实验相关材料

PFK:

1. 粗提液的制备

约0.1克叶片+1ml提取缓冲液，低温研磨

提取缓冲液：a.50mM Hepe-tris（pH7.8）;

b.3mM Mgcl2;

c.1mM EDTA;

d.1mM phenylmethylsulfonyl fluoride;

e.1mM dithiothreitol.

4℃下，12000g离心20min。

在室温18℃，取0.2ml上清液+1.8ml分析液在比色皿中，进行反应。加分析液后开始在340nm处测光吸收，持续测定6min。

分析液：a.50mM Hepes-tris(pH7.8);

b.5mM Mgcl2;

c.5mM fructose-6-phosphate;

d.0.1mM NADP+；

e.1mM ATP;

f.1unit addolase;

e.10unit triose.

G6PDH测定

G6PDH活性=（G6PDH+6PGDH）活性-6PGDH活性

约0.1克叶片+1ml提取缓冲液，研磨

提取缓冲液：a.50mM Hepe-tris（pH7.8）;

b.3mM Mgcl2;

c.1mM EDTA;

d.1mM phenylmethylsulfonyl fluoride;

e.1mM dithiothreitol.

4℃下，12000g离心20min。

在室温18℃，取0.2ml上清液+1.8ml分析液在比色皿中，进行反应。加分析液后开始在340nm处测光吸收，持续测定6min。

（G6PDH+6PGDH）分析液：a.50mM Hepe-tris（pH7.8）;

b.3mM Mgcl2;

c.0.5mM D-glucose-6-phosphate-disodium salt;

d.0.5mM 6-phosphogluconate;

e.0.5mM NADPNa2。

6PGDH分析液：a.50mM Hepe-tris（pH7.8）;

b.3mM Mgcl2;

c. 0.5mM 6-phosphogluconate;

d.0.5mM NADPNa2。

利用HPLC测酶量

利用real-time PCR 测定酶mRNA表达情况

干旱处理

2%，5%，10%，20%的PEG处理液（处理液中添加10mM的NaHco3,pH8.3）

取样：12月12日(1 week)，每梯度取样26份（〉0.1g）;

12月19日(2 weeks)，每梯度取样26份（〉0.1g）