶〕

取12μ纤维蛋白溶酶原，参加12 mL PBS〔1酪蛋白单位/毫升〕使溶，

同时取3mL。

〔4〕〔牛〕凝血酶〔70μ/瓶〕

取70μ凝血酶，参加7 mL PBS〔10μ/mL 〕，同时取3mL。

〔5〕称琼脂糖330mg，加22mL PBS，加热使溶后体积变为20 mL,放55ºC水浴中使之恒温待用。

b. 纤维蛋白板的制作：

将(2)、(5)、(3)、(4)按顺序依次参加混匀后，迅速倒入水平放置的〔7.5×22.5cm〕平板

中，假设有气泡，可在未凝固之前，用小钢铲将气泡赶走，待其凝固后，盖上盖，放4ºC冰箱1小时后，即可使用。此板即为标准纤维蛋白板。

c. 蚓激酶粉的活力的测定：

用直径为3mm的不绣钢小管，在纤维蛋白板上打假设干个小孔，称取蚓激酶粉假设干〔3-10mg〕，加蒸馏水配成1mg/mL的浓度，使其充分溶解，取溶液部份10μL点入每个小孔中，将板水平放37ºC恒温箱中保温18个小时后，测得溶圈直径〔mm〕。

按以下公式计算溶圈面积S=〔D/2〕2×3.14

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蚓激酶粉的活性=S×100〔μ/mg〕

5. 乙醚不溶物、丙酮不溶物的检测方法按SB/T 10206—94 磷脂的质量标准执行

6. 角鲨烯可参照脂肪酸的检测方法进展测定

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